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miR-125a-5p在不同分化程度结直肠癌中表达水平的研究
目的 分析研究miR-125a-5p在不同分化程度结直肠癌(CRC)中的表达水平,探讨其对不同分化CRC的诊断意义.方法 采用实时荧光定量PCR分析miR-125a-5p在26例不同分化程度CRC患者肿瘤和瘤旁组织中的表达水平,比较miR-125a-5p在肿瘤和瘤旁组织中表达水平的差异.通过受试者特征曲线(ROC)分析miR-125a-5p作为诊断标志筛查CRC患者的特异性和敏感性.结果 相对瘤旁正常组织,miR-125a-5p在高、中分化CRC组织中的表达水平均明显下降,其中在高分化肿瘤样本中的表达水平下降了近300％(P=0.047),在中分化CRC中下降超过500％(P=0.000).miR-125a-5p对筛查中分化CRC具有较高的敏感度和特异度,分别达到80.00％、90.00％.结论 不同分化程度CRC中miR-125a-5p表达水平均明显下降,提示miR-125a-5p在CRC的分化发展中具有重要作用.miR-125a-5p具有作为CRC临床筛查指标的潜能.
关键词： 结直肠肿瘤 miR-125a-5p 分化程度 诊断 -
miR-125a-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响
目的 探讨miR-125a-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法 荧光定量PCR检测胰腺癌组织中miR-125a-5p的表达水平,细胞计数试剂盒-8检测下调miR-125a-5p水平对胰腺癌细胞生长的影响,流式细胞术检测下调miR-125a-5p表达水平对胰腺癌细胞周期和凋亡的影响,软琼脂集落形成实验评价miR-125a-5p在胰腺癌细胞恶性转化过程中的作用.结果 miR-125a-5p在胰腺癌组织的表达高于癌旁正常组织(P＜0.05).下调miR-125a-5p表达水平后,胰腺癌细胞系Pane-1和MIA PaCa-2的生长受到抑制(P＜0.05),早期凋亡率分别增加13.6％和11.0％ (P ＜0.05),细胞集落数目分别下降27.3％和27.8％ (P ＜0.05),Pane-1细胞S期细胞百分比降低11.8％ (P ＜0.05).结论 miR-125a-5p在胰腺癌组织中高表达,下调miR-125a-5p表达水平使胰腺癌细胞生长受到抑制,集落形成能力下降,细胞周期受到阻滞,凋亡比例增加,提示miR-125a-5p在胰腺癌中发挥癌基因的作用.
关键词： 胰腺癌 miR-125a-5p 癌基因 -
miR-125a-5p对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响
目的:研究miR-125a-5p对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响.方法:通过慢病毒转染技术将含miR-125a-5p的质粒转入SKOV3细胞中,经嘌呤霉素筛选建立稳定表达mi-125a-5p的SKOV3细胞株.通过实时定量荧光RT-PCR验证miR-125a-5p的表达情况,MTT、流式技术、Transwell、划痕实验检测过表达miR-125a-5p后对SKOV3细胞增殖、凋亡、侵袭及转移能力的影响.结果:过表达miR-125a-5p后,SKOV3细胞增殖能力较对照组有显著提高;流式细胞检测显示过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞S期细胞增多,G0/G1期细胞及细胞凋亡率减少;Transwell和划痕实验显示过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞侵袭和迁移能力明显高于对照组.结论:SKOV3细胞miR-125a-5p过表达可能通过减少G0/G1期细胞及细胞凋亡率从而促进细胞增殖、侵袭和迁移能力.
关键词： miR-125a-5p 过表达 卵巢癌SKOV3 增殖 侵袭 -
miR-125a-5p通过PI3K/Akt/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭与转移
目的 探讨miR-125a-5p抑制乳腺癌细胞侵袭与转移的潜在机制.方法 采用实时荧光定量PCR检测组织及细胞中miR-125a-5p的表达量;利用瞬时转染技术将过表达质粒转染到MDA231中,Transwell侵袭实验检测miR-125a-5p对各组细胞侵袭的影响;Western blot检测各组细胞Akt的磷酸化情况,以及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、MMP-9的表达量.结果 通过临床标本的相关检测发现,miR-125a-5p在乳腺癌组织中的表达量明显低于癌旁相对正常组织,并且与淋巴结转移等有关.体外细胞培养实验发现,过表达miR-125a-5p细胞组的侵袭能力明显降低,Akt的磷酸化明显减弱,并且MMP-2和MMP-9表达量下降;而同时过表达GRB相关蛋白2(GRB-associated binding protein 2,GAB2)和miR-125a-5p细胞组的侵袭能力明显增强,Akt的磷酸化明显增强,并且MMP-2和MMP-9表达量明显升高,揭示了GAB2和miR-125a-5p共同通过PI3K/Akt通路影响MMP-2和MMP-9的表达.结论 miR-125a-5p能够通过PI3K/Akt/MMP信号通路,抑制乳腺癌细胞的侵袭与转移.
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miR-125a在胃癌组织中的表达及临床意义
探讨miR-125a在胃癌中的表达及临床意义.选取2014年7月-2015年12月我院收治的50例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织.采用RT-PCR技术检测miR-125a-3p和miR-125a-5p的表达水平.胃癌组织中miR-125a-3p、miR-125a-5p表达量均低于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0 05).胃癌组织中miR-125a-3p、miR-125a-5p的表达与分化程度、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移有关(P＜0.05).随着患者肿瘤恶性程度的增加,miR-125a-3p、miR-125a-5p的表达不断降低,胃癌患者在miR-125a-3p、miR-125a-5p表达水平方面,肿瘤直径≤5 cm高于肿瘤直径＞5cm、临床分期Ⅰ～Ⅱ期高于Ⅲ～Ⅳ期、无淋巴结转移高于淋巴结转移,且差异均有统计学意义(P＜0 05).胃癌组织中miR-125a-3p与miR-125a-5p的表达呈正相关(r=0.397,P=0.016).胃癌组织中miR-125a 低表达;miR-125a的表达与胃癌分化程度、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移有关;miR-125a在胃癌发病、进展中起类似于抑癌基因的作用.
关键词： 胃癌 miR-125a-3p miR-125a-5p -
血浆miR-125a-5p在肝纤维化患者中的表达及意义
目的 探讨血浆miR-125a-5p在肝纤维化患者中的表达及意义.方法 收集50例健康志愿者及130例慢性乙型肝炎患者的血浆进行miR-125a-5p实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测.结果 相对于正常组,肝纤维化S1-S4组的miR-125a-5p显著增加(P＜0.05),且纤维化越严重,miR-125a-5p的表达量就越高(P＜0.05).患者组中肝硬化患者经扶正化瘀等治疗后,治疗后第7d及第30 d复查miR-125a-5p表达量较治疗前明显减低(P＜0.05),且随着治疗的延长,miR-125a-5p的表达表现为持续下降(P＜0.05).相关性分析显示miR-125a-5p表达与child-pugh分级呈现出高度正相关(相关系数r=0.841,P＜0.01).深入研究显示,患者组中HBeAg(+)患者miR-125a-5p表达量明显高于HBeAg(-)患者(P＜0.05).结论 血浆miR-125a-5p的测定有助于肝纤维化的诊断及分期,并对肝硬化患者的病情估计及预后治疗有着一定的帮助.
关键词： 肝纤维化 miR-125a-5p 实时定量PCR -
母体表达基因3通过miR-125a-5p/TET2途径抑制HepG2细胞载脂蛋白(a)的表达
目的 研究发现母体表达基因3(MEG3)对HepG2细胞载脂蛋白(a)[Apo(a)]表达的调控作用及其机制.方法 用荧光素酶报告系统分析MEG3与miR-125a-5p的靶向性结合.采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测高表达Apo(a)的HepG2细胞和低表达Apo(a)的SMMC7721细胞中MEG3的表达情况;向HepG2细胞转染MEG3,Western blot和qRT-PCR检测Apo(a)、TET2表达情况;采用小干扰RNA技术沉默TET2的表达.结果 ①MEG3与hsa-miR-125a-5p能互补性结合,荧光素酶报告基因系统分析结果证实了MEG3与hsa-miR-125a-5p结合的存在.②miR芯片结果表明,在HepG2细胞中,hsa-miR-125a-5p表达水平升高,是对照组的近1.5倍,MEG3在HepG2细胞和SMMC7721细胞中均有表达,但前者MEG3的表达水平显著低于后者.③MEG3抑制Apo(a)表达.④MEG3下调miR-125a-5p的表达,上调TET2的表达;miR-125a-5p的mimics可逆转MEG3对Apo(a)的下调作用及TET2的表达,但可被miR-125a-5p的抑制剂逆转;TET2沉默可逆转MEG3对Apo(a)的下调作用.结论 MEG3通过miR-125a-5p/TET2途径下调HepG2细胞Apo(a)的表达.
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MicroRNA-125a-5p表达对弥漫大B细胞淋巴瘤耐药及临床预后的影响
目的 检测microRNA-125a-5p(miR-125a-5p)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达情况,探讨其对肿瘤耐药及预后的影响.方法 收集DLBCL石蜡标本及其临床病理资料并随访;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织中miR-125a-5p的mRNA相对表达量;用免疫组织化学染色检测肿瘤组织中P糖蛋白(P-gp)、细胞增殖核抗原(Ki-67)蛋白的表达;分析miR-125a-5p与耐药蛋白P-gp表达的关系,以及该表达对DLBCL肿瘤细胞增殖和临床病理特征及预后的影响.结果 MiR-125a-5p在DLBCL组中的表达高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);其表达量与患者乳酸脱氢酶(LDH)、免疫表型相关(P <0.05),与年龄、性别、原发部位、临床分期、国际预后指数(IPI)均无相关(P >0.05);miR-125a-5p高表达组P-gp蛋白阳性率高于低表达组;Kaplan-Meier及Log-rank生存分析显示低表达miR-125a-5p患者的总生存期(OS)及无复发生存期(RFS)均高于高表达组,COX风险比例模型分析显示Ann Arbor分期Ⅲ、Ⅳ期及miR-125a-5p高表达均可作为DLBCL患者预后不良的因素.结论 miR-125a-5p与DLBCL耐药蛋白P-gp表达相关,miR-125a-5p高表达及Ann Arbor分期Ⅲ、Ⅳ提示DLBCL患者预后较差,可作为潜在的DLBCL预后预测分子.
关键词： 大B细胞淋巴瘤 miR-125a-5p P-gp 实时荧光定量聚合酶链反应 预后 -
microRNA －10b 与 microRNA －125a 在大肠癌组织及细胞株中的表达及意义
目的：探讨microRNA－10b（miR－10b）及microRNA－125a－5p（miR－125a－5p）在大肠癌组织及细胞株中的表达情况及其临床意义。方法应用实时定量聚合酶链反应（ RT－qPCR）方法检测37例大肠癌组织和癌旁正常组织及8种大肠癌细胞株（ Caco－2、DLD1、HCT116、HT29、LOVO、SW480、SW620、SW116）中的表达情况并分析其与临床病理资料的关系。结果 miR－10b及miR－125a－5p在37例大肠癌组织中的表达均明显低于正常对照组织（P＜0.01）；miR－10b的表达量与临床病理资料均无关（P＞0.05）；miR－125a－5p的表达与分化程度相关（P＜0.05），与性别、年龄、肿瘤部位等临床病理资料均无关（P＞0.05）。 miR－10b在除HT29外其余7种大肠癌细胞株中的表达明显低于正常细胞组织（P＜0.05）miR－125a－5p在8种大肠癌细胞株中的表达明显低于正常细胞组织（P＜0.05）。结论 miR－10b及miR－125a－5p在大肠癌的发生过程中发挥类似抑癌的作用；miR－125a－5p表达水平与分化程度相关，可帮助判断大肠癌恶性程度及推测预后。
关键词： 大肠癌 miR-10b miR-125a-5p RT-qPCR 细胞株 -
弥漫大B细胞淋巴瘤中miR-125a-5p的表达及其意义
目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中miR-125a-5p的表达水平及与临床病理特征、预后和NF-κB/p65、Bcl2、Caspase3、Ki-67蛋白表达的关系.方法 收集84例DLBCL病例,以同期10例淋巴结反应性增生组织作为对照,采用SYBR Green real-time逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测其miR-125a-5p的表达水平,免疫组化检测NF-κB/p65、Bcl2、Caspase3、Ki-67蛋白表达,收集临床病理资料并随访,结合患者临床资料及预后进行统计学分析.结果 在DLBCL样本中miR-125a-5p表达量上调,其表达量是淋巴结反应性增生的(4.99±8.22)倍(P=0.002);miR-125a-5p在DLBCL中的上调与Hans分型non-GCB亚型存在相关性(P=0.027);miR-125a-5p在DLBCL中的上调表达与NF-κB/p65、Bcl2、Caspase3蛋白表达存在显著相关性(P值分别为0.031、0.030、0.022);在DLBCL中Hans分型non-GCB亚型与NF-κB/p65蛋白具有显著相关性(P=0.002);Kaplan-Meier生存分析显示,miR-125a-5p的高表达与DLBCL患者预后有关(P=0.038);多因素Cox分析显示,miR-125a-5p的高表达可能是DLBCL患者预后的独立危险因素(P=0.013).结论 miR-125a-5p可能对DLBCL具有潜在的诊断价值;在DLBCL中miR-125a-5p上调作用可能影响NF-κB/p65的活化,尤其在Hans分型non-GCB亚型作用明显;在DLBCL中miR-125a-5p的上调可能通过凋亡途径而影响肿瘤的发生发展;miR-125a-5p的高表达可能与DLBCL患者不良预后有关,可作为DLBCL患者预后的独立危险因素.
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miR-125a-5p对子宫内膜癌RL95-2细胞增殖凋亡的影响
目的:探讨miR-125a-5p对子宫内膜癌RL95-2细胞增殖、凋亡的影响及可能作用机制.方法:取对数生长期RL95-2细胞随机分为未转染组、mimic阴性对照组和mimic转染组,做相应处理后24h,采用Real-time PCR检测miR-125a-5p表达,MTT检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、cleaved caspase3、cytochrome C)和信号通路相关蛋白(p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR)的表达.结果:同mimic阴性对照组比较,mimic转染组中miR-125a-5p表达显著增加,细胞增殖抑制率和细胞凋亡率明显升高,Bax、cleaved caspase3表达水平显著上调,Bcl-2和线粒体cytochrome C、p-AKT、p-mTOR的表达水平明显下降.结论:miR-125a-5p能够抑制子宫内膜癌RL95-2细胞增殖,机制可能与其改变PI3 K/AKT/mTOR通路活性及调节凋亡相关基因有关.
关键词： miR-125a-5p 子宫内膜癌 RL95-2细胞 细胞增殖 细胞凋亡 -
Rab25基因3'UTR荧光素酶报告基因载体及突变体的构建
目的 针对Rab25基因3'端非翻译区(untranslated region,3'UTR)构建Rab25荧光素酶报告基因载体及突变体,为研究miR-125a-5p在肺癌耐药中调控其靶基因RAB25提供有效的工具.方法 PCR扩增包含Rab25的3'UTR的DNA片段,克隆至荧光素酶载体GV306,构建GV306/Rab25' UTR载体;通过TrgetScan Release 6.2查找Rab25与miR-125a-5p结合区域并设计突变序列,参照构建GV306/Rab25' UTR载体方法构建GV306/Rab25' UTR突变载体.结果 通过获得Rab25与miR-125a-5p的种子区域及侧翼部分120 ～ 126 nt,并上下延伸150 bp,合成Rab25' UTR,并且在120 ～ 126 nt区域设计突变序列,构建了GV306/Rab25 3'UTR及其突变载体.结论 成功构建了含Rab25基因3'UTR区的荧光素酶报告基因载体及突变体,为进一步研究Rab25在非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药中的作用打下基础.
关键词： Rab25 miR-125a-5p 荧光素酶报告基因质粒 非小细胞肺癌 基因调节 -
缺氧损伤后血红素加氧酶1截短体(HO-1C△23)上调miR-125a-5p降低血脊髓屏障的通透性
目的 检测微小RNA 125a-5p(miR-125a-5p)在血红素加氧酶1截短体(HO-1C△23)调节缺氧损伤时血脊髓屏障(BSCB)中的作用.方法 用HCMEC/D3细胞与星形胶质细胞在TranswellTM小室构建体外BSCB模型,并用氯化钴制备BSCB缺氧模型.实验分为空白组、空载病毒组、HO-1C△23组(Lv-HO-1C△23)、miRNA阴性对照组(Lv-HO-1C△23联合miR-NC处理)、miRNA模拟物组(Lv-HO-1C△23联合miR-125a-5p mimics处理)和miRNA抑制物组(Lv-HO-1C△23联合miR-125a-5p inhibitor).用反转录PCR和实时定量PCR检测各组miR-125a-5p和紧密连接蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)和血管内皮钙黏附蛋白(VE-cadherin)的mRNA水平,Western blot法检测各组HO-1、ZO-1和occludin、VE-cadherin的蛋白水平;用辣根过氧化物酶(HRP)的溢出率评价体外BSCB的通透性.结果 HO-1C△23转染HCMEC/D3细胞的成功率约为70％,转染成功后HO-1C△23含量明显升高,且miR-125a-5p表达较空白组也明显上调.与空白组相比较,HO-1C△23组、miRNA阴性对照组和模拟物组ZO-1、occludin、VE-cadherin的mRNA和蛋白水平增加,HRP溢出率降低,而miRNA抑制物组中ZO-1、occludin、VE-cadherin的mRNA和蛋白水平降低,HRP溢出率升高;与HO-1C△23组相比,miRNA模拟物组ZO-1、occludin、VE-cadherin的mRNA和蛋白水平明显升高,HRP溢出率降低,而miRNA抑制物组ZO-1、occludin、VE-cadherin的mRNA和蛋白水平降低,HRP溢出率升高.结论 在缺氧损伤条件下,HO-1C△23通过上调miR-125a-5p表达,促进连接与黏附相关基因的转录与翻译,降低BSCB的通透性.
