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泮托拉唑对胃癌细胞MKN-45增殖与凋亡的影响
目的 探讨泮托拉唑对胃癌细胞MKN-45增殖与凋亡的影响及相关机制.方法 采用0、10、20、40 μg/ml的泮托拉唑处理MKN-45细胞48 h;MTT法检测细胞活力;Hoechst染色检测细胞形态;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及Cyclin E表达.结果 与0 μg/ml比较,10、20、40 μg/ml的泮托拉唑能明显降低MKN-45细胞活力(P﹤0.01),使细胞核发白,皱染,使细胞周期阻滞在G1期(P﹤0.01),下调Cyclin D1及Cyclin E的表达(P﹤0.01);与0 μg/ml比较,20、40 μg/ml的泮托拉唑能明显下调MKN-45细胞中Bcl-2的表达(P﹤0.01),上调Bax的表达(P﹤0.01).结论 泮托拉唑通过调控细胞周期蛋白及细胞凋亡相关蛋白表达抑制胃癌细胞MKN-45的增殖,并诱导细胞凋亡.
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胃癌细胞株MKN-45肿瘤干细胞中microRNA差异表达研究
目的筛选胃癌干性相关的mircoRNA( miRNA),探讨其差异表达的意义。方法体外成球实验筛选胃癌干细胞,应用miRNA芯片技术筛选spheroid及attachment培养胃癌细胞株MKN-45差异表达的miRNA。同时,选取10例新鲜胃癌组织及其癌旁组织运用qRT-PCR对差异表达的miRNA进行验证。运用靶基因预测软件预测差异表达miRNA可能的调控靶基因。结果筛选得到胃癌干细胞较胃癌细胞表达明显上调的miRNA共有7个,分别为miR-29a-3p、miR-21-5p、miR-22-3p、miR-4270、miR-483-5p、let-7b-3p、miR-34a-5p。7个miRNA在球体细胞与亲代贴壁细胞间的相对表达量存在明显差异。其中,miR-29a-3p、miR-21-5p、miR-22-3p、miR-4270、miR-483-5p的表达水平与芯片检测结果一致,符合率71%；let-7b-3p、miR-34a-5p的表达水平与芯片检测结果不一致。 MiRanda、TargetScan 及 Pictar 在线数据库的交集中,miR-27a-3p、miR-34a-5p、miR-21-5p、miR-4270、let-7b-3p以及miR-29a-3p可预测到靶基因,而miR-483-5p与 miR-16-5p未能预测到靶基因。结论miRNA在胃癌细胞株MKN-45肿瘤干细胞中存在特异性的表达谱,其差异表达的miRNA可能与胃癌耐药相关,可作为诊断胃癌和评判预后的重要标准,并为抵胃癌耐药提供可能靶点。
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E2F-1在胃癌细胞中高表达的意义
目的 通过转染实验观察E2F-1高表达对胃癌细胞株的影响,了解E2F-1与胃癌之间的联系.方法 构建E2F-1真核表达载体,转染MKN-45人胃癌细胞株,建立E2F-1高表达的胃癌细胞株模型;并通过克隆形成实验及绘制细胞生长曲线,观察E2F-1高表达对MKN-45细胞的影响.结果 与转染空质粒组相比,转染并表达了E2F-1的MKN-45细胞生长受到明显抑制.结论 E2F-1高表达能够抑制胃癌细胞MKN-45生长.
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乌骨藤化学成分及其抗肿瘤活性
目的 研究乌骨藤Marsdenia tenacissima化学成分及其抗肿瘤活性.方法 乌骨藤80％乙醇提取物的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇部位通过硅胶、大孔吸附树脂、Sephadex LH-20、ODS色谱柱进行分离纯化,根据波谱数据对所得化合物结构进行鉴定,再通过MTT法评价其抗肿瘤活性.结果 从中分离出10个化合物,分别鉴定为白桦脂酸(1)、乌骨藤苷H(2)、乌骨藤苷G(3)、乌骨藤苷I(4)、绿原酸(5)、野黄芩素四甲醚(6)、山柰酚4'-甲醚(7)、山柰酚(8)、β-谷甾醇(9)、胡萝卜苷(10).化合物8对胃癌细胞MKN-45和SGC-7901有较显著的抑制作用,IC50分别为48.87 μg/mL和54.71μg/mL.结论 化合物6～8为首次从该植物中分离得到,而且化合物8的抗肿瘤活性较强.
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丹参酮Ⅱa诱导人胃癌细胞MKN-45凋亡及对端粒酶活性的影响
目的 考察丹参酮Ⅱa(tanshinone Ⅱa,Tan Ⅱa)诱导人胃癌细胞的凋亡作用,以及对端粒酶活性的影响.方法 不同浓度TanⅡa处理人胃癌细胞株MKN-45后,显微镜下观察胃癌细胞形态变化,应用Annexin V/PI双重染色方法检测细胞凋亡比例,并用凋亡相关抗体检测通路情况,用RT-PCR以及TRAP-PCR法分别对胃癌细胞端粒酶基因hTert和端粒酶活性进行检测.结果 TanⅡa处理胃癌细胞后,DAPI染色显示,细胞核内染色质聚缩,细胞核碎裂并有凋亡小体产生,提示TanⅡa诱导胃癌MKN-45细胞凋亡.Annexin V/PI双染结果显示,凋亡比例随化合物浓度提高而增加,40μM下晚期凋亡比例达到(45.02±6.48)％.凋亡相关蛋白的检测显示,PARP和Caspase-3活化,细胞色素C水平增加,而Caspase-8则无显著变化.同时TRAP-PCR结果显示,Tan Ⅱa在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,并在40μM下显著抑制hTert基因的表达.结论 TanⅡa对人胃癌细胞具有明显诱导细胞凋亡作用,且可能通过激活内源性途径引起细胞凋亡.TanⅡa还可抑制端粒酶活性和hTERT基因表达,这些可能是其发挥抗癌作用的重要机制之一.
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雷帕霉素、RAD001抑制胃癌细胞株MKN-28、MKN-45细胞生长的实验研究
目的 探讨雷帕霉素(rapamycin)、RAD001(everolimus)对胃癌细胞株MKN-28、MKN-45细胞生长的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 体外培养人胃癌MKN-28、MKN-45细胞,给予雷帕霉素、RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布情况.结果 雷帕霉素、RAD001均可抑制MKN-28、MKN-45细胞生长,抑制作用具有时间依赖性,雷帕霉素作用于MKN-28、MKN-45两种细胞株72 h抑制率分别为23.40%、36.26%;RAD001作用于MKN-28、MKN-45两种细胞株72 h抑制率分别为25.12%、40.11%.72 h时RAD001组与阴性对照组、DMSO对照组相比,MKN-28、MKN-45细胞计数差异有显著性(P<0.05).RAD001作用24 h后MKN-28、MKN-45细胞周期发生改变,停滞在G0-G1期细胞比例增加.RAD001组与阴性对照组、DMSO对照组相比,MKN-45细胞周期差异有显著性(P<0.05),MKN-28细胞周期差异无显著性(P>0.05).结论 两种药物相比较,RAD001相对敏感;两株细胞相比较,MKN-45相对敏感.RAD001通过调节细胞周期进而抑制胃癌细胞的增殖.
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内皮抑素抑制小鼠低分化胃癌生长的实验研究
目的:研究人内皮抑素抑制小鼠低分化胃癌(MKN-45)的生长和转移的作用.方法:常规建立MKN-45小鼠肿瘤动物模型.将荷瘤小鼠(72只)随机分成四组,每组18只.对照组注射无菌生理盐水,治疗组分低、中、高剂量组.低剂量组皮下注射内皮抑素5mg/kg,中剂量组10mg/kg,大剂量组15mg/kg,每2天注射1次,共6周.第7周处死小鼠,测量原位肿瘤的直径、体积,计算抑瘤率,测定肿瘤细胞的增长指数及凋亡指数.结果:内皮抑素(低、中、高剂量治疗组)能明显抑制肿瘤的生长,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05);内皮抑素治疗组能降低肿瘤微血管密度,抑制肿瘤血管的形成,与对照组比较差异有显著性意义;治疗组肿瘤细胞凋亡指数明显上升,优于对照组(P<0.05).结论:内皮抑素通过抗肿瘤血管生成,促进肿瘤细胞凋亡,对肿瘤的生长和转移均有较强的抑制作用.
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microRNA-137对人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭的影响
目的 研究miR-137 过表达对人胃癌MKN-45 细胞迁移侵袭的影响. 方法 采用RT-PCR法检测5 株胃癌细胞和人胃黏膜上皮细胞( GES )中 miR-137 的表达. 构建miR-137慢病毒,并转染MKN-45细胞. 通过划痕实验、细胞侵袭小室检测和Transwell侵袭实验以分析过表达miR-137对MKN-45细胞迁移侵袭的影响. 结果 MKN-45 细胞中miR-137的表达丰度明显低于在 GES、MKN-74、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞,差异有统计学意义(P<0. 05). 同时成功构建micro up病毒感染的细胞组. 划痕实验结果显示,与空白对照组( CON组)和阴性对照组( NC组)比较, micro up组24、48 h后平均迁移率差异有统计学意义( P<0. 05 );细胞侵袭小室检测结果显示,与 CON组、NC组比较, micro up组的平均迁移率差异有统计学意义( P<0. 01 );Transwell侵袭实验结果显示,与CON组、NC组比较,micro up组平均迁移率差异有统计学意义( P<0. 01 ). 结论 miR-137过表达能明显抑制人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭能力,有可能成为胃癌治疗的新靶点.
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胃癌细胞株MKN-45裸鼠移植瘤模型的建立与应用
目的 建立低分化高转移性胃癌细胞株MKN-45裸鼠移植瘤模型,并观察该移植瘤对抗癌药物的敏感性.方法 5×106个MKN-45胃癌细胞接种于裸鼠右侧胁部脂肪垫下,观察成瘤情况.接种2周后,分别将荷瘤小鼠分为生理盐水对照组与化疗药物组,其中化疗药物组给予1 mg·kg-1紫杉醇与5 mg·kg-1氟尿嘧啶,1周1次,连续3周;生理盐水对照组则给予生理盐水.实验结束后采用HE染色观察移植瘤病理组织学特点,采用免疫组化法检测移植瘤的核增殖抗原Ki-67与波形蛋白(vimentin)及钙黏蛋白(E-cadherin)表达情况.结果 接种的12只裸鼠均荷瘤成功,且移植瘤成瘤时间早,肿瘤大小及形状较一致,并保持了原发肿瘤vimentin高表达与E-cadherin低表达等重要的生物学特征.使用临床抗癌药物紫杉醇与氟尿嘧啶联合处理3周,结果与生理盐水对照组相比,化疗组肿瘤生长速度明显放缓,肿瘤体积明显缩小,肿瘤组织Ki-67表达下降,新生血管减少,肿瘤细胞凋亡明显,但vimentin与E-cadherin表达变化不明显.结论 胃癌细胞株MKN-45裸鼠移植瘤模型建立成功,为开展胃癌发病机制及治疗药物药理作用等研究提供了理想的实验平台.
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盐霉素联合顺铂对人胃癌细胞MKN-45增殖和凋亡的影响
目的 观察盐霉素联合顺铂对人胃癌细胞MKN-45增殖和凋亡的影响并探讨其作用机制.方法 体外培养人胃癌细胞MKN-45至对数生长期,采用噻唑蓝(MTT)比色法分别检测盐霉素、顺铂及联合用药时细胞的增殖情况;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)凋亡试剂盒荧光染色观察细胞凋亡情况;Western blotting法检测NF-κB、caspase-3蛋白表达水平.结果 MTT法显示盐霉素、顺铂均可抑制细胞增殖(P＜0.05),联合给药比单药抑制效果更为显著(P ＜0.05);AO/EB荧光染色可见盐霉素、顺铂分别单药给药后,与对照组相比细胞凋亡形态明显,两药联合凋亡效果更为显著;Western blotting结果显示联合组与单药组和对照组相比NF-κB蛋白表达下降(P＜0.01),caspase-3蛋白表达升高(P＜0.01).结论 盐霉素可抑制胃癌细胞增殖,与顺铂联合应用可增强顺铂对人胃癌细胞MKN-45的抑制作用,其机制可能为抑制NF-κB活化,上调下游凋亡基因caspase-3的表达.
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5-氟尿嘧啶气雾对人胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡及周期的影响
目的 通过体外模拟5-氟尿嘧啶(5-Fu)腹腔气雾化疗环境,评价5-Fu雾化对人胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡及周期的影响.方法 运用自主研发的气雾化疗仪将5-Fu雾化,体外模拟腹腔气雾化疗环境,对胃癌细胞进行处理,维持气雾环境压力为8 mmHg,作用时间为30 min,并设生理盐水雾化作为对照,处理后用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期.结果 MTT结果显示,5-Fu气雾化疗组杀伤率显著高于生理盐水组[(31.13±3.51)%比(4.65±1.99)%,P<0.001];流式细胞结果显示,与生理盐水组相比,5-Fu气雾化疗组细胞凋亡率升高[(12.00±0.92)%比(2.65 ±0.52)%,P<0.001)],G1期细胞增多[(51.83±1.95)%比(36.41±2.33)%,P<0.001]、S期细胞减少[(16.72±2.36)%比(45.20±3.27)%,P<0.001],差异均有统计学意义.结论 5-Fu气雾能有效抑制胃癌细胞的增殖并诱导凋亡,使细胞阻滞于G1期,为气雾化疗的临床应用提供实验依据.
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MS-275通过上调ROS释放选择性杀伤胃癌细胞
目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275通过线粒体凋亡途径，选择性杀伤胃癌细胞的具体作用机制。方法：MS-275分别处理GES-1、MKN-45细胞，通过WST-1法检测细胞存活率，分析MS-275细胞毒性及选择性杀伤作用；通过流式细胞术检测线粒体膜电位变化，及ROS抑制剂对MS-275凋亡诱导作用的影响；Western blot、PCR分别检测处理后胃癌细胞中p21、p57、cyclin D1、cyclin E1、和TBP-2的mRNA及蛋白水平表达情况。结果：MS -275对正常胃黏膜上皮细胞GES -1存活率无显著性影响，但对胃癌细胞MKN-45影响显著（P＜0．05）。MS-275对胃癌细胞MKN-45线粒体膜电位影响不显著，但能够诱导ROS显著升高，ROS抑制剂显著降低由MS-275诱导的ROS释放。MS-275显著激活肿瘤抑制基因p21、p57、TBP-2以及细胞周期蛋白相关基因cyclin D1、cyclin E1的表达。结论：MS-275通过促进细胞周期阻滞因子、凋亡诱导基因、肿瘤抑制基因的表达，诱导ROS生成，选择性杀伤胃癌细胞。
