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碳酸酐酶Ⅱ在胰腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义
目的 探讨胰腺浸润性导管癌(IDC)中碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)蛋白和mRNA表达水平及其临床病理学意义.方法 应用免疫组化方法检测33例胰腺IDC组织及配对的癌旁组织石蜡标本CAⅡ蛋白表达水平,观察其与患者临床病理学参数的关系；再用Western blot和逆转录聚合酶链式反应RT-PCR检测12例冷冻保存的新鲜配对IDC组织、癌旁组织中CAⅡ蛋白和mRNA表达水平.结果 免疫组化结果显示:CAⅡ在11例胰腺IDC中呈高表达(33.3％),明显低于配对癌旁组织的表达水平(72.7％,t =6.275,P=0.000).CAⅡ的表达与胰腺IDC的发生部位(x2=0.992,P=0.319)、分化程度(x2=0.866,P=0.352)、TNM分期(x2=1.210,P=0.271)和淋巴结转移(x2=0.798,P=0.372)无明显相关性,但与患者预后的相关性接近统计学意义(x2=3.233,P=0.072).高表达CAⅡ的胰腺IDC患者中位生存时间为540 d,低表达CAⅡ者为320 d.RT-PCR和Western blot结果显示,CAⅡ在胰腺IDC中的蛋白和mRNA表达均低于配对癌旁组织(t=3.399,P=0.006；t =2.281,P =0.043).结论 CAⅡ在胰腺IDC中表达下调,并可能与患者预后相关.
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碳酸酐酶靶向性抑制剂甲苯磺烷唑胺对机体缺氧耐力的影响
目的:探讨甲苯磺烷唑胺对提高小鼠缺氧耐力的影响及其机制.方法:将健康昆明小鼠放入缺氧装置瓶中,测定密闭缺氧存活时间;将雄性昆明小鼠放入梯形笼中,置于小动物低压舱进行减压低氧,测定小鼠减压低氧存活时间;观察小鼠组织碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)活性改变.采用预防给药方式,研究碳酸酐酶靶向性抑制剂甲苯磺烷唑胺对提高低氧耐力的作用.结果:①在提高小鼠密闭缺氧耐力方面,甲苯磺烷唑胺6.25 mg/(kg·d)、12.5 mg/(kg·d)、25 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)、200 mg/(kg·d)和400 mg/(kg·d)剂量组的存活时间分别为(27.38±4.63、29.53±4.43、29.67 ± 7.28、31.55±6.34、32.45±6.65、36.81±7.24和35.41±4.20)min,与空白对照组(22.90±3.19)nmin比较,显著延长(p<0.05,P<0.01);与同等剂量醋氮酰胺组(24.54±3.17、22.70±3.04、22.67±2.99、23.93±0.96、27.87±5.06、30.79±5.12和35.14±6.46)min比较,存活时间明显延长;甲苯磺烷唑胺和醋氮酰胺小有效剂量分别是6.25及100 mg/(kg·d),甲苯磺烷唑胺是醋氮酰胺效价的16倍.②在提高小鼠减压低氧耐力方面,甲苯磺烷唑胺中、高剂量组小鼠的存活时间为(24.82±3.92、28.27±5.89)min,明显长于空白对照组[(21.96±2.51)min,P < 0.05];高剂量甲苯磺烷唑胺组的存活时间与醋氮氮酰组(23.11±3.71)min比较,明显延长(P<0.05).③与正常对照组相比,甲苯磺烷唑胺25 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)和200 mg/(kg·d)剂量组能显著抑制肾碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)活性(P<0.05,P<0.01);甲苯磺烷唑胺100mg及200mg剂量组能显著抑制脑碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)活性(P < 0.05).结论:甲苯磺烷唑胺具有提高低氧耐力作用,其效价和效能均优于醋氮酰胺,其机制可能与抑制组织碳酸酸酐酶活性有关.
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巴戟天与雌激素对骨质疏松大鼠破骨细胞RANK和CAⅡ的表达影响
目的:探讨巴戟天、雌激素对骨质疏松大鼠破骨细胞核激活因子κβ受体(RANK)和碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)的表达水平间关系.方法:选择月龄为4个月的SPF级成年健康雌性SD大鼠,建立去势大鼠骨质疏松模型,分离大鼠原代破骨细胞并分为6组:空白对照组、17-雌二醇10-6 mmol/L组、0.1 g/d巴戟天组、0.5 g/d巴戟天组、1.0 g/d巴戟天组、17-雌二醇10-6 mmol/L联合1.0 g/d巴戟天组进行培养,观察比较各组CAⅡ、RANK mRNA表达等指标差异.结果:17-雌二醇10-6 mmol/L组、0.5 g/d巴戟天组、1.0 g/d巴戟天组、17-雌二醇10-6 mmol/L联合1.0 g/d巴戟天组破骨细胞数量均较空白对照组明显减少,而17-雌二醇10-6 mmol/L联合1.0 g/d巴戟天组减少明显(P＜0.05),0.1 g/d巴戟天组与对照组无显著差异(P＞0.05);17-雌二醇10-6 mmol/L组、0.5 g/d巴戟天组、1.0 g/d巴戟天组、17-雌二醇10-6 mmol/L联合1.0 g/d巴戟天组骨吸收陷窝面积相均低于空白对照组(P＜0.05),而17-雌二醇10-6 mmol/L联合1.0 g/d巴戟天组骨吸收陷窝面积明显低于其他组(P＜0.05),0.1 g/d巴戟天组与对照组无显著差异(P＞0.05);17-雌二醇10-6 mmol/L组、0.5 g/d巴戟天组、1.0 g/d巴戟天组、17-雌二醇10-6 mmol/L联合1.0 g/d巴戟天组CAⅡ、RANK mRNA基因表达水平明显低于空白对照组(P＜0.05),0.1 g/d巴戟天组与对照组无显著差异(P＞0.05),17-雌二醇10-6 mmol/L组和0.5 g/d巴戟天组RANK mRNA基因、CAⅡmRNA基因表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),17-雌二醇10-6 mmol/L联合1.0 g/d巴戟天组CAⅡ、RANK mRNA基因表达水平低(P＜0.05).结论:巴戟天联合雌激素能有效诱导骨质疏松大鼠破骨细胞内RANK和CAⅡ处于低表达状态,从而有效预防骨质疏松的发生.
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碳酸酐酶Ⅰ、Ⅱ在结直肠癌中的表达及意义
目的 探讨碳酸酐酶Ⅰ、Ⅱ(CA Ⅰ、CAⅡ)的表达与结直肠癌发生、发展以及临床病理特征的关系.方法以免疫组织化学法检测CA Ⅰ、CAⅡ在配对的55个正常结直肠黏膜、27个息肉、64个结直肠癌及20个转移淋巴结中的表达,比较各组间表达差异.分析CAⅠ、CAⅡ的表达与结直肠癌的分化、临床病理分期和淋巴结转移(LNM)之间的关系.结果CA Ⅰ、CAⅡ的表达在息肉、结直肠癌中逐步降低,与正常黏膜比较,差异有统计学意义(P＜0.05),在转移淋巴结中表达与配对原发灶相似(P＞0.05).CA Ⅰ、CAⅡ在结直肠癌中的表达与分化程度和TNM分期无关(P＞0.05).结论CA Ⅰ、CAⅡ的表达下调是结直肠癌发生中的早期事件,与淋巴结转移无关.
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充血性心力衰竭患者血清抗碳酸酐酶Ⅱ和Ⅲ自身抗体检测的意义
目的：使用已建立的方法检测充血性心力衰竭（CHF）患者血清中的抗碳酸酐酶Ⅱ和Ⅲ自身抗体、抗氧化物及细胞因子水平，初步评价其临床意义。方法选取58例3个月～1年前曾发生心肌梗死的CHF患者和58名健康对照者，测定其血清抗碳酸酐酶Ⅱ和Ⅲ自身抗体、红细胞沉降率（ESR）、超氧化物歧化酶（SOD）等5种抗氧化物和白细胞介素2（IL-2）等5种细胞因子的水平。结果 CHF患者血清抗碳酸酐酶Ⅱ自身抗体和ESR水平显著高于对照组（P＜0．05），SOD、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、过氧化氢酶（CAT）和总抗氧化能力（TAC）显著低于对照组（P＜0．05），丙二醛（MDA）水平显著高于对照组（P＜0．05）。CHF患者血清的IL-2和白细胞介素17（IL-17）水平较对照组显著升高（P＜0．05），白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和γ干扰素（IFN-γ）与对照组差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 CHF患者可能存在自身免疫的现象，IL-2、IL-17和抗氧化能力的检测可能作为判断抗碳酸酐酶Ⅱ抗体出现的指标。
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流体剪切应力作用时间对鼠破骨细胞碳酸酐酶的影响
目的:观测流体剪切应力作用不同时间对鼠破骨细胞碳酸酐酶Ⅱ(CA Ⅱ)mRNA表达的影响.方法:对破骨细胞爬片施加2.9dyne/cm2的流体剪切应力,按作用时间不同分为0 min、15 min、30 min、60 min和120 min组,采用实时荧光定量PCR检测CA Ⅱ mRNA表达水平,采用SPSS 12.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果:对照组、15min、30min、60min和120min组CA Ⅱ mRNA表达量分别为7.88±0.09、11.14±0.12、15.83±0.18、1.94±0.02和1.37±0.01(E+5个拷贝数),任何两组间均见显著性差异(P<0.05).结论:在试验条件下,随着加载时间的增加,CA Ⅱ mRNA表达水平有增加趋势,至30min组达到峰值,随后表达水平有减小趋势,推测流体剪切应力作用下CA Ⅱ mRNA表达水平存在一定时效关系,但具体作用机制有待进一步研究.
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碳酸酐酶Ⅱ基因克隆及在毕赤酵母中的异源表达
碳酸酐酶Ⅱ（carbonic anhydrase Ⅱ, CA Ⅱ）是参与机体多种代谢活动和病理活动的一种重要催化酶。通过基因重组、电转化等方式，得到能异源高表达人 CA Ⅱ的毕赤酵母（Pichia. pastoris）GS115工程菌。对工程菌进行培养及甲醇诱导后，经离子交换层析柱分离纯化后得到较纯的重组 CA Ⅱ。通过 Western blotting、酶活力及圆二色谱检测发现重组和商品化 CA Ⅱ具有相似的酶活力和构象，为 CA Ⅱ今后进一步在临床的研究和工业应用打下了基础。
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胃肠道间质瘤中碳酸酐酶 II的表达及其意义
目的：探讨碳酸酐酶Ⅱ（ CAⅡ）在胃肠道间质瘤（ GIST）组织中的表达及与其临床病理参数的关系。方法应用免疫组化EnVision法检测54例GIST组织中CAⅡ的表达情况。结果 GIST组织中CAⅡ表达阳性率为66．7％（36/54），CAⅡ表达与肿瘤大小、原发部位及危险度分级有关（P＜0．01）。结论 CA Ⅱ表达可能与GIST的发生发展有一定关系。
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早期黏膜下浸润与非黏膜下浸润结直肠癌的差异蛋白鉴定
目的 构建大鼠早期黏膜下浸润结直肠癌( SICRC)与非黏膜下浸润结直肠癌(SNICRC)模型并鉴定两者的差异蛋白,以筛选早期SICRC的生物学标记.方法 应用N-甲基-N-亚硝基脲( MNU)诱导建立大鼠SICRC与SNICRC模型.二维荧光差异定量双向电泳技术(2D-DIGE)和基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱鉴定出SICRC与SNICRC的差异蛋白.荧光定量Real-time PCR和Westem blot实验验证所选蛋白的鉴定结果.结果 成功建立大鼠SICRC与SNICRC模型.2D-DIGE发现SICRC和SNICRC之间有5个差异表达蛋白(P值均＜0.01).质谱分析鉴定这5个蛋白发现,与SNICRC和正常对照(NC)比较,转凝蛋白(Transgelin)、肽基脯氨酰异构酶A和原肌球蛋白1在SICRC表达上调,而碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)与一种未命名蛋白表达下调.Real-time PCR和Westemblot验证结果显示,Transgelin mRNA和蛋白水平在SICRC组(33.05±0.75、86.63±1.83)高于SNICRC( 22.68±0.89、67.93±2.39)和NC组(18.07 ±0.55、44.25±1.55)(P值均＜0.05),而CAⅡmRNA和蛋白水平在SICRC组(18.01±0.53、41.55±1.89)低于SNICRC组(26.28±1.08、61.11±1.57)和NC组(33.08±0.76、83.43 ±1.61)(P值均＜0.05),变化趋势与蛋白质组学一致.结论 2D-DIGE是筛选早期SICRC与SNICRC差异表达蛋白的有效手段,鉴定的差异蛋白有可能成为临床早期黏膜下浸润结直肠癌筛选和诊断的生物学标记.
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碳酸酐酶Ⅱ在结直肠癌中的表达及其意义
目的 探讨碳酸酐酶Ⅱ(CA Ⅱ)的表达与结直肠癌(CRC)的发生、发展,以及临床病理特征的关系.方法 Western Blot 法检测 CA Ⅱ在 12 对新鲜配对的 CRC 和远癌黏膜中的表达.再以免疫组织化学法检测 CA Ⅱ在配对的 64 对远癌结直肠黏膜和 CRC,20 个转移淋巴结及 27 个息肉中的表达,比较各组间表达的差异.分析 CA Ⅱ表达与 CRC 的部位、分化及临床病理分期间的关系.结果 Western Blot 检测显示远癌黏膜 CA Ⅱ/tubulin 灰度比为 2.48 4-1.68,癌组织为 1.33 ±1.28,两者差异有统计学意义(P=0.027).免疫组化显示 CA Ⅱ的表达评分远癌黏膜为(2.81 ±0.48)分,息肉(包括增生性息肉和腺瘤)为(2.56 ±0.51)分,CRC 为(1.30±0.89)分;按上述 3 种组织的顺序评分逐步显著降低(P<0.05).在转移淋巴结中为(1.35±0.67)分,表达与配对原发灶相似(P>0.05).CA Ⅱ的表达在不同部位和分化程度的 CRC 间差异无统计学意义(P>0.05),Ⅲ,Ⅳ期表达与 I,Ⅱ期无统计学差异(P>0.05).结论 CA Ⅱ在 CRC 中表达的下调,是 CRC 发生中的早期事件,与分化、分期和转移无关.
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胃癌碳酸酐酶Ⅱ mRNA表达的临床病理意义
目的 探讨碳酸酐酶Ⅱ(CA Ⅱ)在胃癌中表达的临床病理意义.方法 采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)法分析30例胃癌中CA Ⅱ的表达.结果 RT-PCR发现30例胃癌标本中,较其对应正常胃粘膜组织CAⅡ表达下调为50%.10例胃癌无淋巴转移中CAⅡ表达下调30%(3/10),20例胃癌伴淋巴转移中CAⅡ表达下调60%(12/20),两者差异有显著性(P＜0.05).结论 胃癌中存在CAⅡ表达下调,其表达下调与胃癌的发生和转移相关.
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碳酸酐酶Ⅱ与肿瘤
碳酸酐酶(Carbonic Anhydrase,CA)是一族含锌金属酶,迄今在哺乳动物中已发现13种催化性质不同、组织分布各异的CA同工酶.其中CAⅡ在细胞内的分布、分子的理化特性、生理功能都有不同于其他CA的特点,参与机体气体运输、酸碱调节和组织的分泌等功能,在维持内环境的稳定方面发挥重要作用.在肿瘤中,CAⅡ被认为可能参与了细胞外微环境的酸化,从而利于肿瘤的侵袭;也有人认为CAⅡ是一种肿瘤血管内皮相关抗原,其表达利于表皮生长因子受体(EGFR)的扩增,但CAⅡ在肿瘤中的确切机制有待于进一步研究.
