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重金属污染物镉通过EMT机制加强结肠癌细胞株HCT-116的恶性生物学行为
目的 探讨重金属污染物镉(cadmium,Cd)对人结肠癌细胞株HCT-116的恶性生物学行为的影响及其相关机制.方法 选用低浓度Cd诱导的人类结肠癌稳定细胞株HCT-116和未诱导的细胞株HCT-116为研究对象.通过MTT实验、平板克隆形成实验、黏附实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验等,观察HCT-116细胞的恶性生物学行为的变化;蛋白免疫印迹法检测E-cadherin、Vimentin、E-盒结合锌指蛋白1、MMP-3、MMP-9等上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,Cd诱导组细胞的恶性生物学行为增强(P＜0.05),且转化后的细胞间呈间充质样链接;相较于对照组,Cd诱导24 h后,间质样标志物Vimentin蛋白的相对表达量明显增加(2.20±0.11 vs 1.03±0.08,P＜0.01)、MMP-3(5.76±0.20 vs 1.00±0.09,P＜0.01)、MMP-9(3.46±0.05 vs 0.99±0.04,P＜0.01)的蛋白相对表达量也上升,而上皮样标志物E-cadherin蛋白的相对表达显著下降(0.30±0.03 vs 1.01±0.05,P＜0.01),且他们均呈现时间依赖性.结论 形态学和分子生物学都提示HCT-116细胞在慢性低剂量Cd暴露后会引起EMT机制.
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百草枯对人肺泡上皮屏障的影响及机制研究
目的 用体外人肺泡上皮屏障模型,研究百草枯对人肺泡上皮屏障的影响,并初步探讨其潜在的机制.方法 通过噻唑蓝(M T T)试验和细胞计数研究百草枯对H441细胞增殖的影响,使用跨上皮电阻率(TERR)测量和荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)通透性试验研究上皮屏障的通透性,使用蛋白质印迹法(WB)研究百草枯对H441细胞中钙黏附连接蛋白E((E-cadherin)和紧密连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响.结果 处理24 h后,从200μM浓度开始,百草枯可显著抑制细胞的增殖(P<0.05).H441单层细胞可形成上皮屏障,表现为随着培养时间的延长,TERR值逐渐升高(P<0.05),而FITC-Dextran通透性逐渐降低(P<0.05),且从第9天开始趋于平稳(P>0.05).待H441单层细胞上皮屏障完全建立后,百草枯可显著破坏H411单层细胞的上皮屏障,表现为TERR值的降低(P<0.05)和FITC-Dextran通透性的升高(P<0.05).百草枯处理24 h后,细胞中E-cadherin和ZO-1的表达均显著降低(P<0.05).结论 百草枯通过抑制E-cadherin和ZO-1的表达,破坏体外人肺泡上皮屏障模型H441单层细胞的上皮屏障,为百草枯引起急性肺损伤的机制提供了一定的理论基础.
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MACC1和E-cadherin蛋白在胃腺癌中的表达及意义
探讨结肠癌转移相关因子‐1（MACC1）蛋白和钙黏附蛋白 E（E‐cadherin）表达异常与胃腺癌发生发展的关系。应用免疫组化法检测 MACC1及 E‐cadherin 蛋白在胃腺癌中的表达。结果显示二者在胃腺癌与癌旁组织中的表达差异有统计学意义（P＜0．05）；MACC1蛋白在临床分期Ⅲ＋Ⅳ期组、淋巴结和远处转移阳性组中表达明显高于Ⅰ＋Ⅱ期组、淋巴结和远处转移阴性组；E‐cadherin 蛋白在临床分期Ⅲ＋Ⅳ期组、淋巴转移及远处转移组中呈低表达，组间差异有统计学意义；两种蛋白在胃腺癌中表达呈负相关。
关键词： 结肠癌转移相关因子-1 钙黏附蛋白E 胃腺癌 -
胃苏颗粒对慢性胃炎患者血清炎症因子及胃黏膜COX-2、E-cadherin表达的影响
目的:探讨胃苏颗粒对幽门螺旋杆菌(HP)感染阳性的慢性胃炎患者血清炎症因子及胃黏膜氧化酶-2(COX-2)、钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达水平的影响.方法:将120例慢性胃炎患者随机分为观察组及对照组各60例,对照组采用三联疗法治疗,观察组在对照组治疗的基础上应用胃苏颗粒治疗,2组均持续治疗2W.对比分析2组治疗效果,应用ELISA法测定血清炎症因子白细胞介素-2、4、10(IL-2、IL-4、IL-10)及免疫组化检测胃黏膜COX-2、E-cadherin表达水平.结果:观察组总有效率为100.0％、HP转阴率为98.3％、复发率为3.3％;对照组总有效率为80.0％、HP转阴率为80.0％、复发率为15.0％,2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).2组治疗后血清IL-4、IL-10水平及胃黏膜COX-2、E-cadherin表达较治疗前明显降低,血清IL-2水平显著升高,与治疗前比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05);观察组各指标改善优于对照组(P＜0.05).结论:胃苏颗粒能有效提高HP阳性慢性胃炎患者的治疗效果,降低复发率;其作用机制可能与抑制炎症因子释放,下调COX-2、E-cadherin表达水平有关.
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肺腺癌上皮-间质转化相关标识基因检测的临床意义
目的 探讨肺腺癌上皮-间质转化(EMT)相关标识基因钙黏附蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Snail和Slug mRNA检测的临床意义.方法 收集术后临床病理资料完整的肺腺癌患者117例,抽提肺腺癌组织及相应癌旁组织RNA并逆转录,以GAPDH为内参,利用荧光定量PCR技术检测E-cadherin、Vimentin、Snail和Slug mRNA表达水平,对比癌组织与癌旁组织表达水平,并分析癌组织各基因表达水平与患者性别、年龄、吸烟史、肿块大小、淋巴结转移、病理类型、含微乳头结构(MPP)成分及肿瘤分期的关系.结果 与癌旁组织相比,肺腺癌组织E-cadherin mRNA表达水平下调,Vimentin、Snail、Slug mRNA表达水平均上调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).有淋巴结转移者癌组织E-cadherin mRNA表达水平下调者所占比例高于无淋巴结转移者,而Vimentin、Snail mRNA表达水平上调者所占比例高于无淋巴结转移者(均P＜0.05).浸润性腺癌组Vimentin mRNA表达水平上调者所占比例高于原位腺癌+微浸润腺癌组(P＜0.05).含MPP成分组癌组织E-cadherin mRNA表达水平下调者所占比例高于不含MPP成分组,而Vimentin、Snail、Slug mRNA表达水平上调者所占比例高于不合MPP成分组(均P＜0.05).与Ⅰ/Ⅱ期肺腺癌组相比,Ⅲ/Ⅳ期肺腺癌组癌组织E-cadherin mRNA表达水平下调者所占比例较高,而Vimentin、Snail、Slug mRNA表达水平上调者所占比例较高(均P＜0.05).结论 肺腺癌组织EMT相关标识基因表达水平改变,且与淋巴结转移、病理类型、肿瘤分期相关,提示其可能是评估肺腺癌预后的新指标及肿瘤治疗的新靶点.
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子宫内膜异位性疾病患者子宫内膜组织EGFR 和 EMT 相关蛋白表达及意义
目的：检测子宫内膜异位性疾病患者子宫内膜组织中表皮生长因子受体（ EGFR）和上皮间质转化相关蛋白钙黏附蛋白E（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）及snail的表达，探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测23例子宫腺肌病患者的在位及异位内膜组织（腺肌病在位组及异位组）、19例子宫内膜异位症患者的异位内膜组织（异位症组）、20例子宫肌瘤患者的正常内膜组织（对照组） EGFR、snail、E-cadherin、vimentin表达，分析异位子宫内膜组织（异位症组及腺肌病异位组） E-cadherin和vimentin表达的相关性。结果异位症组EGFR阳性表达率（10．52％）低于对照组（40．00％），腺肌病异位组（82．61％）、在位组（56．52％）及异位症组（78．95％）内膜组织snail阳性表达率均高于对照组（55．00％），异位症组（15．79％）和腺肌病异位组（30．43％）内膜组织E-cadherin阳性表达率低于对照组（60．00％），异位症组（89．47％）及腺肌病异位组（86．96％）vimentin阳性表达率均高于对照组（65．00％）；各组比较，P均＜0．05。异位子宫内膜组织（异位症组及腺肌病异位组） E-cadherin和vimentin表达呈负相关（r＝－0．372，P＜0．05）。结论子宫内膜异位性疾病患者子宫内膜组织EGFR、E-cadherin 表达下调， snail、vimentin表达上调，上述因子的表达变化可能参与子宫内膜异位性疾病的发生。
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利格列汀对体外高糖诱导后人肾小管上皮细胞E-cadherin、α-SMA表达的影响及机制
目的：探讨利格列汀对体外高糖诱导后人肾小管上皮细胞钙黏附蛋白E（E-cadherin）、肌动蛋白α（α-SMA）表达的影响及机制。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）随机分为正常对照组、高糖组、高糖＋Wnt4 siRNA组、高糖＋β-catenin siRNA组、高糖＋利格列汀组，高糖＋Wnt4 siRNA组、高糖＋β-catenin siRNA组分别转染siRNA沉默Wnt4、β-catenin，12 h后与高糖组、高糖＋利格列汀组同时加入D-葡萄糖（葡萄糖终浓度为30 mmol／L），高糖＋利格列汀组同时加入利格列汀（终浓度10μmol／L），继续培养48 h。采用Western blotting法检测各组E-cadherin、α-SMA、Wnt4、β-catenin蛋白表达，倒置显微镜观察细胞形态学改变，测定细胞长与宽比值。结果与正常对照组比较，高糖组E-cadherin表达下调、α-SMA、Wnt4、β-catenin表达上调（P均＜0．05）；与高糖组比较，高糖＋Wnt4 siRNA组、高糖＋β-catenin siRNA组、高糖＋利格列汀组E-cadherin表达上调、α-SMA表达下调（P均＜0．05）。高糖组细胞由卵圆形伸长呈梭形，高糖＋利格列汀组细胞由卵圆形向梭形改变程度减轻。高糖组细胞长／宽较正常对照组、高糖＋利格列汀组升高（P均＜0．05）。结论利格列汀可部分抑制体外高糖诱导的人肾小管上皮细胞E-cadherin表达下调、α-SMA表达上调，其机制可能与Wnt4／β-catenin通路有关。
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肝星状细胞对肝癌裸鼠肝癌细胞上皮间质转化的影响
目的 探讨肝星状细胞LX2对肝癌裸鼠肝癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响.方法 将24只裸鼠随机分为模型组和LX2组,每组12只.模型组裸鼠于右前肢腋下皮内注射含有1×107个MHCC97H细胞的生理盐水悬液0.2 mL建立肝癌模型;LX2组裸鼠于右前肢腋下皮内注射含有1×107个MHCC97H细胞和5×106个LX2细胞的生理盐水悬液0.2 mL.建模后第42天取肿瘤组织进行石蜡包埋,采用苏木精-伊红染色法观察2组裸鼠肿瘤组织的病理学变化,免疫组织化学法检测2组裸鼠肝癌细胞中钙黏附蛋白E (E-cadherin)、钙黏附蛋白N(N-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)及Twist的表达.结果 模型组裸鼠肿瘤组织中可见假小叶结构消失,细胞排列紊乱,细胞呈卵圆形、长椭圆形或多角形,细胞排列较紧密,偶见癌灶呈团状或条索状分布.LX2组裸鼠肿瘤组织中可见明显的团块状癌灶,肝癌细胞周围包绕较多的LX2细胞,肝癌细胞发生较明显的EMT样形态学变化,细胞排列分散,极性下降.LX2组肝癌细胞中E-cadherin高表达率低于模型组,N-cadherin、β-catenin及Twist高表达率高于模型组(P＜0.05).结论 LX2细胞具有促进肝癌细胞发生EMT的作用.
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AEG与钙黏附蛋白E在食管癌中表达的相关性及其意义
目的：研究星形细胞上调基因1（）和钙黏附蛋白E（E- cad）在食管癌中的表达的相关性，并分析与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学方法和Western blot两种方法检测58例食管癌组织及其相应的癌旁组织中和钙黏附蛋白E的表达，并分析与临床病理特征的相关性。结果在58例食管癌组织中表达的阳性率82.7%明显高于相应的癌旁组织的51.7%（<0.05），且表达阳性率与性别、年龄、肿瘤的部位、肿瘤病理类型无相关性（>0.05），而与肿瘤分化程度、浸润深度、临床分期、淋巴结转移相关（<0.05）；在58例食管癌组织中钙黏附蛋白E的阳性率为31%，明显低于相应癌旁组织的94.8%（<0.05），且表达阳性率与性别、年龄、肿瘤的部位、肿瘤病理类型无相关性（>0.05），而与肿瘤分化程度、浸润深度、临床分期、淋巴结转移相关（<0.05）；食管癌中与钙黏附蛋白E的表达呈明显的负相关（=-0.483，<0.05）。结论和钙黏附蛋白E在食管癌中的表达分别表现为高表达和表达缺失，且两者与食管癌的侵润、转移密切相关，可能介导食管癌中钙黏附蛋白E的表达下调。
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抑制蛋白1及钙黏附蛋白E与上尿路移行上皮癌预后的关系
目的 探讨肿瘤转移抑制蛋白1(MTSS1)和钙黏附蛋白E(E-cadherin)与上尿路移行上皮癌预后的关系.方法 选取2005年1月-2014年1月该院收治的上尿路移行上皮癌患者60例,取癌组织为观察组,相同患者膀胱正常组织为对照组,检测MTSS1和E-cadherin的表达,分析其与上尿路移行上皮癌患者病理特征及预后的关系.结果 观察组MTSS1的阳性表达率为58.3％(35/60),显著低于对照组的100％(60/60),并且与远处转移、淋巴转移显著相关;MTSS1阳性表达患者的中位生存时间显著高于阴性表达患者,差异有统计学意义(P＜0.05).观察组E-cadherin的阳性表达率为28.3％(17/60),显著低于对照组的65.0％(39/60),并且与组织学分化低、远处转移、淋巴转移显著相关;E-cadherin阳性表达患者的中位生存时间显著高于阴性表达患者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 上尿路移行上皮癌组织中MTSS1和E-cadherin呈低表达,提示癌细胞侵袭转移,阴性表达患者生存期短.
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钙黏附蛋白E和类赖氨酰氧化酶2在胆管癌中的表达及其相关性研究
目的：探讨类赖氨酰氧化酶2（LOXL2）和钙黏附蛋白E（E‐cadherin）在胆管癌中的表达，并分析两者表达水平的相互关系。方法应用免疫组织化学（SP）法和聚合酶链式反应（RT‐PCR）技术检测胆管癌组织中 E‐cadherin和LOXL2的表达情况。结果 E‐cadherin在胆管癌组的表达明显低于癌旁组织组和正常胆管组，差异有统计学意义（P＜0．05）；LOXL2在胆管癌组的表达明显高于癌旁组织组和正常胆管组，差异有统计学意义（P＜0．05）。E‐cadherin和LOXL2在胆管癌中的表达呈负相关。结论 E‐cadherin的表达减弱和LOXL2的表达增高共同参与胆管癌的发生和发展。
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TRIM31沉默抑制胰腺癌侵袭和迁移
目的:探讨三结构域蛋白31(TRIM31)对胰腺癌侵袭转移的影响及其机制.方法:利用基因表达数据库(GEO)获得TRIM31在胰腺癌组织、癌旁组织以及正常胰腺组织中的表达,选取两株胰腺癌细胞Panc-1及MIAPaCa-2分别分为TRIM31沉默组(实验组)和空载体组(阴性对照组),通过Transwell小室细胞迁移和划痕实验观察TRIM31对胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,Western blot实验检测上皮-间充质细胞转化(EMT)相关钙黏附蛋白E (E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平.结果:正常胰腺组织中TRIM31 mRNA相对表达量明显低于胰腺癌组织,癌旁组织中TRIM31 mRNA相对表达量明显低于癌组织,差异有统计学意义(P＜0.05);小室细胞迁移和侵袭实验显示,实验组Panc-1及MIA PaCa-2迁移和侵袭细胞数明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);沉默TRIM31表达后,Panc-1及MIAPaCa-2细胞中E-cadherin蛋白表达量明显升高,Vimentin蛋白表达量明显降低.结论:沉默TRIM31的表达可能通过抑制胰腺癌细胞的EMT过程,进而抑制其侵袭迁移.
