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正常高值血压患者血清血小板源性生长因子BB与转化生长因子β_1水平升高
目的 分析正常高值血压患者血清血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)与转化生长因子β_1(TGF-β_1)水平,探讨其临床意义.方法 选择正常高值血压者97例,理想血压者76例,用酶联免疫法(ELISA)分别测定全部受试人群血清PDGF-BB、TGF-β_1 水平,同时检测体质量指数(BMI)、空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C).结果 正常高值组收缩压、舒张压、BMI、空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油、LDL-C水平均高于对照组(均P<0.01),HDI-C水平低于对照组(P<0.01);正常高值组血清PDGF-BB与TGF-β_1水平明显高于对照组(P<0.01).血清PDGF-BB及TGF-β_1分别与收缩压、舒张压、BMI、空腹血糖、总胆同醇、三酰甘油、LDL-C呈正相关,与HDL-C呈负相关,PDGF-BB与TGF-β_1呈正相关(r=0.909,P<0.01).多元线性回归分析提示血压、血糖、血脂是PDGF-BB与TGF-β_1 的重要影响因素.结论 正常高值血压者早期已出现血糖和血脂代谢的改变;血清PDGF-BB及TGF-β_1与血压,血糖和血脂密切相关,且二者相互影响.正常高值血压人群PDGF-BB和TGFβ_1水平升高.
关键词： 正常高值血压 血小板源性生长因子BB 转化生长因子β_1 -
平阳霉素胸膜固定术对纤溶系统活性及转化生长因子β_1的影响
目的 观察平阳霉素胸膜腔内注射后对外周血及胸腔积液中纤溶酶原激活剂抑制物1(PAI-1)、组织型纤维蛋白溶酶原活化剂(t-PA)及转化生长因子β_1(TGF-β_1)水平的影响,探讨胸膜腔内注射平阳霉素治疗恶性胸腔积液(MPE)的机制.方法 2008年2-9月对26例MPE患者胸膜腔内注射平阳霉素,检测注药前后外周血及胸腔积液中PAI-1、t-PA、TGF-β_1的水平及白细胞计数.1个月后根据WHO制定的统一标准评价疗效,其中完全缓解(胸腔积液完全消失并维持1个月以上)和部分缓解(胸腔积液减少50%以上)者归为有效组;胸腔积液减少后再次增加且30 d内需再次抽液者,归为无效组.结果 1个月后15例(15/26例)胸腔积液控制;注射平阳霉素后24 h外周血中自细胞计数[有效组为(9.2±2.0)×10~9/L,无效组为(9.4±3.8)×10~9/L]、中性粒细胞计数[有效组为(7.9±2.1)×10~9/L,无效组为(8.1±3.3)×10~9/L]与注药前外周血白细胞计数[有效组为(6.6±1.4)×10~9/L,无效组为(5.6±0.9)×10~9/L]和中性粒细胞计数[有效组为(4.5±1.3)×10~9/L,无效组为(4.2±1.0)×10~9/L]比较差异有统计学意义(时间效应的F值分别为30.80和46.08,P均<0.01),血中PAI-1、t-PA和TGF-β_1在注药前后比较无明显差异.胸腔积液中PAI-1在注药后24 h[有效组为(2195±861)μg/L,无效组为(1099±568)μg/L]、注药后72 h[有效组为(1688±703)μg/L,无效组为(1383±797)μg/L]与注药前[有效组为(1054±1039)μg/L,无效组(1027±955)μg/L]比较差异有统计学意义(时间效应的F=6.29,P=0.01);胸腔积液中t-PA在注药后24 h[有效组为(49±49)μg/L,无效组为(53±40)μg/L]、注药后72 h[有效组为(17±20)μg/L,无效组为(28±22)μg/L]与注药前[有效组为(42±33)μg/L,无效组为(54±25)μg/L]比较差异有统计学意义(时间效应的F=19.85,P<0.01);TGF-β1水平给药前后无明显差异;给药后24 h胸腔积液中白细胞计数[有效组为(4.7±4.7)×10~9/L,无效组为(2.1±1.4)×10~9/L]与注药前[有效组为(2.3±1.9)×10~9/L,无效组为(1.0±0.9)×10~9/L]比较差异有统计学意义(F=8.05,P<0.01).平阳霉素胸膜固定术不同疗效组外周血白细胞和中性粒细胞计数及PAI-1、t-PA、TGF-β1的水平在不同时间点无明显差异.胸膜腔内注射平阳霉素后,通过应用重复测方法计算不同时间点胸腔积液中PAI-1水平,有效组和无效组比较差异有统计学意义(F=8.51,P<0.01),而两组其他指标比较无明显差异.结论 平阳霉素胸膜固定术是一种安全、有效的治疗MPE的方法.胸膜腔内注射平阳霉素后可通过抑制纤溶酶原的活性而达到粘连胸膜的效果.
关键词： 胸膜固定术 转化生长因子β_1 纤溶酶原灭活剂 组织型纤溶酶原激活物 平阳霉素 -
转换生长因子-β_1对肺成纤维细胞窖蛋白-1与细胞外基质表达的影响
目的 研究转换生长因子-β_1(TGF-β_1)对人胚肺成纤维细胞(HFLF)的窖蛋白-1、Ⅰ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 体外培养HFLF,以未加TGF-β_1的HFLF为对照组.分别以不同终浓度(2、5和10 μg/L)TGF-β_1处理的HFLF为实验组,每组5×10~8细胞,实验重复3次,逆转录-PCR和Western blot法分别检测TGF-β_1刺激3、6、12和24 h后各组窖蛋白-1及其mRNA、Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达.组间均值比较采用单因素方差分析,采用直线回归模型进行相关性分析.结果 TGF-β_1作用后,HFLF窖蛋白-1的mRNA和蛋白表达逐渐减少,呈时间-浓度依赖关系;TGF-β_1作用12 h,中剂量组(5 μg/L)窖蛋白-1的mRNA和蛋白表达的积分吸光度值(0.59±0.06和0.53±0.04)明显低于对照组(1.22±0.12和1.45±0.06),差异均有统计学意义(F值分别为29.279和95.786,均P＜0.01);TGF-β_1作用24 h,中剂量组(5 μg//L)Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达的积分吸光度值(1.35±0.09和0.75±0.06)明显高于对照组(0.28±0.04和0.18±0.04),差异均有统计学意义(F值分别为81.221和65.477,均P＜0.01);相关分析结果显示,HFLF窖蛋白-1的蛋白表达下调与Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达上调旱显著负相关(r值分别为-0.923和-0.793,均P＜0.05).结论 TGF-β_1可下调HFLF窖蛋白-1的mRNA和蛋门表达,并与Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达上调呈负相关,提示HFLF窖蛋白-1下调可能与肺间质纤维化的发生和发展有关.
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转化生长因子β_1基因标签单核苷酸多态性与新疆汉族原发性高血压相关性研究
目的 研究转化生长因子β_1(TGF-β_1)基因标签单核苷酸多态(tSNP)及血浆水平与新疆汉族原发性高血压(EH)的关系,阐明连锁不平衡(LD)模式以及单体型分布特征.方法 采用整群抽取随机抽样的方式,以新疆沙湾县732例汉族人(EH组365例,对照组367例)为研究对象,进行流行病学调查和临床检查,并采集血样.用双抗体夹心法(ELISA试剂盒)测量TGF-β_1血浆浓度.SNaPshot方法进行基因分型.结果 (1)TGF-β_1基因rs11466345位点等位基因A、G在EH组和对照组中分布频率分别为69.7%、30.3%、74.4%、25.6%,EH组G等位基因频率高于对照组(x2=3.949,P=0.047),G等位基因患病风险为A等位基因1.261倍(95%CI 1.003～1.585,P=0.047),其他tSNP基因型及等位基因频率在EH组和对照组分布差异元统计学意义(P>0.05).(2)除m11466345位点外,其他tSNP位点间存在强LD,其构成的单体型频率在EH及对照组中分布差异无统计学意义(P>0.05).(3)TGF-β_1基因tSNP在EH组与对照组各基因型和等位基因之间TGF-β_1血浆水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 TGF-β_1基因rs 11466345G等位基因可能是新疆汉族EH的遗传易感基因,其他tSNP可能与该民族EH不相关,除rs11466345位点外,其余tSNP位点间存在强LD,其构成的单体型与EH无关;在新疆汉族人群中TGF-β_1基因tSNP与TGF-β_1血浆水平不相关.
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1型糖尿病大鼠心肌病变及转化生长因子β_1和结缔组织生长因子表达的变化及意义
目的 探讨不同病程糖尿病模型大鼠心肌的病理变化及转化生长因子β_1(TGF-β_1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达变化及意义.方法 腹腔注射链尿佐菌素(65 mg/kg)建立SD大鼠1型糖尿病模型,分别于4、12、24周检测心肌羟脯氨酸含量(HPC),Masson染色观察胶原纤维容积分数(CVF)及血管周围胶原面积(PVCA),用免疫组织化学法对心肌胶原蛋白(Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ)、TGF-β_1和CTGF在心肌的分布及表达进行半定量分析,心肌光镜与透射电镜观察,并与同龄正常大鼠进行比较.结果 ①与对照组相比,糖尿病组大鼠心肌纤维化指标HPC[4周:(134.67±37.86)、(184.30±31.26)μg/g,12周:(151.17±21.59)、(202.80±40.06)μg/g,24周:(169.67±48.27)、(250.17±53.96)μg/g,P均<0.05]、CVF[4周:(3.38±0.70)%、(5.68±0.93)%,12周:(4.76±1.34)%、(11.17±1.65)%,24周:(6.08±0.88)%、(13.36±0.85)%,P均<0.05]、PVCA[4周:(26±13)%、(58±18)%,12周:(36±15)%、(93±33)%,24周:(54±44)%、(154±57)%,P均<0.05]、Collagen Ⅰ[4周:(1.33±0.33)×10~3、(4.55±0.74)×10~3,12周:(2.16±0.11)×10~3、(6.06±0.73)×10~3,24周:(3.00±0.32)×10~3、(7.20±0.18)×10~3,P均<0.05)、Collagen Ⅲ[4周:(1.56±0.23)×10~3、(3.42±1.40)×10~3,12周:(2.93±0.40)×10~3、(5.58±1.29)×10~3,24周:(3.25±0.26)×10~3、(4.20±0.17)×10~3,P均<0.05]表达均明显增高.电镜发现糖尿病组心肌细胞肌丝稀疏,线粒体肿胀,闻质胶原增生.②与对照组相比,糖尿病组TGF-β_1[4周:(1.15±0.14)×10~3、(2.13±0.49)×10~3,12周:(2.96±0.24)×10~3、(5.28±0.24)×10~3,24周:(3.25±0.65)×10~3、(4.41±0.73)×10~3,P<0.05]和CTGF的表达[4周:(2.28±0.86)×10~3、(5.98±1.38)×10~3,12周:(3.92±0.91)×10~3、(6.47±0.50)×10~3,24周:(4.54±1.01)×10~3、(7.85±1.45)×10~3,P均<0.05]表达均明显增高.TGF-β_13个月时迭高峰,6个月时减少;CTGF随病程进展逐渐增高(F=4.06,P<0.05).结论 早期糖尿病大鼠模型已出现心肌纤维化改变,糖尿病心肌纤维化与TGF-β_1、CTGF表达增强有关.
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小窝蛋白-1与肺纤维化关系的研究进展
小窝蛋白-1(Caveolin-1)是小窝标志性的蛋白,主要通过"脚手架"结构区域,参与负性调控多条信号通路,干预多种疾病进程.目前研究证实:特发性肺纤维化的肺组织中的Caveolin-1表达明显减低,而提高Caveolin-1水平抑制转化生长因子β_1/Smad、JNK、MEK/ERK、wnt/β-Catenin/Lef-1等信号转导通路因子的激活,可减少细胞外基质的合成和上皮细胞的异常修复,阻断肺纤维化进程.深入研究Caveolin-1参与肺纤维化的分子机制,有望为特发性肺纤维化提供新的分子治疗靶点.
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反转录病毒载体介导转化生长因子β_1基因体外转染兔膝关节软骨细胞的表达
背景:将功能基因片段整合到基因载体内,再将基因载体转染入靶细胞中或转染入关节腔内,通过转基因的靶细胞持续大量分泌功能基因产物,在一个较长的时期内保持局部治疗浓度,可修复关节软骨损伤.目的:以重组反转录病毒载体介导转化生长因子β_1体外转染兔膝关节软骨细胞,观察其表达情况及其对软骨细胞生物学性状的影响.方法:采用胰酶消化法分离培养兔软骨细胞.载体经PLNCX_2 Hind Ⅲ/Not Ⅰ双酶切、去磷酸化后,与载体pDsRed_2双酶切得到大的部分多克隆位点和RFP基因连接,构建PLNCX_2-RFP.转化生长因子β_1基因从PGEMT-TGF中扩增,经双酶切后与PLNCX_2-RFP连接,构建PLNCX_2-TGFβ_1-RFP.包装反转录病毒载体,并检测病毒上清滴度.将培养的兔膝关节软骨细胞分组转染:对照组(不做任何转染)、转染PLNCX_2组、转染PLNCX_2-TGFβ_1-RFP组,持续筛选2周,观察细胞变化.收集稳定转染的细胞上清液,以NO检测试剂盒检测基因转染对软骨细胞的影响,以ELISA法检测细胞培养上清液中人转化生长因子β_1表达.结果与结论:重组基因PLNCX_2-TGFβ_1-RFP经酶切鉴定测序TGFβ_1、RFP、序列均正确,表明构建成功预期的真核表达载体PLNCX_2-TGFβ_1-RFP.转染到包装细胞并筛选培养后,病毒滴度为1×10~6CFU.稳定转染软骨细胞后可观察到红色荧光,证明转染成功.持续筛选2周,散在贴壁细胞形成阳性克隆,逐渐弥漫融合,并有细胞簇出现,双核多见,细胞增生活跃.转染PLNCX_2-TGFβ_1-RFP组NO浓度高于对照组、转染PLNCX_2组(P<0.05),对照组、转染PLNCX_2组间差异无显著性意义.对照组与转染PLNCX_2组均无转化生长因子β_1表达,转染PLNCX_2-TGFβ_1-RFP组转化生长因子β_1质量浓度为(28.08±3.73)ng/L.提示反转录病毒载体PLNCX_2介导的人转化生长因子β_1能有效转染到兔膝关节软骨细胞并获得稳定表达,同时转染后的软骨细胞增生活跃.
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兔气管切开后3种缝合材料与吻合口组织中转化生长因子β_1的表达:哪种材料更具相容性?
背景:选择合适的吻合材料可提高气管、支气管重建的成功率,减少吻合口瘢痕狭窄.国内目前常用的缝合材料为丝线、涤纶线和人工合成吸收缝线,3种材料中哪种更加有助于预防和减轻术后瘢痕肉芽增生与管腔狭窄尚缺乏相关实验证据.目的:以常用的丝线、涤纶线和人工合成吸收缝线作为缝合材料,创新性开展了3种材料对兔气管切开后吻合口组织病理变化及转化生长因子β_1表达影响的观察比较.设计、时间及地点:随机对照动物实验,病理组织学观察,于2005-09/2006-10在南华大学动物实验部完成.材料:人工合成可吸收缝线购自巴西强生专业产品有限公司.缝合丝线、涤纶线分别购自杭州富阳医用缝合针线厂及杭州华威医疗用品有限公司.方法:体质量1.6～2.0 kg健康成年新西兰大白兔36只,雌雄不限,随机抽签法分为丝线组、涤纶线组和人工合成吸收缝线组,每组12只,分别选用丝线、涤纶线、人工合成吸收缝线进行气管切开后端端吻合.主要观察指标:术后1,2,4周观察吻合口组织病理学变化及转化生长因子β_1表达.结果:36只兔全部进入结果分析.术后1,2周3组吻合口愈合状态无明显差别,均有大量炎症细胞浸润,以中性粒细胞为主,集中在缝线周围,并出现灶性出血,缝线形成异物肉芽肿.术后4周,丝线组、涤纶线组均有缝线残留形成异物肉芽肿形成,并有明显纤维组织增生,人工合成吸收缝线组缝合线已基本吸收.与术后1,2周比较,术后4周,丝线组、涤纶线组转化生长因子β_1表达降低,但差异无显著性意义;人工合成吸收缝线组降低明显(P<0.05).结论:3种缝合材料中人工合成吸收缝线组织相容性好,可有效减少手术刺激引起炎症反应的量和程度,更加有助于预防和减轻术后瘢痕肉芽增生和管腔狭窄.
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TGF-β_1与CTL在肾癌围手术期的相关性研究
目的 探讨转化生长因子β_1(TGF-β_1)与细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性、增殖能力在肾癌围手术期的相关性.方法 采用免疫磁珠分离法分离纯化15例正常人和45例肾癌患者外周血CTL,流式细胞仪分析细胞表型,MTT法检测CTL杀伤活性,3H-TdR掺入法检测CTL增殖能力,酶联免疫吸附试验方法检测血清TGF-β_1浓度.结果 肾癌根治切除术前患者血清TGF-β_1浓度明显高于正常对照组(P<0.01),根治术后血清TGF-β_1浓度明显下降(P<0.01).肾癌根治术前患者CTL杀伤活性、增殖能力明显低于正常对照组(P<0.01),根治术后CTL杀伤活性、增殖能力明显增加(P<0.01),在肾癌围手术期TGF-β_1水平与CTL杀伤活性、增殖能力呈负相关(r分别为0.99、0.954,P<0.01).结论 肾癌细胞分泌大量TGF-β_1,能明显抑制外周血CTL的杀伤活性和增殖能力.
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胃癌患者血清血管内皮生长因子和转化生长因子β_1表达的关系及其临床意义
目的 探讨胃癌患者血清血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子β_1(TGF-β_1)的表达及二者联合检测的临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)定量检测84例胃癌患者和40例健康人血清VEGF和TGF-β_1水平,并分析其与临床病理因素之间的关系.结果胃癌患者血清VEGF和TGF-β_1水平明显高于健康人血清水平[(392.33±118.54)pg/ml vs(139.64±72.31)pg/ml,t=12.4098,P<0.01;(692.8±14.5)mg/L vs(62.3±6.5)mg/L,t=262.3721,P<0.01],其水平与浸润深度、分化程度、有无转移、TNM分期有关(P<0.01),与性别、年龄、肿瘤大小无统计学意义(P>0.05),胃癌患者血清VEGF与TGF-β_1水平呈显著正相关(r=0.475,P<0.01).结论 血清VEGF和TGF-β_1水平与胃癌的浸润、转移密切相关,术前检测血清VEGF、TCF-β_1水平对预测胃癌的浸袭和转移具有重要的临床意义.
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秋水仙碱对心肌组织中TGF-β_1的影响
目的 探讨秋水仙碱对压力负荷性大鼠心肌中转化生长因子β_1(TGF-β_1)的影响.方法 利用腹主动脉缩窄的方法 建立压力超负荷性心肌大鼠模型,放射免疫分析法测定局部心肌组织中血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)水平,RT-PCR法半定量TGF-β_1mRNA的表达变化,免疫组织化学法测定心肌TGF-β_1的表达,同时给予秋水仙碱8周,观察上述指标的变化.结果 与对照组相比,模型组AngⅡ、TGF-β_1 mRNA和TGF-β_1 表达明显增加(P<0.01),秋水仙碱能明显减少上述指标的表达.结论 秋水仙碱可以通过抑制压力负荷性心室重构大鼠RAAS和交感神经系统活性,减少神经内分泌因子AngⅡ生成,减少纤维化因子TGF-β_1的表达.
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地塞米松和TGFβ_1对人卵巢癌HO-8910细胞中PAI-1表达的影响
目的 观察地塞米松(Dex)和转化生长因子β_1(TGFβ_1)对人卵巢癌HO-8910细胞中Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达的影响,探讨其在卵巢癌的发生发展中可能发挥的作用.方法 将HO-8910细胞分别用TGFβ_1(0.01～10 ng/ml)和Dex(100 nmol/L)单独或联合处理不同时间后,用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测PAI-1 mRNA和蛋白表达的变化;用放线菌素D阻断新的mRNA合成,检测PAI-1 mRNA的稳定性.结果 HO-8910细胞中,TGFβ1能以时间和浓度依赖性的方式上调PAI-1 mRNA的表达,高可上调3.75倍 (P<0.01);Dex也能上调PAI-1 mRNA的表达,高为1.65倍 (P<0.01);Dex和TGFβ_1两者联合作用4 h,可上调PAI-1 mRNA 12.7倍 (P<0.01),远大于两者单独作用之和,两者联合处理对PAI-1蛋白的上调作用也大于两者单独作用;Dex和TGFβ_1单独及联合作用均不影响PAI-1 mRNA的稳定性. 结论 Dex和TGFβ_1单独均能上调HO-8910细胞中PAI-1的表达,联用对PAI-1上调有协同作用,该协同作用不是通过增强PAI-1 mRNA的稳定性,而是通过它们在转录水平的作用实现的.
关键词： 孵巢肿瘤 地塞米松 转化生长因子β_1 纤溶酶原激活物抑制物1 -
TGFβ_1基因codon10(Leu＞Pro)变异对肝脏细胞功能的影响
目的 观察TGFβ_1基因codon10(Leu＞Pro)的单核苷酸多态性(SNP)对肝脏细胞功能的影响.方法 构建含codon10(Leu＞Pro)的TGFβ_1(LAP+成熟态单体)真核表达重组体CMV-Leu、CMV-Pro.在HepG2、LX-2细胞中转染pcDNA3.1空载体、CMV-Leu、CMV-Pro,培养24 h后,ELISA检测细胞培养上清液中TGFβ_1的分泌量.MTT实验观察HepG2细胞转染后的增殖情况,流式细胞术检测LX-2细胞转染后CD83的表达.结果 转染CMV-Leu和CMV-Pro能增加HepG2、LX-2细胞的TGFβ1分泌量,且转染CMV-Pro的细胞TGFβ_1分泌量比转染CMV-Leu的细胞高(P＜0.05).转染CMV-Pro能明显增高HepG2细胞的增殖活性(P<0.01),而转染CMV-Leu能明显增加LX-2细胞CD83的表达率(P<0.01).结论 TGFβ_1基因codon10(Leu＞Pro)的SNP对肝脏细胞TGFβ_1的分泌、细胞增殖活性及CD83的表达具有明显影响.
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灵芝多糖对糖尿病大鼠肾组织TGF-β_1和CO-Ⅳ表达的影响
目的 观察转化生长因子β_1(TGF-β_1)及Ⅳ型胶原(CO-Ⅳ)在糖尿病大鼠肾组织中的表达及灵芝多糖干预后的影响.方法 腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠造成糖尿病模型,分组予不同剂量灵芝多糖(GLP)进行治疗性灌胃.8周后,用免疫组化方法 和RT-PCR方法 检测各组大鼠肾皮质TGF-β_1、CO-Ⅳ的蛋白和mRNA表达.结果 糖尿病组大鼠肾小球TGF-β_1、CO-Ⅳ蛋白和mRNA表达较正常对照组明显升高(P＜0.01);灵芝多糖各组较糖尿病组表达降低(P＜0.01).结论 灵芝多糖可能通过下调糖尿病大鼠肾脏中TGF-β_1和CO-Ⅳ的表达,减少细胞外基质积聚,起到对糖尿病大鼠肾脏保护作用.
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缬草提取物对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的作用
目的:探讨缬草提取物对博莱霉素所致大鼠肺间质纤维化的干预作用及机制.方法:健康Wistar大鼠气管内一次性注入博莱霉素5 mg·kg~(-1)制造肺纤维化模型,取造模存活大鼠49只,随机分为缬草高剂量组(16只)、缬草低剂量组(16只)及模型组(17只)3组.造模后第2天开始分别灌胃给予缬草提取物100,20 mg·kg~(-1)及生理盐水10 mL·kg~(-1),每天一次.模型组及用药组于第7天各处死大鼠6只,28 d处死剩存大鼠.另取8只大鼠,气管内一次性注入生理盐水1.0 mL·kg~(-1),灌胃给予生理盐水10 mL·kg~(-1)作为健康对照组,于第28天处死.大鼠处死后,取右下肺叶做HE染色和Masson染色观察肺组织结构的改变;免疫组织化学法检测肺组织中的转化生长因子β_1(TGF-β_1)表达改变;取左下肺叶检测羟脯氨酸(HYP)含量.结果:模型组大鼠7 d肺组织呈现重度肺泡炎改变合并有TGF-β_1表达显著升高,28 d肺组织胶原纤维重度增生并HYP水平显著升高;缬草组第7天时肺泡炎较模型组减轻,TGF-β_1表达较模型组弱(P＜0.05),第28天缬草组肺纤维化病变较模型组减轻,羟脯氨酸含量较模型组低(P＜0.05),TGF-β_1表达较模型组弱.结论:缬草的提取物对博莱霉素诱导的大鼠肺泡炎及肺纤维化有一定的防治作用,其机制可能与下调TGF-β_1的表达有关.
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清燥救肺煎剂对放射性肺损伤的干预作用及对TGF-β_1、IL-1的影响研究
目的:观察清燥救肺煎剂对局部中晚期胸部肿瘤放射治疗的肺保护作用及对转化生长因子β_1(TGFβ_1)、白介素-1(IL-1)表达水平的影响.方法:将局部中晚期胸部肿瘤放射治疗患者随机分为治疗组和对照组.治疗组于放射治疗开始起服用清燥救肺煎荆200mL,每日2次,连续6个月;对照组单纯放射治疗.2组放射治疗前、后测定血浆TGF-β_1和IL~(-1),放射治疗开始15 d起观察临床症状、高分辨率CT和肺弥散功能.结果:放射治疗后2组血浆TGF-β_1和IL-1含量比较差异均有统计学意义(P<0.001).放射治疗后5个月、10个月2组CO弥散量下降情况比较差异有统计学意义(P<0.05).2组急性放射性肺炎和肺纤维化的发生率比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:清燥救肺煎剂能抑制放射治疗后血浆TGG-β_1和IL-1的过度表达,降低放射治疗后弥散功能的恶化,可以用于放射性肺损伤的干预.
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宫内致敏及生后高氧暴露对新生小鼠TGF-β1及α-SMA表达的影响
目的 观察宫内炎性致敏及生后高氧暴露新生小鼠转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在新生鼠肺组织的表达情况,探讨支气管肺发育不良(Bronchopulmonary dysplasia,BPD)发病机制.方法 新生小鼠按照随机数字表法分为LPS组+空气组、LPS+高氧组、生理盐水+空气对照组、生理盐水+高氧组,应用HE染色、放射性肺泡计数(RAC)、免疫组织化学、免疫荧光化学和荧光定量PCR技术,讨论生后第1、3、7、10、14天肺组织的病理改变,检测TGF-β1、α-SMA蛋白和基因mRNA表达水平.结果 ①LPS+高氧组和生理盐水+高氧组出现肺发育障碍,肺泡逐渐融合,RAC逐渐降低,与生理盐水+高氧组比较,LPS+高氧组降低明显(P<0.05).②LPS+高氧组和生理盐水+高氧组第3天后肺组织TGF-β1蛋白表达明显高于LPS组+空气组和生理盐水+空气组(P=0.000),随着暴露时间的延长进行性增高.③LPS+高氧组和生理盐水+高氧组7 d后肺组织α-SMA 蛋白表达明显高于LPS组+空气组和生理盐水+空气组(P=0.000),亦随着暴露时间的延长而增高.④TGF-β1和α-SMA mRNA表达规律与其蛋白表达变化规律基本一致.结论 宫内致敏增强了高氧暴露导致新生鼠肺TGF-β1和α-SMA 表达的上调,肺发育受阻;由宫内致敏及生后高氧引起支气管肺发育不良样改变可能与TGF-β1和α-SMA表达上调有关.
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甘精胰岛素对糖尿病大鼠心肌纤维化及超微结构的影响
目的 探讨甘精胰岛素对糖尿病大鼠心肌的保护作用.方法 将雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)和胰岛素治疗组(DI组),DI组给予甘精胰岛素经腹部皮下注射,治疗5周后称重并计算心脏体重比(H/B);免疫组化法测定各组心肌转化生长因子β_1(TGF-β_1)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)的表达;透射电镜观察心肌超微结构.结果 ①与NC组比较,DM组和DI组的H/B、TGF-β_1、collagen Ⅲ均明显增高(P<0.05);与DM组比较,DI组的H/B、TGF -β_1、collagen Ⅲ均下降(P<0.05).②心肌超微结构:DM组肌原纤维排列紊乱,线粒体增多,常有肿胀变性;而DI组病变轻微.结论 甘精胰岛素降低了心肌组织中TGF-β_1及collagen Ⅲ的表达,延缓了糖尿病大鼠心肌纤维化的进程,改善了心肌超微结构.
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γ干扰素对瘢痕疙瘩成纤维细胞转化生长因子β/Smad信号通路的作用
目的 了解γ干扰素(IFN-γ)对瘢痕疙瘩Fh(KFb)中TGF-β/Smad信号通路的作用,探讨IFN一γ治疗病理性搬痕的可能机制. 方法 切取3例患者的瘢痕组织,体外分离培养KFb,实验选用第3～5代细胞.(1)将KFb分为:对照组,加无血清DMEM培养;TGF-β_1组,用10 ng/mL的TGF-β_1单独作用;IFN-γ组,用100 ng/mL的IFN-γ单独作用;TGF-β_1+IFN-γ组,10 ng/mL的TGF-β_1与100 nS/mL的IFN-γ联合作用.采用实时荧光定量RT-PCR、蛋白质印迹法和免疫荧光细胞化学染色法,分别检测结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA、蛋白表达,以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达与阳性细胞表达情况.(2)另取KFb,用10 ng/mL的IFN-γ作用,于作用前及作用后30 min和1、2、4、6、8 h通过实时荧光定量RT-PCR检测Smad 3和Smad 7的mRNA表达,于作用前及作用后1、2、4、6、8 h用蛋白质印迹法检测Smad 3和Smad 7的蛋白表达.(3)另取KFb,根据添加的IFN-γ终浓度不同分为1、10、100 ns/mL IFN-γ组,均作用4 h;设立未添加IFN-γ的KFb为对照组.同前检测各组Smad 3和Smad 7的mRNA及蛋白表达. 结果 (1)IFN-γ组KFb CTGF的mRNA和蛋白表达量为0.017±0.009与1.198±0.004,较对照组(0.024±0.013与1.229±0.011)显著减少(P<0.05);TGF-β1+IFN-γ组CTGF的mRNA和蛋白表达量为0.634±0.138与1.204±0.010,较TGF-β_1组(1.331±0.298与1.727±0.004)显著减少(P<0.01).IFN-γ组KFb中,α-SMA阳性细胞荧光强度(0.922±0.059)和α-SMA蛋白表达量(0.3051±0.0031)较对照组(1.055±0.005与0.4513±0.0094)显著减少(P<0.01);TGF-β1+IFN-γ组SMA阳性KFb荧光强度(1.129±0.004)和SMA蛋白表达量(0.6734±0.0098)较TGF-β_1组(1.270±0.005与1.38420.0024)显著减少(P<0.01).(2)10 ng/mL IFN-γ作用后第1个时相点,Smad 3的mRNA和蛋白表达量均出现一过性增高,随后降低,mRNA表达量于作用后4 h降至低点,随后缓慢上升,至作用后8 h仍低于作用前(P<0.01);其蛋白表达量于作用后2~8 h显著低于作用前(P<0.01).而Smad 7的mRNA和蛋白表达量在INF-γ作用后逐渐增高,分别于作用后2、4 h达峰值随后降低,至作用后8 h仍高于作用前(P<0.05).(3)与对照组比较,1、10、100 ng/mL IFN-γ组Smad 3的mRNA及蛋白表达量显著减少(P<0.05或P<0.01),Smad 7的mRNA及蛋白表达量显著增加(P<0.05或P<0.01),且随IFN-γ浓度升高,减少或增高幅度愈为显著. 结论 IFN-γ呈时间和剂量依赖方式下调Smad 3、上调Smad 7,降低基础状态下或经TGF-β_1诱导后KFb的CTGF和α-SMA表达量,表现出对TGF-β/Smad 信号通路的显著拮抗作用,这可能是IFN-γ治疗病理性瘢痕的重要机制.
