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革兰阴性菌β-内酰胺酶的耐药性问题
近年来,革兰阴性细菌由β-内酰胺酶(β-lactamase,BLA)介导的耐药性问题十分突出.由于能水解新的β-内酰胺底物的BLA不断出现;对酶抑制剂敏感性下降的BLA的出现;以及在同一细菌体内有几种BLA型别同时出现,使一些临床常见的革兰阴性病原细菌获得更强的针对β-内酰胺抗生素的耐药能力,导致治疗失败,给临床诊断和控制感染带来巨大的挑战.一、β-内酰胺酶分类
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基于23S rDNA基因的病原细菌通用检测寡核苷酸芯片
目的:利用新兴的生物芯片技术,以细菌23S rDNA基因为靶序列,实现常见病原细菌的通用检测.方法:从核酸数据库中调用一些病原细菌的23S rDNA基因序列,在指定的片段内设计目的细菌的种特异性寡核苷酸探针,用适当的方法固定在玻片上,制备寡核苷酸芯片;扩增实验细菌23S rDNA基因片段,并同时完成荧光素的掺入标记,标记扩增产物纯化后,与芯片进行杂交,根据杂交结果进行条件优化及芯片评价.结果:通过对探针、固定化、标记、杂交等条件进行优化,本实验中所使用的多种实验细菌可以在4h左右通过杂交得到准确鉴定;以奇异变形杆菌为对象,本系统低检出菌液浓度为100个/ml,即反应体系中含10个菌体即可检出.结论:本研究建立的寡核苷酸芯片系统可以稳定而特异地实现多种细菌的通用检测,具有良好的应用前景.
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稳定期精神分裂症患者伴发的细菌性肺炎分析
目的 分析精神分裂症(稳定期)患者伴发的细菌性肺炎临床表现特点,探讨细菌性肺炎与精神分裂症(稳定期)患者新出现的精神症状的相关性.方法 将我院同期成人因细菌性肺炎住院的精神分裂症(稳定期)患者与非精神疾病患者,随机抽取各100例,分为精神分裂症组(精分症组)和对照组,进行调查分析.比较两组细菌性肺炎的临床表现特点和差异性.结果 精分症组细菌性肺炎临床表现与对照组比较,存在统计学显著性差异(P<0.05).结论 精神分裂症(稳定期)患者伴发的细菌性肺炎临床表现,有其明显差异性特点,常常发病隐匿,病情更加严重,新出现的精神症状如厌食、拒食、卧床少动、懒言与细菌性肺炎有密切相关性.提示精神分裂症(稳定期)忠者伴发细菌性肺炎时,常常出现新的精神症状.临床上,应重视对精神分裂症(稳定期)患者的全面体检,尤其是对出现上述新的精神症状的病人的全面体检,警惕发生细菌性肺炎的可能.
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新型隐球菌性脑膜炎的实验室诊断
目的 探讨新型隐球菌性脑膜炎的实验室诊断方法 .方法 对脑脊液标本进行墨汁染色镜检,查找新型隐球菌.结果 13例新型隐球菌性脑膜炎患者的脑脊液标本均镜检到新型隐球菌,而对照组未镜检出一例阳性.结论 因新型隐球菌性脑膜炎的临床表现与结核性脑膜炎很相似,实验室几乎均未将墨汁染色镜检新型隐球菌作为脑脊液的常规检测项目,故新型隐球菌性脑膜炎往往不能及时确定而被误诊.对脑脊液标本进行墨汁染色镜检,是诊断新型隐球菌性脑膜炎的非常有效的方法 ,应将墨汁染色镜检新型隐球菌作为脑脊液的常规检测项目而日常开展.
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科学家揭示病原菌攻击 宿主细胞新机制
创伤弧菌是一类让人类谈"菌"色变的病原细菌,俗称"吃人肉细菌".如处理海鲜时如不小心扎了手,创伤弧菌就有可能趁虚而入,迅速引发败血症、组织坏死等,致死率极高.浙江大学生命科学研究院教授朱永群团队发现这类病原菌的一项"攻术",它分泌的毒素会定向"冻"住宿主细胞的信号通路,让细胞动弹不得甚至"散架".
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病原检测规范化有利于遏制细菌耐药性发展
由于细菌学报告不能即时获取,经验用药已成为医生主要的用药方式,而临床经验性选择有效抗生素依赖于本地区正确的病原细菌的检测及细菌耐药性监测数据.正确的数据来自于标准化的实验方法和规范的操作程序.不规范的操作所获得的错误结果只能误导用药,加速细菌耐药性的发展,增加医疗风险,因此加强病原微生物实验室规范化建设有利于遏制细菌耐药性发展.下面对至今仍被忽略的六个方面作评述.
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029 用多探针定量聚合酶链反应法进行病原菌的检测和鉴定
目前临床上对病原细菌的标准检出方法仍为分离培养，此法耗时且可能出现假阴性。聚合酶链反应(PCR)由于其快速、灵敏的特点而被推荐用于病原菌的检出。针对细菌保守的16S rRNA设计引物……
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血流感染病原菌的分布与耐药性分析
目的 了解上海长海医院血流感染患者的病原菌分布及其对抗菌药物的耐药性,为临床合理用药提供依据.方法 采用自动化仪器法和纸片扩散法(K-B法)对分离于2013年1月至2014年12月的菌株进行药物敏感性试验,参照2014版CLSI M100-S24标准判断药敏结果,替加环素的判读参照FDA标准,头孢哌酮-舒巴坦的判读参照头孢哌酮标准(2014年CLSI M100-S24).结果 从血流感染患者中共分离出非重复细菌1 048株,排名前3位的为大肠埃希菌(29.5％)、凝固酶阴性葡萄球菌(15.8％)和肺炎克雷伯菌(13.8％).细菌总数位于前5位的科室分别为消化内科、血液内科、普外科、泌尿外科和感染科.不同科室分离出的细菌种类和数目不同.药敏结果显示,产超广谱βS内酰胺酶(ESBL)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别为63.8％和38.6％,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌占该菌总数的77.6％.泌尿外科分离的大肠埃希菌对头孢菌素耐药率高于总体水平,而消化内科分离的大肠埃希菌对p内酰胺类-酶抑制剂复合制剂和碳青霉烯类抗生素的耐药率高于总体水平和其他科室.血液内科、泌尿外科和神经外科分离的凝固酶阴性葡萄球菌对甲氧西林的耐药率较高,神经外科分离菌耐药率更为100％.烧伤监护室的肺炎克雷伯菌对所有检测抗菌药物的耐药率均高于总体水平,消化内科的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类和替加环素的耐药率高于总体水平.结论 不同科室分离出的血流感染细菌分布及其对常用抗菌药物的耐药性呈现不同特点,应加强监测各重点病区的病原菌分布及其耐药性,以指导抗生素的合理应用.
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2001-2002年我院病原菌流行情况及耐药性分析
目前细菌耐药性问题日益突出,了解病原细菌,选择有效药物,防治感染十分重要.现报道我院2001～2002年临床菌株的分布情况及耐药性.
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食品检验中多重PCR技术的应用
食品中污染的病原细菌是引起食源性疾病的主要因素之一.据国家食源性疾病监测网的统计资料显示近十年来由微生物引起的食源性疾病事件和涉及人数多,其中又以副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)、沙门菌(Salmonella)、大肠杆菌(Escherichia coli)等病原细菌为主要的病原物质[1].因此,快速的检测与鉴定食品中病原细菌是及时有效控制与预防病原细菌传播、预防食物中毒的重要前提.
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人类病原细菌中的群体感应
群体感应(quorum sensing)是细菌用于调控基因表达从而改变细胞功能的普遍机制,不同的细菌种群具有不同的群体感应机制.对几种典型病原细菌群体感应机制的研究表明,病原细菌的群体感应与其侵染过程,毒素的产生以及终的致病过程都有着密切的关系.因此,对细菌群体感应的深入研究有助于真正的了解病原细菌的致病机理,从而为新的治疗方法提供思路和策略.
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16S rRNA基因序列分析法鉴定病原细菌
目的：运用16S rRNA 基因序列分析法鉴定14种细菌，为该方法的临床应用奠定基础。方法：提取细菌DNA，采用通用引物PCR扩增16S rRNA 基因片段并测序。将测序结果用Blastn 在线软件在Nucleotide 数据库中进行序列同源性比对，根据序列同源性鉴定病原细菌。结果：12种细菌可以鉴定到“种”，2种细菌可以鉴定到“属”。结论：16S rRNA 基因序列分析是一种有效的病原细菌鉴定方法。
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PCR产物直接测序快速识别病原菌
[目的]结合PCR和DNA测序技术,建立一种适用于传染性疾病预防控制的快速准确地识别病原细菌的分子检测方法.[方法]以布鲁氏菌为例,利用PCR分别从纯培养物、模拟标本中扩增布鲁氏菌16S和31kd基因,并对扩增产物测序,与数据库进行比对,根据比对结果确定扩增产物是否来源于布氏菌.[结果]从纯培养物和模拟标本成功扩增特异产物,测定序列与数据库比对,能很快准确确定病原的种类,优于单纯的PCR扩增.[结论]结合PCR扩增和产物测序的分子检测方法切实可行,为疾病预防控制体系中病原菌的快速识别提供了一个快速、高效和准确的方法.
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海洋病原细菌的氯霉素耐药菌株筛选鉴定及质粒消除
目的从污染海域筛选非临床氯霉素耐药株,研究耐药基因定位及耐药机制多样性.方法TCBS和EMB选择平板筛选,结合16S rDNA序列分析鉴定耐药株.MIC测定、基因组DNA-RAPD分型和质粒消除评估多样性.结果评估187株氯霉素耐药株的MIC值分布、属种分布、耐药基因定位及耐药机制.发现80株耐药MIC 25～128μg/ml是CLSI/NCCLS(1995年)定义临床标准(MIC 12.5μg/ml)的2～10倍,分布在弧菌科和肠杆菌科主要属种;58株MIC＞25μg/ml基因组DNA-RAPD分型与菌落表型分组结果吻合,显示多样性丰富.采用多轮高温(～43℃)和高浓度(～1%)SDS双重处理和交替培养,77株MIC＞25μg/ml分离株的质粒消除效率为28.6%;55株不能消除耐药表型,暗示染色体编码耐药基因;22株可消除氯霉素耐药表型,其中16株完全消除,暗示质粒独立编码耐药基因,6株部分消除,暗示质粒和染色体分别编码耐药基因.结论来自污染海域环境的非临床氯霉素耐药株可作为新模型,提供耐药基因定位及耐药机制多样性的新视野.
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5·12汶川地震伤患者感染病原菌分布及药物敏感试验结果分析
目的 分析5·12汶川地震伤患者感染病原菌的分布及抗菌药物敏感试验结果,为特大自然灾害抗感染治疗提供参考依据.方法 收集2008年5～2008年7月地震伤患者送检各类样本中分离的非重复病原菌共441株.所有菌株以BD Phoenix100或VITEK 32全自动微生物分析仪鉴定到种,药敏试验采用BD Phoenix100或VITEK 32配套药敏试验复合板,药敏标准按2007年版CLSI/NCCLS规定执行.结果 地震伤住院患者以伤口感染和呼吸道感染常见,感染病原菌种类分布广,覆盖13个菌属,主要包括不动杆菌属、假单胞菌属、埃希菌属、肠杆菌属、葡萄球菌属等,感染病原菌中以多重耐药革兰阴性杆菌比革兰阳性球菌更为常见,并且合并2种甚至3种细菌的混合感染常见,混合感染率达60.6%.鲍曼不动杆菌耐药非常严重,除了有20%对亚胺培南和阿米卡星敏感,其余抗生素敏感率<12%;铜绿假单胞菌对氨基糖苷类(庆大霉素、阿米卡星、妥布霉毒)敏感率为80%;对哌拉西林、哌拉西林/他哇巴坦、头孢他啶敏感率为61.4%～73.9%,亚胺培南敏感率为48.6%,对其余抗生素敏感率<50%;大肠埃希菌对亚胺培南敏感率为100%,对哌拉西林/他唑巴坦敏感率为73.9%,对其余抗生素敏感率<35%;阴沟肠杆菌对亚胺培南敏感率为100%,对其余抗生素敏感率<30%.金黄色葡萄球菌对万古霉素、利务唑胺敏感率为100%,对奎奴普丁/达福普丁、呋喃妥因、复方新诺明敏感率为92%～96%,对红霉素和克林霉素敏感率为57%～64%,对其余抗生素敏感率<40%.泛耐鲍曼不动杆菌为45.7%,泛耐铜绿饭单胞菌为4.3%,产ESBLs大肠埃希菌为68.5%,产ESBLs肺炎克雷伯菌为52.9%.对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌分离率为78.3%.结论 地震伤患者感染病原菌种类分布广、耐药严重,应根据药敏试验结果合理使用抗生素,同时做好消毒隔离工作,避免交叉毒染和医院感染爆发流行.
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临床几种常见病原细菌的通用基因芯片检测
目的建立一次实验就能检测出同一样品中的多个病原细菌的基因芯片.方法检索相关细菌的16 s rRNA序列,使用生物信息学软件针对每个细菌的四个可变区设计出4条寡核苷酸探针并制成基因芯片;利用此芯片对6种临床常见病原细菌进行检测.结果6种临床常见病原细菌的检测结果中除铜绿假单胞菌两条探针较弱外,其余5种均能正确与自己的探针杂交,并且混合样品检测结果达到了预期的目标.结论利用寡核苷酸芯片系统实现病原菌通用检测是完全可行的,对部分实验菌株进行初步考核,具有理想的特异性和灵敏度,可以进一步用于临床标本的检测.
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肠外瘘并发腹腔感染的致病菌谱与耐药性分析
目的 研究肠外瘘并发腹腔感染的主要致病菌谱及致病菌对常用抗生素的耐药特点.方法 取226例肠外瘘并发腹腔感染患者的腹腔脓液进行细菌培养和抗生素药物敏感试验.结果 获取菌株520株,其中革兰阴性菌333株,革兰阳性菌180株,真菌7株.前10位的为大肠埃希菌131株,金黄色葡萄球菌62株,肠球菌59株,铜绿假单胞菌50株,肺炎克雷伯杆菌23株,鲍曼不动杆菌18株,阴沟肠杆菌17株,奇异变形杆菌15株,摩氏摩根菌15株,粪肠球菌12株.大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌中表达超广谱13内酰胺酶阳性菌株分别为102株和17株.甲氧两林耐药金黄色葡萄球菌60株.结论 肠外瘘并发腹腔感染的致病菌谱以革兰阴性菌为主,超广谱β内酰胺酶阳性率较高;金黄色葡萄球菌则基本对甲氧西林耐药.
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PMA-PCR技术在植物病原细菌检疫中的应用前景
介绍了PMA-PCR技术检测活菌的方法，列举了该方法在食品、医疗和环境微生物检测领域的应用研究情况，并讨论了PMA-PCR技术在植物病原细菌检疫工作中的应用前景。
