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小分子干扰RNA沉默T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3表达对暴发性肝衰竭小鼠Kupffer细胞分泌细胞因子的影响
目的探讨T细胞免疫球蛋白及黏蛋白家族3（Tim-3）的小分子干扰RNA（siRNA）质粒对暴发性肝衰竭小鼠肝Kupffer细胞活化的调节作用并探讨其相关机制。方法采用D-氨基半乳糖（D-Galactosamine，D-GalN）和脂多糖（LPS）建立暴发性肝衰竭小鼠模型。将30只大鼠分成对照组及模型组，每组15只。分离所有小鼠Kupffer细胞，用特异性靶向Tim-3的siRNA片段沉默小鼠肝Kupffer细胞中的Tim-3，同时将模型组小鼠进一步分成空转染组、特异siRNA组及阴性siRNA组。采用Real time PCR和Western blot检测Tim-3的表达，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测Tim-3沉默后Kupffer细胞中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）及IL-6的表达，并采用ELISA及Western blot检测核因子-κB（NF-κB）通路对炎性细胞因子表达的影响。结果模型组Tim-3 mRNA的表达显著高于对照组（48.3±6.8 vs.10.3±1.8，t=0.007，P<0.05），且特异siRNA组Tim-3 mRNA的表达（18.3±3.5）显著低于空转染组（58.3±7.5）及阴性siRNA组（57.3±7.1）的表达（F=118.5，P<0.05）。在转染后3、6、24 h，特异siRNA组中TNF-α（F=68.76、73.55、92.36，P均<0.05），IL-1β（F=32.1、86.5、112.3，P均<0.05）及IL-6（F=178.9、98.7、89.9，P均<0.05）的表达均显著高于空转染组及阴性siRNA组。同时，特异siRNA组的NF-κB蛋白的表达在转染3 h （F=48.9，P=0.020）、6 h （F=107.4，P=0.002）、24 h （F=148.9，P=0.001）均显着高于空转染组及阴性siRNA组。结论 Tim-3通过NF-κB蛋白表达参与了暴发性肝衰竭小鼠肝Kupffer细胞活化的调节。
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干扰素疗效与慢性乙型肝炎患者外周血CD8+T细胞程序性死亡受体-1和T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3表达的关系
目的 探讨干扰素抗病毒疗效与慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD8+T细胞程序性死亡受体1(PD-1)和T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim3)表达的关系.方法 以72例HBeAg阳性CHB患者作为研究对象,分别采集干扰素治疗前和治疗12个月的抗凝外周静脉血,同期以30例健康人作为研究对照,用流式细胞技术检测CD8+T细胞PD-1和Tim3的表达.结果 干扰素治疗前,CHB患者外周血CD8+T细胞PD-1和Tim3表达的中位百分率分别为35.5%和4.8%,均显著高于健康对照组(29.3%和3.6%),差异均具有统计学意义(U = 805.0、P = 0.043,U = 741.5、P = 0.013).干扰素治疗12个月时,患者CD8+T细胞PD-1和Tim3的表达分别为32.7%和4.1%,较治疗前显著下降,差异具有统计学意义(Z = 3.305、P = 0.001,Z = 2.065、P = 0.039);在获得HBeAg血清学转换者中,CD8+T细胞PD-1和Tim3表达的中位百分率均显著低于无转换者,差异均具有统计学意义(U = 209.0、P < 0.001, U=302.0,P<0.001);在ALT复常与异常者之间,两项指标的中位百分率差异无统计学意义(U=229.5、P = 0.635,U = 209.5、P = 0.405);在HBV DNA载量低于检测下限者中,CD8+T细胞PD-1表达的中位百分率显著低于病毒仍可检测的患者(U = 371.5、P = 0.011),而CD8+T细胞Tim3的表达两者差异无统计学意义(U = 558.0、P = 0.727).结论 CHB患者外周血CD8+T细胞PD-1和Tim3呈高表达状态,干扰素治疗可以下调其表达,并且其表达降低与干扰素疗效有关.
关键词： 肝炎 乙型 慢性 干扰素 外周血CD8+T淋巴细胞 程序性死亡受体-1 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3 -
T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3在乙型肝炎病毒感染慢性化中的作用机制
T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)是新近发现的免疫负调控分子,在固有免疫和适应性免疫细胞中均有表达,具有广泛的免疫调控功能.在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染过程中,Tim-3在T淋巴细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞等多种类型的免疫细胞中表达增加.Tim-3过表达往往伴随着上述细胞的功能受损,而阻断Tim-3表达可恢复其部分免疫功能.因此,未来深入了解HBV感染过程中Tim-3对宿主免疫应答的调节作用,可进一步揭示HBV相关肝病的发病机制,从而为HBV感染的免疫治疗提供新靶点.
关键词： 乙型肝炎病毒 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3 固有免疫 适应性免疫 -
PD-1、TIM-3和TREM-1基因多态性与肺结核易感性的相关性
目的 探讨细胞程序性死亡因子1(PD-1)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(TIM-3)和髓样细胞触发性受体1(TREM-1)基因多态性与肺结核易感性的相关性.方法 采用病例-对照研究方法,收集2015年3月至2016年9月江苏省常州市金坛区人民医院就诊的100例肺结核患者(肺结核组)和100名社区健康体检者(健康对照组)的外周静脉血.采用高通量测序方法,对66个PD-1、TIM-3和TREM-1基因的单核苷酸多态性(SNP)位点进行基因分型以及连锁不平衡分析和遗传模块分析,探讨两组SNP基因型和等位基因频率的差异.结果 24个SNP被剔除[哈温平衡卡方检验P值(HWE-P)<0.001或者小等位基因频率(MAF)<0.05],剩余42个SNP的基因型频率分布在肺结核组和健康对照组中差异均无统计学意义(均P>0.05).PD-1基因的5个 SNP 位点(rs41435650、rs28539662、rs13023138、rs75565781、rs36084323)构成的单体型TACGC在两组之间差异有统计学意义(P=0.014),其中位点rs28539662与 rs75565781(r2=0.871)及 rs36084323位点(r2=0.864)具有较强的连锁不平衡关系,rs75565781与 rs36084323位点的连锁不平衡关系强(r2=0.966).结论 PD-1、TIM-3和TREM-1基因多态性与肺结核的发病无显著相关性.
关键词： 结核 肺 多态性 单核苷酸 程序性死亡因子1 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3 髓样细胞触发性受体1 -
程序性死亡受体1和T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3在乳腺癌肿瘤微环境中的表达、分布及其与临床病理特征的关系
目的 探讨程序性死亡受体1(PD-1)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(TIM-3)在乳腺癌肿瘤微环境中的表达、分布特征,并分析两者之间的相关性及其与临床病理特征的关系.方法 收集嘉兴市第一医院乳腺病科2016年6月至2017年5月收治的30例浸润性乳腺癌确诊患者术后肿瘤组织标本及癌旁组织标本,将标本沿中心分为两份,一份经包埋、冷冻切片后,采用免疫荧光组织染色法观察肿瘤组织中PD-1、TIM-3蛋白表达情况及分布特征,另一部分标本经剪碎、消化后,采用非连续密度梯度离心法提取肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs),通过实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)测定TILs中PD-1、TIM-3的mRNA相对表达量,同时通过Western blotting技术测定其蛋白表达量.分析PD-1、TIM-3的表达与乳腺癌临床病理参数的关系,并对PD-1、TIM-3之间进行相关性分析.结果 免疫荧光结果可见相对于癌旁组织,肿瘤组织中观察到了较多的PD-1、TIM-3阳性细胞.qRT-PCR显示TILs中PD-1、TIM-3 mRNA表达量均显著高于癌旁组织淋巴细胞(3.09 ±0.38比1.26±0.23、3.42 ±0.31比1.57±0.29,t=4.16、4.37,均P＜0.05).蛋白水平上,肿瘤组织淋巴细胞中PD-1、TIM-3的表达水平(0.66±0.08、0.80 ±0.11)均明显高于癌旁组织(0.10 ±0.01、0.26±0.02)(t=6.79、4.57,均P＜0.05).病理资料分析,在肿瘤组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移方面,患者肿瘤组织淋巴细胞PD-1、TIM-3 mRNA表达水平差异均有统计学意义(t=2.22～2.99,均P＜0.05).相关性分析显示,肿瘤组织中PD-1、TIM-3的表达之间呈显著正相关(r=0.616,P＜0.01).结论 在乳腺癌肿瘤微环境中,PD-1、TIM-3介导的信号通路对于乳腺癌的发生发展中发挥着重要作用,为乳腺癌的组合靶向治疗提供新的依据.
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小鼠单纯疱疹性角膜基质炎复发过程中Tim-3在角膜组织中的表达
目的:通过检测小鼠单纯疱疹性角膜基质炎(HSK)复发过程中T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)mRNA在角膜组织的表达水平,探讨Tim-3的表达与HSK复发之间的关系.方法:建立复发性HSK的BALB/c小鼠模型,用紫外线B光照射鼠的角膜诱导HSK复发;分别于紫外线照射前、照射后第3、7、10、14、21及28 d,采用RT-PCR方法检测全长的膜型Tim-3(flTim-3)和可溶型Tim-3(sTim-3)在角膜组织中的表达水平;裂隙灯显微镜下检查角膜基质炎程度.结果:处于病毒潜伏感染期的小鼠经紫外线照射诱导角膜基质炎复发后,角膜基质混浊于紫外线照射后的7～14 d达到高峰;sTim-3于3～14 d高表达,flTim-3于14～28 d高表达.结论:sTim-3的高表达与角膜基质炎的复发和发展有关,flTim-3可能有助于角膜基质炎的恢复.
关键词： 角膜炎 单纯疱疹病毒 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3 免疫病理 -
T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3与HBV感染的研究进展
研究发现T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子（TIM）3与许多疾病的发病相关联。HBV感染机体时，TIM-3作为一个负性免疫调节分子，在CD8＋T细胞上的表达明显增高，这表明它与HBV的发病机制密切相关。从TIM-3的生物学特性、HBV疾病转归和治疗靶点等方面回顾总结了TIM-3与HBV感染的新研究进展，认为TIM-3将会成为HBV治疗的新靶点。
关键词： 肝炎病毒 乙型 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3 综述 -
胃癌患者CD4＋／8＋T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3表达水平及意义
目的：观察胃癌患者外周血、癌旁组织和癌组织中CD4＋T细胞和CD8＋T细胞表面T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（Tim3）的表达情况及其对CD4＋T细胞和CD8＋T细胞功能的影响。方法抽取胃癌患者外周血，通过密度梯度离心法分选获取外周血单个核细胞（ PBMC）。获取的肿瘤组织及癌旁组织标本经研磨法获取肿瘤浸润T细胞。通过流式细胞染色的方法检测胃癌患者外周血、癌旁组织和癌组织中CD 4＋T细胞和CD8＋T细胞表面Tim3的表达情况。激活Tim3信号后，通过流式细胞术胞内染色的方法检测CD4＋T细胞和CD8＋T细胞表达肿瘤坏死因子（ TNF）-α和穿孔素的能力。结果与胃癌患者外周血CD4＋／8＋T细胞表面Tim3表达水平相比，胃癌患者癌旁组织和癌组织浸润CD4＋／8＋T细胞表面Tim3表达水平显著升高（ P＜0.01）；且与胃癌患者癌旁组织浸润CD4＋／8＋T细胞表面Tim3表达水平相比，胃癌患者癌组织浸润 CD4＋／8＋T细胞表面 Tim3表达水平显著升高（P＜0.01）。激活Tim3信号后，CD 4＋T细胞分泌 TNF-α的能力显著降低（P＜0.01），同时 CD8＋T细胞分泌穿孔素的能力亦显著降低（P＜0.01）。结论胃癌组织CD4＋T细胞和CD8＋T细胞表面Tim3表达水平的升高可能与胃癌的进展密切相关。
关键词： 胃癌 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3 -
胃癌患者外周血Vδ2 T细胞表面Tim3表达
目的 探讨胃癌患者外周血Vδ2 T细胞比例及其表面T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子(Tim)3的表达情况及其对Vδ2T细胞功能的影响.方法 抽取胃癌患者外周血,并通过密度梯度离心法获取外周血单个核细胞(PBMC).通过流式细胞染色法检测胃癌患者外周血Vδ2 T细胞比例及其表面Tim3的表达情况,分析胃癌患者外周血Vδ2 T细胞比例及Tim3表达情况与胃癌临床病理特征的关系.激活Tim3信号后,通过流式细胞术胞内染色法检测Vδ2 T细胞表达肿瘤坏死因子(TNF)-α和穿孔素的能力.结果 与健康对照相比较,胃癌患者外周血Vδ2 T细胞比例明显降低,Vδ2 T细胞表面Tim3表达水平明显升高(P<0.05);胃癌患者外周血Vδ2 T细胞比例及其表面Tim3表达与胃癌患者M分期及是否出现淋巴结转移有关(P<0.05),与T分期、年龄和性别差异无统计学意义(P>0.05).激活Tim3信号后,Vδ2 T细胞表达TNF-α和穿孔素能力显著降低(P<0.01).结论 胃癌组织外周血Vδ2 T细胞比例的降低及其表面Tim3表达水平的升高可能与胃癌的进展密切相关.
关键词： 胃癌 外周血 Vδ2T细胞 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3 -
Galectin-9在自身免疫性疾病中的研究进展
自身免疫性疾病(auto immune disease,AID)是指机体对自身成分产生免疫应答所导致的一种疾病状态,此种自身免疫反应会引起相关器宫的病变,从而导致风湿性疾病的发生.如常见的结缔组织病(connective tissue disease,CTD).CTD是一大类以结缔组织的慢性炎症为病理基础的风湿性疾病的总称,可累及全身各大组织器官,此类疾病除常见的发热、关节痛、肌痛等临床表现外,常合并系统的受累,其中间质性肺疾病(interstitial lung disease,ILD)是常见并发症之一[1].
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HBsAg对健康成人外周血单核细胞来源树突状细胞Tim-3信号通路的影响
目的 探讨HBsAg对健康成人外周血单核细胞来源树突状细胞(MD-DCs)的免疫活性及对T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)和下游信号分子核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响.方法 分离健康成人外周血单核细胞,经GM-CSF、IL-4联合诱导为树突状细胞(DCs),流式细胞术检测DCs表面标志物表达水平.MD-DCs分4组添加不同浓度HBsAg(0、1、2、5μg/ml),分别设为对照组、+1μg/ml组、+2μg/ml组、+5μg/ml组,Western印迹法检测Tim-3、NF-κB信号蛋白表达,细胞增殖与毒性检测试剂检测MD-DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,ELISA法检测细胞因子分泌水平.结果 外周血来源单核细胞成功诱导分化为DCs.与对照组相比,+2μg/ml及+5μg/ml组MD-DCs Tim-3及NF-κB表达水平均上调,刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力均增强,炎症因子IL-6、IL-10、IFN-γ分泌水平均增高(均P＜0.05),而+1μg/ml组较对照组无统计学差异(均P＞0.05).与其他3组相比,+5μg/ml组MD-DCs Tim-3、NF-κB、炎症因子分泌水平增高,刺激同种异体淋巴细胞增殖能力增强(均P＜0.05).结论 HBsAg上调MD-DCs Tim-3及NF-κB表达水平,增强MD-DCs免疫活性,且刺激作用随HBsAg浓度的增高而增强.
关键词： 树突状细胞 肝炎表面抗原 乙型 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3 核因子-κB -
T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3对单纯疱疹性角膜基质炎的免疫调节作用
目的 研究T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(T cell immunoglobulin andmucin-do-main-containing molecule-3,Tim-3)在小鼠单纯疱疹性角膜基质炎(herpetic stromal keratitis,HSK)发病机制中的免疫调节作用.方法 将1.0×106空斑单位的单纯疱疹病毒1型KOS毒株接种于BALB/c鼠的角膜上,建立HSK动物模型;在角膜接种病毒的同时将抗Tim-3单克隆抗体100μg注射到aTim-3组小鼠的腹膜腔内作为aTim-3组;ISO对照组和NS对照组小鼠腹膜腔内注射非特异性免疫球蛋白同型对照抗体ISO 100μg或等容积的生理盐水.在裂隙灯显微镜下观察角膜的变化,检查角膜的组织学病理改变,用VERO细胞检测角膜病毒滴度,并行小鼠迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)检测和脾细胞体外分泌细胞因子的检测.结果 腹膜腔内注射抗Tim-3单克隆抗体的小鼠,角膜基质内炎性细胞较对照组小鼠明显增多、角膜混浊程度也较对照组小鼠明显严重(P均<0.01)、DTH值(1.025±0.088)mm明显强于ISO对照组和NS对照组[DTH值分别为(0.651±0.051)mm和(0.642±0.064)mm],差异均具有显著统计学意义(P均<0.01);同时,腹膜腔内注射了抗Tim-3单克隆抗体的小鼠,脾细胞分泌Thl型细胞因子IFN-γ的量(25.36±3.65)μg·L-1明显多于ISO对照组和NS对照组[分别为(19.23±1.82)μg·L-1和(18.73±0.98)μg·L-1],差异均具有显著统计学意义(P均<0.01);但腹膜腔内注射抗Tim-3单克隆抗体未影响小鼠角膜内病毒复制及小鼠HSK发病率和小鼠死亡率.结论 Tim-3作为一个免疫调节分子,通过抑制Th1型免疫反应,调节HSK的疾病程度.
关键词： 单纯疱疹病毒 角膜基质炎 角膜 Thl细胞 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3 -
髓系来源抑制细胞在胃癌患者外周血和肿瘤组织中的数量及其临床意义
目的 观察髓系来源抑制细胞(MDSC)在胃癌患者外周血的数量和肿瘤组织、癌旁组织的表达,探讨MDSC的数量与胃癌患者临床病理特征间的关系.方法 收集62例胃癌患者外周血和其中12例患者的新鲜肿瘤组织和癌旁组织以及20份健康志愿者外周血,流式细胞仪分析HLA-DR-CD33+ CD11b+MDSC的数量,采用One-way ANOVA和Mann-Whitney U检验以及t检验分析胃癌患者外周血MDSC的数量与肿瘤的浸润深度、分化程度、患者TNM分期和淋巴结转移的关系.结果 和健康志愿者相比,初诊胃癌患者外周血MDSC数量增加(P＜0.01);MDSC在胃癌患者外周血的数量与肿瘤的浸润深度、分化程度、患者TNM分期和淋巴结转移显著相关(P＜0.05);MDSC在同一病人胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织;复发/转移组患者外周血MDSC的数量明显高于无复发/转移患者(P＜0.05);胃癌患者外周血HLA-DR-CD33+ CD11b+MDSC高表达负性协同刺激分子T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3).结论 MDSC在胃癌患者外周血的数量与肿瘤恶性程度及复发转移密切相关.
关键词： 髓系来源抑制细胞 胃癌 肿瘤免疫逃逸 T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3
