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Endostatin-Angiostatin融合基因治疗大鼠C6胶质瘤的3.0T磁共振动态观察
目的 探讨3.0T磁共振在重组单纯疱疹病毒介导的Endostatin-Angiostatin(Endo-Angio)融合基因对大鼠C6胶质瘤疗效评价中的作用.方法 30只雄性Wistar大鼠采用立体定向方法在颅内接种C6细胞,将荷瘤大鼠随机分为两组,治疗组与对照组;两组大鼠分别于接种后1、2、3周进行MR检查;第2、3周检查结束后每组留取2只鼠脑标本进行病理学检查;治疗组大鼠于第1周检查后于肿瘤接种位置原位注入Endo-Angio融合基因进行治疗.结果 第1周检查共25只大鼠成瘤(成功率83%),第2周两组肿瘤体积均增大,二者无统计学差异(P＞0.01),病理检查显示治疗组大鼠微血管腔减少,间质水肿及细胞水肿较对照组明显严重;第3周时治疗组大鼠体积减小,小于对照组(P＜0.01).结论 重组单纯疱疹病毒介导的Endo-Angio融合基因对大鼠C6胶质瘤的生长有抑制作用,3.0T磁共振可以较好地动态观察大鼠C6胶质瘤的生长及治疗变化.
关键词： 大鼠 胶质瘤 基因疗法 endostatin Angiostatin 磁共振成像 -
urvive蛋白与血管抑素Angiostatin在卵巢上皮癌中的表达及其相关性的探讨
目的:探讨Survive蛋白及血管抑素Angiostatin在卵巢上皮癌中的表达及临床意义.方法:应用Survive蛋白的单克降杭体及血管抑素Angiostatin的单克降杭体,以SP免疫组织化学方法,对41例卵巢上皮癌、11例良性卵巢上皮瘤和10例正常卵巢组织的石蜡标本作Survive蛋白及血管抑素Angiostatin的检测,并分析卵巢上皮癌的临床病理资料.结果:(1)正常卵巢组织Survive蛋白及血管抑素Angiostatin均呈阴性表达,良性卵巢上皮瘤Survive蛋白呈阴性表达,血管抑素Angiostatin呈阳性表达.卵巢上皮癌中可有Survive蛋白及血管抑素Angiostatin表达,Survive蛋白在正常卵巢,卵巢良性肿瘤与卵巢恶性肿瘤之间2者的表达有极显著差异(P<0.01);血管抑素Angiostatin在正常卵巢、卵巢肿瘤之间2者的表达有极黑龙江省教育厅资助项目编号 10543060显著差异(P<0.01);卵巢上皮癌与卵巢上皮瘤相比2者的表达呈升高趋势,但不具有统计学意义(P>0.05);(2)Survive蛋白的阳性表达与卵巢上皮癌的临床分期、组织分化程度及病理类型正相关(P<0.05);血管抑素Angiostatin的阳性表达与卵巢上皮癌的临床分期、组织分化程度及病理类型呈负相关(P<0.05);(3)Survive蛋白及血管抑素Angiostatin的阳性表达与卵巢上皮癌的预后有关(P<0.05):(4)Survive蛋白及血管抑素Angiostatin在卵巢上皮癌中的表达呈正性相关,2者表达无显著性差异(P>0.05).结论;Survive蛋白及血管抑素Angiostatin可能是卵巢上皮癌发生的相关基因,与肿瘤的发展及转移有关,检测Survive蛋白及血管抑素Angiostatin可以佑计卵巢上皮癌患者的预后,辅助指导临床化疗.
关键词： 卵巢肿瘤 Survive Angiostatin 免疫组织化学 预后 -
Angiostatin基因联合反义HIF-1α基因治疗人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究
目的 研究Angiostatin基因联合反义缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因治疗人肝癌裸鼠皮下移植瘤的协同抑制作用.方法 用人肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型.四组荷瘤裸鼠分别注射质粒PcDNA3、Angiostatin/PcDNA3、HIF-1α/PcDNA3B、Angiostatin/PcDNA3+HIF-1α/PcDNA3B.观察肿瘤生长曲线,检测肿瘤的Angiostatin、血管内皮生长因子(VEGF)、HIF-1α表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析.结果 Angiostatin基因治疗在早期具有抑制肿瘤生长的作用;Angiostatin基因治疗组的MVD(24.8±2.8)低于空质粒对照组(30.2±4.1),VEGF表达高于空质粒对照组,细胞凋亡指数(2.87±0.48)高于空质粒对照组(1.55±0.43);联合治疗组有明显抑制肿瘤生长的作用,HIF-1α局部低表达,MVD(14.6±2.1)低于Angiostatin基因治疗组(24.8±2.8),VEGF表达低于单独治疗组,细胞凋亡指数(5.12±0.63)高于单独治疗组.结论 肿瘤对Angiostatin基因治疗可以产生耐受性;反义HIF-1α基因阻断肿瘤的缺氧适应途径在一定程度上解决了抗血管生成治疗的耐药性问题.
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C6细胞表达的人Angiostatin Kringle(1-3)体外抑制血管内皮细胞生长的研究
为研究人Angiostatin Kringle(1-3) [AK(1-3)]抑制血管内皮细胞生长的活性,利用脂质体法将带有大鼠血清白蛋白分泌信号的人AK(1-3)基因导入大鼠C6胶质瘤细胞,并用G418筛选获得目的细胞株.采用电镜、流式细胞术、免疫组化和Western blot等方法,检测转染前后细胞超微结构、细胞周期及AK(1-3)蛋白表达情况,并用人脐静脉内皮细胞增殖实验检测目的细胞株表达的AK(1-3)蛋白抑制血管内皮细胞生长的活性.结果表明,成功转染人AK(1-3)基因的大鼠C6胶质瘤细胞可稳定表达AK(1-3)蛋白,且具有抗血管内皮细胞增殖活性的良好作用,为进一步进行体内抗血管生成基因治疗奠定了基础.
关键词： Angiostatin C6细胞 胶质瘤 基因治疗 -
IFN-β和angiostatin对猪淋巴管内皮细胞生成的影响
目的 探讨IFN-β和angiostatin分别在离体和在体条件下对淋巴管内皮细胞生成的影响.方法 淋巴管在体抑制实验观察活体被切断的淋巴管应用抑制因子后的再生情况,应用光镜、透射电镜、共聚焦显微镜观察离体猪胸导管内皮细胞的形态结构,应用MTT法来确定IFN-β对淋巴管内皮细胞生成的抑制作用,采用Hoechst法检测细胞凋亡.结果 手术切断兔前或后肢淋巴管5d后,生理盐水侧的淋巴管已愈合,angiostatin侧仍有大量染料渗漏.培养的胸导管内皮细胞的突出结构特点是胞质内有较多吞饮小泡以及从细胞膜上发出许多长突起.MTT法去显示IFN-β对离体淋巴管内皮细胞的增殖有明显的抑制作用,IFN-β可引起细胞凋亡.结论 Angiostating对在体淋巴管的愈合有抑制作用,IFN-β对离体淋巴管内皮细胞的增殖有明显的抑制作用并促进细胞凋亡.
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抗血管生成因子Angiostatin与Endostatin作用下肿瘤血管生成的二维数值模拟
目的 数值模拟抗血管生成因子Angiostatin和Endostatin对肿瘤血管生成的影响.方法 建立肿瘤内外血管生成的二维离散数学模型.模型耦合两种抗血管生成因子Angiostatin和Endostatin的抑制效应,数值模拟在促血管生成因子诱导下肿瘤微血管网生成,讨论血管生成抑制因子的影响.结果 抗血管生成因子Angiostatin对肿瘤内外血管网络生成的速度和成熟度有抑制作用.抗血管生成因子Angiostatin和Endostatin耦合作用时,在肿瘤血管生成的早期有明显的抑制效应;在肿瘤血管生成的中后期,它们可以降低肿瘤血管化程度.结论 本文模型能够较好的模拟抗血管生成因子Angiostatin和Endostatin对内皮细胞迁移和增殖的抑制作用.
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血管抑素基因治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究
目的:研究血管抑素(Angiostatin)基因转染治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用及其相关机理.方法:使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型.随机将荷瘤裸鼠分为基因治疗组、空质粒组和空白对照组,分别于瘤体注射Angiostatin/PCDNA3、空质粒PCDNA3和无菌生理盐水,质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞.观察各组动物的肿瘤生长曲线,检测各组肿瘤Angiostatin、VEGF的表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析,计算细胞凋亡指数(AI).结果:基因治疗组裸鼠的肿瘤生长在早期受到明显抑制,大约1周后生长速度有所加快,肿瘤组织中Angiostatin蛋白局部高表达,VEGF的表达高于空质粒组和空白对照组,AI(4.21±0.49)高于空质粒组和空白对照组,MVD(19.3±3.2)低于空质粒组.结论:Angiostatin基因可以通过抑制血管生成而在一定程度上抑制肿瘤生长,其作用的发挥是独立于VEGF的.
关键词： Angiostatin 基因疗法 抗血管生成治疗 卵巢肿瘤 -
Angiostatin基因对C6胶质瘤体内生长的抑制作用
目的:研究血管生成抑制因子angiostatin对C6胶质瘤体内生长的影响.方法:以阳离子脂质体介导将angiostatin基因导入C6胶质瘤细胞,G418(1 000μg/ml)克隆筛选、扩大培养后接种于裸小鼠皮下,观察移植瘤生长的体积、重量变化及肿瘤抑制率,应用SABC免疫组化技术检测肿瘤微血管密度.结果:angiostatin cDNA 对体内生长的胶质瘤有显著抑制作用,抑瘤率可达82.2%(P＜0.01),转染组胶质瘤中微血管密度[(6.8±2.1)/HP]低于对照组[(16.7±4.8)/HP](P＜0.01).结论:angiostatin cDNA能通过抑制血管生成进而抑制胶质瘤生长,在胶质瘤临床治疗中有应用价值.
关键词： Angiostatin 基因疗法 胶质瘤 微血管密度 血管生成 -
内皮抑素
1 内皮抑素( endostatin,ES)人体血管的形成通常是由正负调控因子的平衡决定的,正调控因子促进血管形成和生长,而负调控因子则起抑制作用.20世纪70年代初,Folkman在大量实验研究基础上提出了"新生血管是肿瘤持续生长的必要条件"这一观点,他认为体积在1～2 mm3以下的肿瘤可通过渗透作用从周围组织中获得自身生长所需的营养物质,维持自身的生存.但肿瘤的进一步生长则需要依赖形成新生血管以获得充分的营养供应,一旦新生血管形成,肿瘤就开始迅速生长,变得更易发生浸润和转移.原发和转移性肿瘤的生长都是要依赖新生血管的.目前,已发现许多促血管形成和抑制血管形成的因子.促血管形成的因子包括:成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)等;抑制血管生长的因子包括:γ-干扰素诱导蛋白、血小板因子-4(platelet factor,PF-4)、泌乳素N末端16 KD的降解产物、血管抑素(angiostatin,AS)和内皮抑素( endostatin,ES)等.
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Study of the Influence of Angiostatin Intravitreal Injection on Vascular Leakage in Retina and Iris of the Experimental Diabetic Rats
Purpose: To examine the effect of an intravitreal injection of angiostatin on vascular leakage in retina and iris of the diabetes and study its possible mechanism.Methods: Experimental diabetes was induced in 24 rats by an intravenous injection of streptozotocin (STZ) during 48 adult rats. Three groups were randomization distributed of them. There were 8 of both normal and diabetic rats in each group. STZ-diabetic rats and age-matched normal rats received an intravitreal injection of 5 μl of sterile PBS (Phosphate Buffered Saline) into the right eye, and the left eye was non-injected in the group A; Angiostatin was injected into the vitreous of the right eye (7.5 μg/5μl/eye), and the left eye received the same volume of sterile PBS as the control in the group B and C. The vascular permeability of retina and iris was measured using the Evans blue method at 2 days following the injection in the group A and B. Expres sion of VEGF in retina was evaluated using western blot analysis 24 hours following the injection in the group C.Results: Diabetic rats showed significant increases of vascular permeability in the retina (P＜0.01) and iris (P＜0.05). Angiostatin-injected eyes showed significant decreases in vascular permeability in the retina (P＜0.01) and iris (P＜0.05) comparing with the PBS-injected eyes in STZ-diabetic rats. In contrast, intravitreal injection of the same dose of angiostatin into the age-matched normal rats did not result in any significant reduction in vascular permeability in the retina and iris, when compared with the contralateral eye with PBS injection (P＞0.05). Angiostatin injection significantly reduced VEGF level in the retinas of STZ-diabetic rats but did not affect retinal VEGF level in normal rats.Conclusions: Angiostatin significantly reduce pathological vascular permeability in the retina and iris of STZ-diabetic rats but not in normal rats. Angiostatin down-regulates VEGF expression and thus, blocks the major cause of vascular leakage in the diabetic retina. Therefore, angiostatin may have a therapeutic potential in the treatment of diabetic macular edema, cystoid macular edema, uvietis and other diseases with vascular leakage.
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Angiostatin kringle(1-3)体外诱导人脐静脉内皮细胞凋亡
目的探讨angiostatin kringle (1-3)[简称AK(1-3)]抑制血管内皮细胞增殖的作用机制.方法以加入重组人AK(1-3)蛋白(300 nmol.L-1)的含100 mL.L-1小牛血清DMEM培养基培养人脐静脉内皮细胞ECV304,72 h 后,采用透射电镜、流式细胞术细胞周期分析和核DNA琼脂糖凝胶(15 g.L-1)电泳检测重组AK(1-3)蛋白作用后血管内皮细胞的凋亡情况.结果实验组ECV304细胞检测到了典型的凋亡.透射电镜下可见细胞核染色质浓缩、边集、核碎裂及胞质浓缩等凋亡细胞典型的形态学改变;流式细胞术周期分析显示在G1期峰前存在一个凋亡峰(20.6%);核琼脂糖凝胶(DNA 15 g.L-1)电泳呈梯状.对照组ECV304细胞表现正常.结论重组人AK(1-3)蛋白诱导了血管内皮细胞的凋亡,这是其抑制血管内皮细胞增殖的机制之一.
关键词： Angiostatin 内皮细胞 凋亡 -
旁分泌形式作用的人AngiostatinK(1-3)抑制大鼠C6脑胶质瘤的研究
目的:研究人AK(1-3)[Angiostatin Kringle(1-3)]对大鼠C6脑胶质瘤的抑瘤效应.方法:利用基因转染的方法获得重组人AK(1-3)基因的C6胶质瘤细胞;以细胞增殖试验及免疫组化等方法检测转染细胞株是否表达了具有生物活性的人AK(1-3).正常大鼠C6脑胶质瘤模型作对照,研究转染细胞株在大鼠脑内的致瘤性.脑组织切片进行Ⅷ因子染色.结果:大鼠C6胶质瘤细胞稳定表达的人AK(1-3),在体外明显抑制牛主动脉内皮细胞的增殖;在体内明显抑制了大鼠C6脑胶质瘤的生长.试验组脑切片内仅见显微瘤灶,Ⅷ因子染色少见新生毛细血管.结论:旁分泌形式作用于大鼠C6脑胶质瘤内血管内皮细胞的人AK(1-3)可明显抑制肿瘤的血管生成,进而抑制肿瘤的生长和转移.
关键词： Angiostatin 旁分泌 C6胶质瘤细胞 基因疗法
