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两种肺纤维化模型小鼠肺组织胶原含量定量分析方法的比较研究
目的 利用两种肺纤维化小鼠模型,对肺组织中胶原表达定量分析的两种方法——天狼猩红染色图像分析和羟脯氨酸测定法进行比较.方法 采用20 Gy60Co γ射线胸部局部照射C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠分别建立敏感性/抗性肺纤维化模型,照射后3 m活杀取肺组织,左肺连续切片,根据均匀系统随机抽样的原则,在连续切片中均匀随机抽取一组切片,进行天狼猩红染色及图像分析;右肺采用碱水解法进行羟脯氨酸含量测定.结果 两种分析方法结果均表明,γ射线照射后3 m C57BL/6J小鼠肺组织胶原含量较照射前明显增高,且显著高于C3H/HeN小鼠肺组织中胶原含量.天狼猩红染色图像分析法显示,C57BL/6J小鼠肺组织胶原面密度为C3H/HeN小鼠的2.29倍,而羟脯氨酸测定法显示,C57BL/6J小鼠肺组织羟脯氨酸含量为C3H/HeN小鼠的1.34倍.结论 天狼猩红染色图像分析法较羟脯氨酸含量测定法能较理想地反映肺泡壁胶原含量的变化,且能更客观反映敏感性/抗性肺纤维化小鼠胶原表达的差异.
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肝纤维化发生发展过程中肝温度的变化规律
目的:研究肝纤维化发生、发展过程中肝温度变化的规律.方法:采用医用红外热像技术检测造模2,4,6,8wkCCl4肝纤维化大鼠模型及对照组大鼠肝脏温度,肝组织芯片行苏木素-伊红、天狼猩红及免疫组织化学染色,观察肝组织病理变化,Ⅰ,Ⅲ型胶原及层粘蛋白的表达.结果:正常大鼠肝右叶2,4,6,8 wk平均温度为28.1±1.0℃,27.2±0.8℃,30.7±1.0℃,29.1±0.7℃.肝纤维化大鼠模型组2 wk肝平均温度较对照组明显升高(P＜0.05,t=-2.518);模型组4 wk与对照组肝无明显差异,模型组6,8 wk肝平均温度较对照组明显降低(P＜0.05 t=3.773,P＜0.01 t=4.998);模型组2 wk病理变化以炎症及肝细胞变性为主,模型组4 wk间质成分增生明显,纤维化逐渐形成,模型组6 wk肝细胞大量坏死,中央静脉及汇管区纤维隔形成,模型组8 wk肝组织形成完整的假小叶;模型组2,4,6,8 wk大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原及层粘蛋白表达逐渐增多,2,4 wk以Ⅲ型胶原增加为主,4,8 wk以Ⅰ型胶原增加为主.结论:肝纤维化发生、发展的不同阶段,肝温度呈规律性变化.
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瘢痕疙瘩组织中胶原的形态学分析
目的研究瘢痕疙瘩组织中胶原的类型、含量及分布. 方法应用苦味酸-天狼猩红染色偏振光法、免疫组织化学法,结合图像分析技术,观察分析瘢痕疙瘩组织中胶原的含量及分布特点,并比较上述两种方法的优缺点. 结果瘢痕疙瘩由大量的胶原纤维结合在一起,组成厚实的嗜酸性胶原蛋白纤维束.Ⅰ型胶原纤维为黄色或红色,紧密排列,呈致密的条束状,纵横交错,排列紊乱,显示很强的双折光性.Ⅲ型胶原纤维,呈疏网状,显示弱的双折光,为绿色的细纤维,散布于Ⅰ型胶原周围.瘢痕疙瘩组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原分别占(64.5±2.7) % 和(30.7±2.6)%.苦味酸-天狼猩红染色和免疫组织化学法检测胶原具有良好的一致性(P＞0.05). 结论瘢痕疙瘩组织中主要含有Ⅰ、Ⅲ型胶原,胶原的排列分布及含量与普通瘢痕有明显差别.苦味酸-天狼猩红染色和偏振光法是检测瘢痕疙瘩组织中胶原的简易方法.
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博莱霉素大鼠肺纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原表达
特发性肺纤维化病因不明,中位生存时间仅3年左右,肺移植是目前唯一有望提供长期生存的方法.由于部分研究结论难以从临床患者中得到,肺纤维化动物模型便成为研究人类特发性肺纤维化的有力工具~[1].
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先天性胫骨假关节相关病理变化研究
目的明确先天性胫骨假关节 (CPT)病变骨膜中 I、 III型胶原的含量及排列 . 方法采用天狼猩红染色辅以计算机图像分析技术对 24例 CPT病人的 25个病变骨膜标本中 I、 III型胶原的含量进行检测 . 结果 CPT骨膜中 I、 III型胶原含量与正常骨膜及创伤性假关节中 I、 III型胶原含量相差显著 ( P< 0.01) ,而与纤维瘤病相比 I、 III型胶原表达相差不显著 (P >0.05). 结论 CPT的发病机制可能与骨膜上 I、 III型胶原的比率发生变化导致的异常纤维增生有关 .
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胶原-磺化羧甲基壳聚糖人工真皮支架修复Ⅲ度烧伤创面时组织TGF-β1表达与细胞凋亡的研究
目的 探讨胶原-磺化羧甲基壳聚糖人工真皮支架修复Ⅲ度烧伤创面时生物合成替代和细胞凋亡的机制,为临床应用提供理论依据.方法 将胶原-磺化羧甲基壳聚糖/硅橡胶双层人工皮肤支架移植于10头猪Ⅲ度烧伤清创后创面,对植入后1、2、3周的创面及植入后2周创面加植表皮后2周的修复情况进行观察.同时,通过免疫组织化学、TUNEL、天狼猩红染色方法,对不同时间的创面组织中转化生长因子p 1(TGF-p 1)的表达水平、细胞凋亡发生情况以及支架自身胶原替代情况进行观测.以不植入人工真皮支架的同期烧伤创面作为对照.结果 (1)实验组植入人工真皮支架后2～3周,创面颜色逐渐红润,并变光滑,而对照创面表面粗糙;(2)实验组TGF-β 1表达水平在人工真皮支架植入后1～2周持续增高且高于对照组,3～4周持续下降且低于对照组.对照组1～3周的创面持续升高,4周下降;(3)实验组植入后2～4周凋亡细胞持续增多且数量显著高于相应对照组,对照组3～4周时凋亡细胞持续增多;(4)人工真皮支架植入后1周,自身胶原已开始合成,植入后3周基本完成支架自身胶原替代.结论 胶原-磺化羧甲基壳聚糖人工真皮支架在创面修复中有明显作用,其修复创面的机制与自然的肉芽或瘢痕修复不同,在创面修复重建中有良好的应用前景.
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天狼猩红-偏振光法检测子宫内膜异位症中Ⅰ、Ⅲ型胶原
目的:探讨子宫内膜异位症中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量和作用.方法:对子宫内膜异位症(内异症)20例中的异位内膜组织红色病变期12例(A组)、黑色病变期8例(B组)和11例非子宫内膜异位症患者的在位子宫内膜组织(C组)用天狼猩红染色,偏振光观察,photoshop分析,半定量研究Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量.结果:Ⅰ、Ⅲ型胶原在C组中含量低(P＜0.05),Ⅲ型胶原在A组中含量高(P＜0.05),Ⅰ型胶原在B组中含量高(P＜0.05).Ⅰ、Ⅲ型胶原在增生期和分泌期差异无显著性(P＞0.05).结论:Ⅰ、Ⅲ型胶原的异常沉积可引起内异症患者腹腔内发生异常的免疫反应.
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Ⅰ、Ⅲ型前胶原核酶治疗裸鼠增生性瘢痕后胶原形态的改变
目的:研究Ⅰ、Ⅲ型前胶原核酶治疗裸鼠增生性瘢痕后胶原含量及分布的改变.方法:①建立裸鼠增生性瘢痕动物模型(80只).②将裸鼠随机分为:实验组(A组20只,注射Ⅰ型前胶原核酶;B组20只,注射Ⅲ型前胶原核酶;C组20只,注射Ⅰ型及Ⅲ型前胶原核酶;各组又分为2.5μg/100μL及5.0μg/μL两个剂量组,每个剂量组各10只裸鼠,每天用微量注射器行瘢痕内多位点注射1次,共7 d)及对照组(D组10只,注射生理盐水7 d;E组10只,空白对照组).③应用苦味酸-天狼猩红染色偏振光法,结合图像分析技术,观察分析各组胶原含量及分布的改变.结果:A组Ⅰ型胶原由紧密排列,变成较稀疏,提示含量减少;B组Ⅲ型胶原在血管旁及Ⅰ型胶原间分布减少;C组Ⅰ、Ⅲ型胶原均减少;D组和E组无明显变化.结论:Ⅰ、Ⅲ型前胶原核酶治疗裸鼠增生性瘢痕后,可使胶原的排列分布稀疏,含量减少,形态改变明显.
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病理性瘢痕中胶原纤维形态和结缔组织生长因子表达的检测
目的探讨结缔组织生长因子的表达与病理性瘢痕形成的相关性.方法分别留取正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织标本,应用天狼猩红偏振光法检测组织纤维化程度,应用SABC免疫组织化学法和图像分析技术检测组织中结缔组织生长因子的表达.结果和正常皮肤相比,增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织纤维化严重,结缔组织生长因子的表达显著增强.结论结缔组织生长因子在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩发病过程中可能发挥重要作用.
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胶原纤维的天狼猩红染色法与Vangieson染色法的比较
胶原纤维是结缔组织的一个主要组成成分,也是临床上许多器官病理变化的特征之一.因此胶原纤维的染色有助于医学生更好地了解、巩固和掌握人体正常结构,同时对临床上判断器官的病理变化具有极其广泛的用途.
关键词： 胶原纤维 天狼猩红 Vangieson染色法 -
天狼猩红-偏振光法检测子宫内膜异位症中Ⅰ, Ⅲ型胶原
目的探讨子宫内膜异位症中Ⅰ, Ⅲ型胶原的含量和作用. 方法对20例子宫内膜异位症(EM)患者的异位内膜组织(红色病变组和黑色病变组)和11例非子宫内膜异位症患者的在位内膜组织(对照组)用天狼猩红染色,偏振光观察,photoshop分析,半定量研究Ⅰ, Ⅲ型胶原的含量. 结果Ⅰ, Ⅲ型胶原在对照组中含量低(P<0.0 5, P<0.05),Ⅲ胶原在红色病变组中含量高(P<0.05),Ⅰ型胶原在黑色病变组中含量高(P<0.0 5). Ⅰ, Ⅲ型胶原在增生期和分泌期无明显差异(P>0.05). 结论子宫内膜异位症患者的异位组织中有Ⅰ, Ⅲ型胶原的表达. Ⅰ, Ⅲ型胶原的异常表达可能在EM的发病机制和病程进展方面有重要作用.
