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RAS基因家族在实体瘤中突变率的研究进展
RAS基因家族包含3种原癌基因,即KRAS、NRAS和HRAS.在多种肿瘤中RAS基因突变使其激活成为有致癌活性的癌基因.点突变、表达量升高以及插入/转位突变等是其常见的激活方式.深入了解RAS基因家族的突变特征以及其在各种肿瘤中的发生率,可以对肿瘤的发生、发展、早期诊断、靶向治疗以及预后起到很好的指导作用.本文分别从KRAS基因突变、NRAS基因突变以及HRAS基因突变3个方面,对RAS基因家族在实体瘤中突变率的研究进展进行文献回顾.
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基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因小鼠的建立
目的 构建基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲人人源hRas基因(c-Ha-ras)的小鼠,以获得hRas基因在特定组织器官条件性表达的小鼠模型,用于药物的临床前致癌性安全评价及相关机制研究.方法 首先构建hRas打靶载体,电击法转染入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用正负法筛选阳性ES细胞,通过PCR、Southern鉴定后,将正确重组hRas基因的ES细胞导人C57BL/6 J小鼠囊胚,移人同步发育的受体鼠子宫,妊娠足月出生的嵌合体小鼠与C57BL/6 J小鼠交配获得杂合子hRasfl/+小鼠.再将杂合予hRasfl/+小鼠间交配获得纯合子小鼠hRasn/fi,然后与全身组织细胞表达Cre重组酶的Tg (EⅡa-cre)小鼠进行交配,获得全身细胞表达hRas基因的hRas-EⅡa-cre小鼠,并通过荧光定量PCR方法检测不同日龄胚胎期仔鼠的hRas基因表达水平.结果 成功构建了基于Cre-LoxP系统的人源hRas基因条件性定点敲入小鼠模型的载体,筛选得到的一个正确克隆,电转ES细胞后进行Southern blot鉴定,经过初筛和复筛,共获得12个阳性克隆,挑选A11号克隆ES细胞进行囊胚注射,移植了48枚胚胎,出生9只小鼠,其中6只为嵌合鼠,将嵌合率＞50％的雄鼠与野生型C57BL/6 J雌鼠进行交配,出生21只后代,其中鉴定有4只hRasfl/+小鼠;hRasfl/+小鼠间交配出生29只小鼠,其中有14只纯合子hRasfl/fi小鼠;hRasf1/n小鼠与Tg (EⅡa-cre)工具鼠交配6次,未有仔鼠出生;跟踪不同发育时期胚胎中hRas基因的表达发现,E10.5～15.5 d胚胎中检测到hRas基因表达.结论 成功建立运用Cre-LoxP系统建立了带有hRas基因敲入的纯合子小鼠hRasfl/fl,未能得到全身细胞高效表达人源hRas基因的hRas-EⅡa-cre小鼠,但为进一步利用hRasfl/fl小鼠模型建立其他组织特异性的条件性基因敲人小鼠模型做好技术储备.
关键词： 条件性基因敲入 HRAS基因 Cre-loxp系统 癌症 -
PI3 K-AKT及MEK-ERK通路介导的HRAS-siRNA抑制人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭能力的研究
目的:探讨HRAS对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K-AKT通路的影响.方法:利用Rfect将HRAS-siRNA转入人舌癌鳞癌CAL-27细胞,同时设置阴性对照组及空白对照组,检测HRAS蛋白的表达水平,CAL-27细胞增殖活性、迁移和侵袭能力,并检测PI3K-AKT及MEK-ERK通路关键蛋白PI3K、p-AKT、AKT、ERK、p-ERK表达水平.结果:实验组HRAS蛋白的表达水平明显低于阴性对照组及空白对照组;HRAS-siRNA明显抑制CAL-27细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并且信号通路关键蛋白PI3K、p-AKT、p-ERK的表达水平明显降低.结论:HRAS-siRNA可明显抑制人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移及侵袭能力,推测其机制可能与PI3K-AKT及MEK-ERK信号通路有关.
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Costello综合征二例并文献复习
目的 探讨Costello综合征的临床特征.方法 分析2例Costello综合征患儿的临床特征、基因突变类型和随访情况,并以"Costello综合征""科斯特洛综合征""Costello syndrome"或"HRAS gene"为关键词,在中国知网、万方数据库及PubMed检索相关文献,总结国内外报道的该综合征的临床特征及基因类型.结果 2例患儿均表现为特殊面容(卷发、厚唇),且生长发育迟缓,均存在HRAS基因第2外显子杂合点突变.确诊后均予2例患儿神经营养药物治疗,并让其定期运动和接受语言康复训练及个性化教育等,其运动和智力均有改善,但身高仍明显落后.经检索文献发现,国内外报道的Costello综合征患者的临床特征与上述2例患儿相似,以特殊面容、喂养困难、身材矮小和智力低下为主要临床表现,部分患儿尚有心血管、骨骼肌或中枢神经系统异常等表现,且伴发肿瘤易感性.结论 Costello综合征发病率极低,累及多系统病变.特殊体征及HRAS基因测序有助于疾病的诊断.
关键词： Costello综合征 HRAS基因 身材矮小 喂养困难
