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缺血性脑卒中对犬肠屏障功能的影响
目的 研究缺血性脑卒中对犬肠黏膜屏障功能的影响以及细胞凋亡和紧密连接蛋白在其中的可能机制.方法 杂犬20只,按随机数字表法分为梗死组和假手术组,每组10只.梗死组采用双硅柱置入法制作缺血性脑卒中模型,假手术组动物不置入栓子,其他同梗死组.光镜下观察肠黏膜形态;免疫组织化学法分析肠黏膜紧密连接蛋白闭锁蛋白和闭锁小带蛋白1的表达;采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术检测肠上皮细胞凋亡.结果 梗死组动物均形成脑梗死.和假手术组相比,梗死组紧密连接蛋白闭锁蛋白和闭锁小带蛋白1表达均明显降低(闭锁蛋白平均光密度值:0.20±0.01比0.22±0.01,P=0.007;闭锁小带蛋白1平均光密度值:0.20±0.01比0.22±0.02,P=0.008);梗死组凋亡指数明显增高(29.04 ±3.79比6.44±1.24,P=0.002);闭锁蛋白与闭锁小带蛋白1呈正相关(R=0.71,P=0.02);凋亡指数与闭锁蛋白和闭锁小带蛋白1均呈负相关(R=-0.91,P=0.00;R=-0.77,P=0.01).光镜下梗死组存在小肠病理损伤,假手术组小肠结构正常.结论 缺血性脑卒中时,肠道屏障功能发生损害.紧密连接蛋白闭锁蛋白和闭锁小带蛋白1表达降低,从而导致紧密连接破坏.肠黏膜细胞凋亡上调是肠屏障障碍的细胞学基础,凋亡是缺血性脑卒中时肠上皮细胞死亡的重要形式.
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乌司他丁注射液治疗急性重症肺炎的临床研究
目的 观察乌司他丁注射液对急性重症肺炎患者的临床疗效.方法 52例急性重症肺炎患者随机分为对照组26例和试验组26例.对照组给予常规对症治疗,试验组在对照组的基础上给予乌司他丁20万单位,溶于5％葡萄糖溶液50 mL,每日2次微泵静脉注射,2组均治疗1周.比较2组患者的临床疗效及血清闭锁小蛋白1(ZO-1)、封闭蛋白(occludin)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 治疗后,试验组总有效率为88.46％(23/26例),对照组为69.23％(18/23例),2组差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,试验组血清ZO-1水平为(106.34±12.14)ng·L-1,对照组为(89.86±10.76)ng·L-1 (P＜0.05).试验组血清封闭蛋白水平为(129.65±16.42) mg·L-1,对照组为(117.48±13.23)mg·L-1 (P ＜0.05).试验组IL-18水平为(35.76±5.07)ng·L-1,对照组为(41.35±5.48)ng·L-1(P＜0.05).试验组血清TNF-α为(32.65 ±4.25) μg·L-1,对照组为(48.73±6.84)μg· L-1 (P ＜0.05).试验组出现头痛1例,轻微胃肠道反应1例,皮疹1例,药物不良反应发生率为11.54％(3/26例);对照组出现头痛1例,轻微胃肠道反应1例,药物不良反应发生率为7.69％(2/26例),差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乌司他丁对急性重症肺炎有较好的临床疗效,安全性较高.
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连结蛋白36和闭锁小带蛋白1的PDZ结构域关系
目的:探讨连结蛋白36(Cx36)和闭锁小带蛋白1(ZO-1)相互作用的PDZ结构域.方法:构建pGEX-3XGST-PDZ重组载体在DH5α细菌表达,加IPTG产生融合蛋白,经纯化,免疫印迹分析Cx36与ZO-1相互作用的PDZ结构域,PVDF膜洗脱后抗GST和考马斯亮蓝染色.结果:构建了pGEX-3X GST-PDZ重组载体,与转染Cx36的HeLa细胞孵育,免疫印迹显示Cx36与ZO-1的PDZ1结构域结合.而对照组Cx43与ZO-1的PDZ2结构域结合.实验组在相对分子质量为40 000～42 000有蛋白带,提示GST-PDZ融合蛋白表达.与鼠视网膜组织孵育免疫印迹显示Cx36与ZO-1的PDZ1结构域结合,而对照组Cx43与ZO-1的PDZ2结构域结合,相同膜洗脱后抗GST抗体和考马斯亮蓝染色显示GST-PDZ融合蛋白表达.结论:Cx36与ZO-1的PDZ1结构域结合.
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缝隙连接蛋白43在脑缺血再灌注中的作用及其机制
在中枢神经系统中,神经元与胶质细胞之间存在缝隙连接.其中,缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)是中枢神经系统中含量丰富的缝隙连接蛋白之一,参与细胞间物质交换的代谢偶联以及电信号传递的电偶联,对细胞新陈代谢、内环境稳态、细胞分化等生理过程具有重要调控作用.脑缺血后,缝隙连接失偶联及半通道活性异常引起细胞内外环境的稳态失衡,终导致脑组织损伤.因此,维持Cx43的正常功能对于保护脑组织免受脑缺血再灌注诱导的神经元损伤至关重要.
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外源性硫化氢通过抑制闭合蛋白和闭锁小带蛋白1表达减轻脑缺血再灌注大鼠脑水肿和脑损伤
目的探讨外源性硫化氢对脑缺血再灌注后脑水肿和脑损伤的影响及其机制。方法60只雄性 SD 大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、硫化氢30 ppm组（1 ppm ＝1 mg/L）和硫化氢60 ppm组，每组15只。采用大脑中动脉闭塞法建立大鼠局部脑缺血2 h再灌注24 h模型。在脑缺血再灌注24 h后观察神经功能学评分，测定脑梗死体积、脑水肿程度以及血脑屏障通透性变化。采用蛋白质印迹法检测缺血半暗带闭合蛋白和闭锁小带蛋白1（zonula occludens protein 1, ZO－1）表达。结果与缺血再灌注组比较，吸入硫化氢30 ppm 和60 ppm 能以剂量依赖方式显著增高神经功能评分（P 均＜0.05），缩小脑梗死体积（P 均＜0.05），减轻脑水肿（P 均＜0.05）。缺血再灌注组缺血侧脑组织伊文思蓝含量较假手术组显著增高[（0.74±0.14）μg/100 mg 对（0.19±0.06）μg/100 mg；P <0.05]，硫化氢30 ppm组[（0.55±0.10）μg/100 mg]和硫化氢60 ppm组[（0.35±0.08）μg/100 mg]脑组织伊文思蓝含量均较缺血再灌注组显著降低（P 均<0.05），其中硫化氢60 ppm组显著低于硫化氢30 ppm组（P <0.05）。蛋白质印迹分析显示，硫化氢30 ppm 和60 ppm 组半暗带闭合蛋白（0.621％±0.101％对0.787％±0.087％对0.453％±0.127％； P ＜0.05）和 ZO－1（0.602％±0.118％对0.778％±0.805％对0.426％±0.146％；P ＜0.05）的表达水平均较缺血再灌注组显著增加，其中硫化氢60 ppm组闭合蛋白和ZO－1的表达水平均显著高于硫化氢30 ppm组（P 均＜0.05）。结论吸入外源性硫化氢能以剂量依赖方式显著降低脑缺血再灌注后脑水肿，缩小脑梗死体积并改善神经功能，其机制可能与抑制闭合蛋白和 ZO－1表达、下调维持血脑屏障完整性有关。
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不同胆汁引流方式对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜屏障功能的影响及机制
目的:探讨不同胆汁引流方式对梗阻性黄疸(OJ)大鼠肠黏膜功能的影响及其机制.方法:将60只SD大鼠采用胆总管结扎法制作OJ模型,1周后随机均分为无引流组(不行胆汁引流术),内引流组(行胆汁内引流术)和外引流组(行胆汁外引流术),引流时间1周.以20只假手术大鼠为对照组,实验共2周,结束时分别用ELISA法和Western blot法检测各组血清内毒素水平和小肠黏膜组织闭锁蛋白(occludin)及闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达,并观察小肠黏膜组织形态学改变.结果:大鼠造模后出现明显的OJ表现,二次手术后,内引流组大鼠一般情况明显好于无引流组和外引流组.无引流组和外引流组OJ大鼠血清内毒素水平明显升高,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01),而无引流组与外引流组间内毒素水平差异无统计学意义(P＞0.05)；内引流组OJ大鼠血清内毒素水平较无引流组和外引流组明显下降(均P＜0.01),与对照组水平无统计学差异(P＞0.05).与对照组比较,无引流组和外引流组OJ大鼠小肠黏膜组织occludin及ZO-1蛋白表达均明显降低(均P＜0.01),且外引流组两者表达水平降低较无引流组更为明显(均P＜0.01)；内引流组OJ大鼠的occludin及ZO-1的表达水平明显高于无引流组和外引流组(均P＜0.01),且基本接近对照组(均P＞0.05).病理学观察显示,无引流组和外引流组OJ大鼠肠黏膜结构破坏,大量或中量炎性细胞浸润,而内引流组OJ大鼠组肠黏膜结构完整,仅见少量炎性细胞浸润.结论:胆汁内引流对OJ大鼠肠黏膜屏障具有保护作用,其机制可能与胆汁维持肠黏膜上皮细胞间紧密连接相关蛋白的表达有关.
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紧密连接蛋白Occludin与 ZO-1在COPD大鼠肺部的表达
目的 探索慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)肺泡上皮结构改变的潜在机制.方法 建立大鼠COPD模型,于建模第28天,42 d分批处死大鼠,采用免疫组化观察大鼠肺泡上皮紧密连接中闭锁蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)的分布和表达.结果 COPD时,42 d实验组肺泡上皮细胞Occludin 和Zo-1表达明显下降(P＜0.05);28 d实验组肺泡上皮细胞Occludin 和Zo-1 表达有所降低,但差异无统计学意义(P＞0.05);42 d实验组和28 d实验组相比肺泡上皮细胞Occludin表达明显降低,P＜0.05,ZO-1表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 COPD时,紧密连接蛋白表达减少,并随时间的延长,Occludin表达进一步降低,由此证明,Occludin 和Zo-1 表达与肺泡上皮屏障的破坏密切相关.
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氢硫酸钠抑制脂多糖引起的A549细胞损伤
目的 观察氢硫酸钠(NaHS)对脂多糖(LPS)诱导的A549肺癌细胞损伤的影响并探讨其可能机制.方法 A549细胞分为对照组、LPS处理组、NaHS处理组和LPS联合NaHS处理组.处理24h后,采用ELISA测定培养液中C反应蛋白(CRP)的含量;MTT法与乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞损伤情况;测定A549细胞单层模型的跨上皮电阻(TER)值;免疫荧光染色法测定A549细胞中闭锁小带蛋白1(ZO-1)的分布情况.结果 对照组与NaHS处理组比较,CRP的水平、TER值、细胞活力和ZO-1表达与分布情况无显著性差异;与对照组相比,LPS处理组中的CRP水平明显升高、TER值显著减少、细胞活力下降、细胞膜ZO-1表达减少且边界不清;与LPS处理组相比,LPS联合NaHS处理组中的CRP水平明显降低、TER值增加、细胞活力增加,ZO-1在细胞膜处的表达增强且分布情况部分恢复.结论 NaHS通过增强A549细胞活力、降低CRP水平、增加TER值并增加ZO-1表达抑制LPS诱导的肺损伤.
关键词： 急性肺损伤 脂多糖 氢硫酸钠(NaHS) 肺上皮细胞 闭锁小带蛋白1
