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异氟醚对新生大鼠脑胶质纤维酸性蛋白和兴奋性氨基酸转运体2表达的影响
目的 研究长时间亚麻醉浓度异氟醚暴露对新生大鼠脑星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和兴奋性氨基酸转运体2(excitatory amino acid transporter2,EAAT2)表达的影响.方法 出生后7d的Wistar大鼠40只,采用随机数字表法随机分为两组(n=20),异氟醚组(Iso)和对照组(Con),分别暴露于1.1％异氟醚(0.5 MAC)和30％氧气与氮气混合气体中维持6h.在处理后12、24h、3和7d时,两组均分别取乳鼠新鲜脑组织(n=5),冰冻组织切片后,用GFAP抗体和EAAT2抗体进行免疫荧光双标染色,测得额叶皮质区和海马区的星形胶质细胞GFAP、GFAP和EAAT2共染区的荧光强度.结果 相比Con组额叶皮质区,Iso组GFAP的荧光强度在处理后12、24h显著降低(P＜0.01),而处理后3、7d两组差异无统计学意义;海马区比较,Iso组GFAP的荧光强度在处理后12、24h、3d相比Con组显著下降(P＜0.01),处理后7d差异无统计学意义.Iso组额叶皮质区和海马区GFAP和EAAT2共染区域的荧光强度在处理后12、24h、3和7d均显著降低,与Con组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 1.1％异氟醚暴露会暂时性减少新生大鼠额叶皮质区和海马区GFAP表达,延迟星形胶质细胞的骨架发育;而对星形胶质细胞EAAT2表达抑制是持续性的,这可能是异氟醚对新生大鼠产生脑毒性的机制之一.
关键词： 异氟醚 星形胶质细胞 胶质纤维酸性蛋白 兴奋性氨基酸转运体2 -
体外培养星形胶质细胞缺氧/复氧后EAAT2、谷氨酰胺合成酶的表达
目的 对体外培养的星形胶质细胞(AC)进行缺氧/复氧及亚低温干预,观察兴奋性氨基酸转运体2(EAAT2)、谷氨酰胺合成酶(GS)的表达及亚低温干预对其的影响.方法 选用新生大鼠的大脑皮层组织培养的AC,分为对照组(C)、缺氧/复氧组(H/R)、亚低温组(H/M+R),缺氧12h后H/R组及H/M+R组分别于37℃及32℃复氧.每组设复氧2h、4h、8h、12h、24h、48h等时间点.MTT测定细胞活力,Western-blot半定量分析EAAT2、GS的表达情况.结果 ①MTT法检测细胞活力:H/R组与H/M+R组的细胞活力均比C组的细胞活力低,而H/M+R组的细胞活力较H/R组高,差异有统计学意义(P<0.05).②Western-blot检测结果:H/R组与H/M+R组的EAAT2表达与C组相比较,均先减少,后随着复氧时间延长逐渐增多,差异有统计学意义(P<0.05),H/M+R组的EAAT2表达与H/R组相比较,表达量下降趋势小,差异有统计学意义(P<0.05);H/R组与H/M+R组的GS表达量随着复氧时间延长,均呈现增高趋势,与C组比较增高显著,差异有统计学意义(P<0.05),H/M+R组的GS表达量与H/R组比较增高趋势更加明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论 缺氧/复氧及亚低温干预可引起星形胶质细胞EAAT2、GS表达的改变;32℃~35℃亚低温干预可以抑制缺氧/复氧损伤后兴奋性氨基酸的释放,这可能是脑保护作用的重要机制之一.
关键词： 缺氧/复氧 星形胶质细胞 谷氨酰氨合成酶 亚低温 兴奋性氨基酸转运体2 -
兴奋性氨基酸转运体2在神经退行性变中的作用
谷氨酸是脑内必需的兴奋性神经递质之一,兴奋性氨基酸转运体(Excitatory amino acid transporter EAAT)2是主要的谷氨酸转运体,负责脑内90%以上的谷氨酸再摄取,调节突触间隙的谷氨酸浓度.EAAT2功能紊乱导致胞外谷氨酸过量积聚,在多种神经退行性疾病的发病过程中起重要作用,如阿尔茨海默病、亨廷顿舞蹈病、肌萎缩侧索硬化等.对于人EAAT2启动子的研究发现,NF-kB在星形胶质细胞中对EAAT2表达起关键作用.通过筛选1 040种FDA批准的化合物,发现多种β-内酰胺类抗生素如头孢曲松钠等是EAAT2的转录激活剂,可以增加EAAT2的蛋白表达水平,产生神经保护作用.
关键词： 谷氨酸 兴奋性氨基酸转运体2 神经退行性变 NF-kB 头孢曲松钠 -
兴奋性氨基酸转运体2与缺血性脑损伤
背景 缺血性脑损伤的机制与防治一直为人们所关注,但迄今仍无突破性进展. 目的 选取兴奋性氨基酸转运体2 (excitatory amino acid transporter 2,EAAT2)为切入点,以期为缺血性脑损伤的研究提供一新思路. 内容 综述EAAT2转运谷氨酸的机制、EAAT2在缺血性脑损伤形成中的地位以及EAAT2调节剂减轻缺血性脑损伤的实验研究进展.趋向 谷氨酸转运体EAAT2可能成为治疗缺血性脑损伤的有效靶点.
关键词： 兴奋性氨基酸转运体2 谷氨酸 缺血性脑损伤 -
缝隙连接蛋白43在脑缺血再灌注中的作用及其机制
在中枢神经系统中,神经元与胶质细胞之间存在缝隙连接.其中,缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)是中枢神经系统中含量丰富的缝隙连接蛋白之一,参与细胞间物质交换的代谢偶联以及电信号传递的电偶联,对细胞新陈代谢、内环境稳态、细胞分化等生理过程具有重要调控作用.脑缺血后,缝隙连接失偶联及半通道活性异常引起细胞内外环境的稳态失衡,终导致脑组织损伤.因此,维持Cx43的正常功能对于保护脑组织免受脑缺血再灌注诱导的神经元损伤至关重要.
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脑摄取平衡时丙泊酚对犬脑不同区域兴奋性氨基酸转运体2 mRNA的影响
目的:探讨丙泊酚对犬脑不同区域兴奋性氨基酸转运体2 (EAAT2) mRNA表达的影响.方法:18只健康杂种犬,雌雄不限,12～ 18个月,体重10 ～ 12 kg,随机分为对照组(C组)、低剂量组(L组)和高剂量组(H组),每组6只.L组15 s内静脉注入丙泊酚5.5 mg/kg诱导,55 mg/(kg·h)恒速静注维持；H组15s内注入丙泊酚7.0 mg/kg诱导,70 mg/(kg·h)恒速静注维持.静注50 min时取颈内动、静脉血各2 mL后静注10％ KCI注射液2 mg/kg处死L组和H组动物.采用高效液相色谱-紫外法(HPLC-UV)检测动、静脉血浆丙泊酚浓度.C组不给予任何干预措施,快速静注10％ KCl 2 mg/kg处死.3组均于无菌条件下解剖获取下丘脑、底丘脑、背侧丘脑、海马、脑桥、顶叶以及额叶组织,qRT-PCR方法检测脑组织EAAT2 mRNA的表达水平.结果:丙泊酚静注50 min时,L组和H组丙泊酚血浆浓度(动脉-动脉,静脉-静脉比较)差异显著(P＜0.01),而两组颈内动脉和静脉丙泊酚血浆浓度比较差异均无统计学意义(P＞0.05).下丘脑、海马和顶叶EAAT2 mRNA的相对表达量,在L组和H组均较C组明显升高,差异显著(P＜0.05)；L组和H组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).背侧丘脑等其他脑区EAAT2 mRNA的相对表达量3组之间差异无显著性(P＞0.05).结论:丙泊酚恒速静注50 min,犬脑摄取达到平衡状态；此时丙泊酚可显著上调下丘脑、海马和顶叶EAAT2 mRNA的表达,但不同剂量对其表达的影响差异无显著性.
关键词： 二异丙酚 兴奋性氨基酸转运体2 脑 静脉麻醉 -
EAAT2过表达对匹鲁卡品诱导小鼠癫痫持续状态模型的保护作用
目的 研究兴奋性氨基酸转运体2(EAAT2)过表达对癫痫发作及SE诱导的海马神经元死亡的作用.方法 实验采用野生型或者EAAT2转基因FVB/N小鼠,腹腔注射匹鲁卡品诱导癫痫持续状态(SE).SE后3 d,取脑、固定、切片,进行EAAT2、生长抑素的免疫组化染色以及甲酚紫染色,分别对海马CA1和齿状回门区阳性神经元进行计数.结果 与野生型动物相比,EAAT2在转基因小鼠海马中表达显著增加.野生型小鼠达到SE或者死亡所需的总匹鲁卡品剂量为344±40.3mg/kg,,而EAAT2转基因小鼠达到同等效应所需剂量为657±119.9 mg/kg,显著高于野生型所用剂量(P＜0.05).SE后3 d,野生型小鼠海马CA1区锥体细胞层神经元相对数量为0.56,而转基因动物中为0.9,显著高于野生型动物(P＜0.05).同时,野生型和转基因小鼠癫痫后齿状回门区中间神经元相对数量分别为0.11和0.67,转基因组数量显著高于野生型组(P＜0.05).野生型小鼠癫痫后齿状回门区生长抑素阳性神经元数量为0,但是,在EAAT2转基因小鼠,数量为0.4,显著高于野生型(P＜0.05).结论 EAAT2过表达对SE产生及其诱导的神经元死亡具有显著保护作用.过表达的EAAT2可能通过加强细胞外谷氨酸转运而调控其兴奋毒性.
