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宫颈癌NOB1的表达及其与HPV感染及预后的关系分析
目的 探讨宫颈癌NOB1的表达水平,及其与高危型人乳头瘤病毒(hr HPV)感染及预后的相关性.方法 检测110例宫颈病变患者NOB1和hr HPV 感染情况及hr HPV DNA的负荷量,分析NOB1表达与hr-HPV DNA的负荷量及疾病进展时间(TTP)的相关性.结果 宫颈癌hr HPV阳性率为82.9％,显著高于慢性宫颈炎(23.9％)和宫颈上皮内瘤变(CIN) (51.7％)(P＜0.05).随着病变程度的增加,hr HPV DNA负荷量依次增加(P＜0.05).宫颈癌、CIN、慢性宫颈炎组织中NOB1蛋白的阳性表达率依次降低,分别为71.4％、31.0％、6.7％(P＜0.05).宫颈癌NOB1的表达与hr HPV DNA负荷量呈显著正相关(P＜0.05).宫颈癌患者NOB1阳性者的中位TTP显著低于阴性表达者(P＜0.05).结论 宫颈癌患者呈NOB1过度表达状态,且与HPV感染,尤其是hr HPV感染及预后密切相关.
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NOB1影响胶质瘤细胞增殖、凋亡的实验研究
目的利用RNA干扰（ RNAi）在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中沉默NOB1基因的表达，探讨NOB1对恶性胶质瘤细胞增殖以及凋亡的影响。方法构建NOB1基因的短发卡（ shRNA ）慢病毒表达载体，包装成病毒颗粒并感染人胶质瘤U251和U87-MG细胞，采用实时定量聚合酶链反应检测NOB1在恶性胶质瘤细胞系中的表达。采用甲基噻唑基四唑（ MTT）比色法和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力情况；同时利用PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况，观察NOB1基因对U251和U87-MG细胞增殖、凋亡的影响。结果 NOB1基因在人胶质瘤U251、U87-MG细胞系中均明显高表达。 NOB1-shRNA慢病毒能有效感染胶质瘤细胞，实验结果显示感染后U251和U87-MG细胞的增殖能力明显下降；U251克隆形成能力明显受到抑制；细胞周期在 G0/G1停滞，而且细胞出现显著性凋亡；上述差异均具有统计学意义（ P ＜0.05）。结论 NOB1在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中高表达；降低NOB1基因的表达，可以显著降低胶质瘤细胞的增殖，并促进胶质瘤细胞凋亡；NOB1基因在体外对胶质瘤细胞的发生发展可能具有癌基因的调节作用。
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人NOB1基因shRNA慢病毒载体构建与RNAi效率的鉴定
目的:构建人NOB1基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体并在卵巢癌SKOV3和HEY细胞上鉴定其沉默效率.方法:针对NOB1基因设计特异性siRNA靶点,构建于慢病毒pLVTHM载体,筛选获得的有效shRNA慢病毒载体在293T细胞包装成病毒颗粒,随后将其感染卵巢癌SKOV3和HEY细胞,采用ReaI-time PCR方法检测靶基因在mRNA水平的沉默效率.结果:构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,包装病毒后滴度达到8×10~8 PU·L~(-1).shRNA慢病毒颗粒感染SKOV3和HEY细胞后NOB1基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组分别下降了73.5%和82.2%.结论:成功构建NOB1基因的shRNA慢病毒表达载体,该慢病毒表达载体能够在细胞水平有效沉默靶基因.
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NOB1基因在胰腺癌的表达及其临床意义
目的:探讨NOB1(nin one binding)在胰腺癌组织中的表达情况及与胰腺癌临床病理特征的关系.方法:①SYBR Green实时定量PCR和Western印迹法检测20例胰腺癌及癌旁对照、14例正常胰腺冰冻组织中NOB1基因mRNA及其编码蛋白的表达情况.②免疫组化回顾性检测50例胰腺癌石蜡切片中NOB1蛋白表达情况,并分析其与病人年龄、性别、肿瘤部位、病理分期、淋巴结转移等临床病理特征的相关性.结果:①20例胰腺癌中NOB1基因mRNA表达明显高于癌旁组织,P＜0.05;16例(80％)胰腺癌组织中NOB1蛋白明显高于癌旁组织;而14例正常组织中NOB1蛋白阳性率仅14.3％.②免疫组化有34例呈(+++),8例呈(++),4例呈(+),4例呈(-),阳性表达率为84％,且NOB1在多数胰腺癌早期阶段即有强阳性表达.NOB1与肿瘤大小呈正相关(P＜0.05).NOB1与年龄、性别及淋巴结浸润无相关性(P＞O.05).结论:NOB1在胰腺癌组织中高表达,且在较早期胰腺癌中即有强阳性表达,提示可能与胰腺癌发生有密切关系.
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靶向沉默NOB1基因对乳腺癌细胞MCF-7生长和周期分布的影响
背景与目的:NOB1(NIN1/RPN12 binding protein 1 homolog)是2005年新克隆的一个基因,属于RNA结合蛋白,该类蛋白的功能与恶性肿瘤的发生密切相关.本研究旨在观察利用慢病毒介导的RNAi沉默NOB1基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响.方法:包装表达NOB1短发夹RNA(shRNA)的慢病毒,感染MCF-7细胞,实时定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)验证NOB1的抑制效率;MTT和克隆形成实验检测NOB1对细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期的变化.结果:NOB1-shRNA慢病毒感染3 d后,可显著下调MCF-7细胞NOB1 mRNA和蛋白的表达水平,显著抑制细胞增殖和体外成瘤能力,并导致细胞周期分布紊乱,G0/G1期及G2/M期细胞增加,S期细胞减少.结论:NOB1基因通过调节细胞周期分布促进乳腺癌细胞恶性增殖,可能是乳腺癌基因治疗的分子靶点.
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NOB1与UBC在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究
目的:通过对人原NOB1及泛素C(ubiquitin C,UBC)在人肺癌细胞及肺癌组织中表达情况的研究,探讨NOB1与UBC分子与肺癌发生的关系,并探讨这两个分子之间的相互关系.方法:采用实时逆转录酶-聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测NOB1 mRNA的表达情况;利用免疫组织化学法检测NOB1表达情况;使用免疫印迹技术(Western Blot)检测NOB1及UBC蛋白的表达情况;并在肺癌细胞株中过表达和干扰UBC后,检测NOB1蛋白的表达情况.结果:各组肺癌细胞中NOB1 mRNA及UBC蛋白的表达水平均高于正常肺组织细胞BEAS-2B(F=9.874,P＜O.05);NOB1及UBC在肺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(F=1 1.234,P＜0.05)和正常组织(F=9.116,P＜0.05);过表达UBC使NOB1表达增加,干扰NOB1使NOB1表达降低.结论:NOB1及UBC1与肺癌发生相关,UBC可能促进NOB1表达,引起肺癌增殖.
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siRNA沉默NOB1的表达对胃癌细胞凋亡及顺铂化疗敏感性的影响
[目的]探讨siRNA沉默酵母基因Noblp人类同源基因(NOB1)对胃癌细胞凋亡及顺铂化疗敏感性的影响.[方法]胃癌细胞MGC-803转染NOB1 siRNA和siRNA control为干扰组、对照组,同时以顺铂处理的两组细胞为顺铂+干扰组、顺铂组,qRT-PCR和Western blot法检测NOB1表达,噻唑蓝法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化STAT3 (p-STAT3),比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性.[结果]干扰组、顺铂组、顺铂+干扰组细胞中NOBl mRNA和蛋白水平下降,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中Caspase-3活性升高,p-STAT3/STAT3水平降低,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).顺铂+干扰组细胞凋亡率和Caspase-3活性明显高于干扰组、顺铂组,细胞存活率和p-STAT3/STAT3水平明显低于干扰组、顺铂组,差异均具有统计学意义(P＜0.05).[结论] siRNA沉默NOB1基因促进胃癌细胞凋亡,增加顺铂敏感性,作用机制与p-STAT3/STAT3有关.
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NOB1在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义
[目的]探讨NOB1在宫颈鳞癌组织中的表达及其与临床病理因素和预后的关系.[方法]采用免疫组织化学SP法检测157例宫颈鳞癌、54例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)及42例宫颈正常组织中NOB1的表达.[结果]宫颈正常组织、CIN组织和宫颈鳞癌组织NOB1的表达阳性率分别为5.0％、29.6％和73.8％,差异有统计学意义(P＜0.001).NOB1在宫颈癌中的表达与肿瘤分化程度及是否淋巴结转移有关(P＜0.05);而与患者年龄、肿瘤直径、临床病理分期及浸润深度无明显相关(P＞0.05).NOB1阳性表达患者的5年累积生存率较阴性表达者低(P＜0.01).[结论] NOB1的表达与宫颈鳞癌的临床病理因素及预后有一定关系,其高表达可能在宫颈癌发生、发展中起重要作用,并很可能成为潜在的治疗靶点及预测宫颈癌预后的有价值的分子标志物.
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NOB1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞生长、凋亡的影响
目的 研究NOB1反义寡核苷酸(NOB1-ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3生长、凋亡的影响,观察NOB1-ASODN对NOB1基因表达的作用.方法 设计合成针对NOB1 mRNA的特定的ASODN和作为对照的无义寡核苷酸链(NSODN),应用转染载体X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent将ASODN及NSODN转染至人卵巢癌SKOV3细胞.采用RT-PCR法检测转染后各组细胞NOB1 mRNA的表达;应用MTT法检测不同作用时间段SKOV3细胞的生长情况;流式细胞学检测细胞的凋亡情况.结果 NOB1-ASODN能下调SKOV3细胞NOB1基因的表达,沉默效率达59.58％;其能抑制细胞的生长,具有时间依赖性,转染后24、48、72 h细胞抑制率分别为(37.02±0.710)％、(56.16 ±0.986)％、(58.10±0.010)％;沉默目的基因后细胞的凋亡率增加.结论 运用NOB1-ASODN特异、有效地抑制NOB1表达,能抑制SKOV3细胞的增殖,可促进SKOV3细胞的凋亡,从而达到抑制肿瘤生长的目的.
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NOB1在胃癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨胃癌组织中NOB1的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测70例胃癌组织和对应的经病理检查无明显异常的胃切缘组织(作为对照组)中NOB1的表达情况,并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系.结果 70例胃癌组织中NOB1的阳性表达率为65.7%(46/70)高于切缘胃黏膜中NOB1的阳性表达率(47.1%,33/70)(P＜0.05).不同分化程度和临床分期的胃癌组织中NOB1蛋白阳性率存在显著性差异(P＜0.05),有淋巴结转移和远处转移者分别高于无淋巴结转移和远处转移者(P＜0.05).结论 胃癌组织中NOB1蛋白表达上调,并与胃癌的分化程度、临床分期、淋巴结转移和远处转移有关.
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NOB1在宫颈癌及癌前病变中的表达及其与高危型HPV感染的关系
目的 探讨NOB1在宫颈癌及癌前病变中的表达及其与高危型HPV(HR-HPV)感染的关系.方法 2014年8月至2017年10月我院收治的114例宫颈病变患者的组织标本纳入研究,其中53例为宫颈癌、42例为宫颈上皮内瘤变、19例为慢性宫颈炎,对标本中NOB1的表达和HR-HPV的感染情况进行了回顾分析.结果 宫颈癌组织HR-HPV阳性率(83.0％)显著高于宫颈上皮内瘤变(46.5％)和慢性宫颈炎(26.3％),3组之间差异具有统计学意义(P<0.05);随着宫颈癌病变的不断恶化,HR-HPV DNA的负荷量逐渐增加(Z=13.35);宫颈癌NOB1蛋白质阳性表达率(73.6％)显著高于宫颈上皮内瘤变(35.7％)和慢性宫颈炎(10.5％),3组之间差异具有统计学意义(P<0.05);HR-HPV感染阳性率与宫颈癌各临床病理参数均无明显相关(P>0.05),有淋巴结转移组NOB1蛋白质表达阳性率低于无淋巴结转移组(P<0.05),NOB1表达与淋巴结转移负相关,与分化程度正相关;宫颈癌NOB1表达与HR-HPV DNA负荷量具有显著的正相关特征(r=0.457,P<0.05).结论 宫颈癌组织中NOB1的过度表达与HR-HPV感染相关,两者共同参与了宫颈癌的发生发展过程.
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eEF1A1通过正向调控NOB1的表达促进肝癌细胞的侵袭和转移
目的 探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)对肝癌侵袭转移的影响机制.方法 采用荧光定量PCR和Western blot法检测多种肝癌细胞系和正常肝脏细胞中eEF1A1和NI1/RPN12结合蛋白1同源物(NOB1)的mRNA和蛋白表达.肝癌细胞中干扰和过表达eEF1A1后,通过Transwell侵袭实验和RTCA实验观察肝癌细胞侵袭迁移能力的变化,并观察肝癌细胞中NOB1 mRNA及蛋白表达变化.在稳定干扰eEF1A1表达的HCCLM3细胞中过表达NOB1,或在过表达eEF1A1的MHCC97h细胞中干扰NOB1的表达,分析eEF1A1和NOB1蛋白表达水平和细胞侵袭迁移能力.结果 肝癌细胞中eEF1A1和NOB1表达明显高于正常肝细胞,并呈正相关.肝癌细胞中干扰eEF1A1表达可明显降低肝癌细胞的侵袭迁移能力,同时NOB1的mRNA和蛋白表达也显著被降低(P均<0.01);过表达eEF1A1后明显增加肝癌细胞的侵袭迁移能力,同时也增加NOB1的mRNA和蛋白表达(P均<0.01).在稳定干扰eEF1A1表达的HCCLM3细胞中过表达NOB1导致NOB1表达和肝癌细胞侵袭迁移能力的恢复(P均<0.01);然而在稳定过表达eEF1A1的肝癌细胞系中降低NOB1导致NOB1表达的下调和肝癌细胞侵袭迁移能力的抑制(P均<0.01).结论 肝癌细胞中eEF1A1正向调控NOB1表达,进而影响肝癌细胞的侵袭和迁移.
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胃癌中 NOB1基因的表达及意义
目的：探讨NOB1基因在胃癌组织中的表达及临床意义。方法分别利用实时定量PCR法和免疫组织化学SP法检测30例胃癌组织及相应的癌旁正常组织中NOB1基因mRNA和蛋白的表达情况，并分析其与胃癌临床病理特征的关系。结果实时定量PCR法检测胃癌中NOB1基因mRNA表达量与癌旁正常组织相比，差异有统计学意义（ P＜0.01）。免疫组化中NOB1蛋白在胃癌组织中阳性表达率为73％，与癌旁正常组织43％的阳性表达率相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。 NOB1蛋白表达与肿瘤大小有关联（P＜0.05），与年龄、性别、分化程度、淋巴结转移、远处转移、pTNM分期无关联。结论 NOB1在胃癌中表达升高，可能在胃癌的发生发展过程中起重要作用。
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宫颈癌及癌前病变NOB1的表达及与高危型HPV感染的相关性
目的:探讨NOB1在宫颈癌及癌前病变中表达及其与高危型HPV感染的关系.方法:应用免疫组化En Vision法检测90例宫颈癌、76例宫颈上皮内瘤变(CIN)及30例慢性宫颈炎组织中NOB1表达水平,同时于术前采用第二代基因杂交捕获法(HC-Ⅱ)检测患者高危型HPV(HR-HPV)感染情况.结果:NOB1在慢性宫颈炎、宫颈CIN和宫颈癌中阳性表达率均逐渐升高,差异有显著性(P < 0.05);NOB1与宫颈癌的组织学分级及淋巴结是否转移有关(P < 0.05);HR-HPV在宫颈癌中感染阳性率均高于宫颈CIN和慢性宫颈炎(P < 0.05);NOB1过表达与HR-HPV感染呈正相关(P < 0.05).结论:宫颈癌中NOB1表达上调可能和HR-HPV感染有关,在宫颈癌的发生发展过程中起协调作用.
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NOB1调控Wnt/β-catenin信号通路影响膀胱癌细胞凋亡的实验研究
目的 探讨酵母基因Noblp人类同源基因(NOB1)对膀胱癌细胞凋亡的影响及机制.方法 膀胱癌BIU-87细胞转染NOB1小干扰RNA(NOB1 siRNA)及对照siRNA,同时以不做转染的BIU-87细胞作为对照,qRT PCR和Western blot检测细胞中NOB1水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Wnt/β-catenin关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)水平和凋亡相关蛋白活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平.用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理转染NOB1 siRNA后的BIU-87细胞,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 转染NOB1 siRNA后的细胞中NOB1 mRNA水平和蛋白水平均明显下降,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3水平也升高,β-catenin、cyclin D1水平下降,与不做转染的细胞相比差异具有统计学意义(P＜0.05).转染对照siRNA的细胞中NOB1、Cleaved Caspase-3、β-catenin、cyclinD1水平没有明显变化,细胞凋亡率也没有明显变化,与不做转染的细胞相比差异没有统计学意义(P＞0.05).转染NOB1siRNA的细胞经Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理后凋亡率升高,Cleaved Caspase-3水平也升高.结论 下调NOB1通过抑制Wnt/β-catenin信号通路促进膀胱癌细胞凋亡.
关键词： 膀胱癌 凋亡 NOB1 Wnt/β-catenin Caspase-3 -
NOB1在食管鳞状细胞癌中的表达及意义
目的:研究NOB1蛋白在食管癌组织中的表达情况及其与食管癌临床病理特征的意义.方法:利用免疫组织化学SP法检测72例食管鳞状细胞癌组织中NOB1蛋白的表达情况,并分析其与病人年龄、性别、肿瘤分化程度等临床病理特征的相关性.结果:72例食管癌组织中,58例(81％)食管癌组织NOB1蛋白的表达高于癌旁组织,免疫组化结果有24例呈(+++),31例呈(++),3例呈(+),14例呈(-),阳性表达率为76％,且在高分化(56.3％)、中分化(80.0％)、低分化(83.9％)食管癌组织中的表达呈递进性增高.NOB1蛋白的表达与病人年龄、性别之间没有显著关联.结论:NOB1在食管鳞癌的发生中起重要作用.
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NOB1、Tpl-2在肾透明细胞癌中表达及对侵袭转移的影响
目的 探讨NOB1、Tpl-2在肾透明细胞癌中的表达及对侵袭转移的影响,为诊断和临床靶向药物治疗提供支持和策略.方法 应用免疫组织化学法分析82例肾透明细胞癌及其癌旁正常组织中NOB1、Tpl-2蛋白表达,分析NOB1、Tpl-2蛋白表达强度在不同临床分期及病理分级样本间的差异.结果 NOB1和Tpl-2在肾透明细胞癌组织中阳性表达显著高于癌旁正常肾组织,差异有统计学意义(P＜0.05).NOB1、Tpl-2在不同病理分级样本间表达差异无统计学意义(P＞0.05).NOB1在不同临床分期的肾透明细胞癌组织中表达的阳性等级差异无统计学意义(P＞0.05);Tpl-2在局限性肾癌、局部进展性肾癌及转移性肾癌间表达的阳性等级差异有统计学意义(P＜0.05),且随着肿瘤临床分期的升高,Tpl-2表达阳性等级呈逐渐上升趋势.NOB1、Tpl-2阳性表达与性别、年龄均无相关性(p＞0.05).结论 NOB1、Tpl-2可能与肾透明细胞癌的发生有关,Tpl-2可能对肾透明细胞癌的侵袭转移有一定的影响.
