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耻垢分枝杆菌与结核分枝杆菌抗原的交叉免疫应答研究
目的 探讨耻垢分枝杆菌(Mycobacteria smegmatis,MS)与结核分枝杆菌(Mycobacteria tuberculosis,MTB)抗原及其免疫原性的交叉情况.方法 以低温超声破碎方法提取MS和MTB菌体抗原,通过Western blot观察菌体抗原与抗血清的交叉免疫应答.将超声破碎的菌体抗原与不完全弗氏佐剂混匀后肌肉注射于小鼠,免疫后7 d以ELISPOT技术及流式细胞学技术检测小鼠脾脏淋巴细胞经不同细菌抗原分别刺激后产生的各类细胞因子水平,ELISA技术检测血清中抗体效价水平.结果 MS与MTB间存在一些交叉抗原,经两细菌致敏的小鼠均能对不同分枝杆菌抗原产生以细胞免疫为主的免疫应答,CD4+及CD8+T淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ水平均较未免疫组明显增高(P<0.05), 对非分枝杆菌属布氏杆菌的对照抗原几乎不产生细胞免疫应答.结论 MS与MTB间存在这些共同抗原使MS致敏动物能引起针对结核分枝杆菌特异性免疫应答,为MS用于结核新疫苗佐剂等研究提供科学依据.
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食物过敏的致敏途径及发生机制的研究进展
由IgE抗体引起的食物过敏反应性皮肤病较为常见.探讨食物过敏的致敏途径及发生机制对临床有着重要意义.食物致敏的途径除消化道之外,还有经鼻腔黏膜的途径,如花粉-食物过敏反应综合征(Pollen-food allergysyndrome)等.此外食物抗原也可以经皮肤致敏,如橡胶-水果综合征(Latex-fruit syndrome)等.当患者皮肤屏障功能损害时,食物抗原也可以经皮肤吸收,引发过敏反应.食物过敏原有Ⅰ类和Ⅱ类之分,要根据蛋白性质,致敏途径采取不同的防治对策.
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反复自然流产的免疫学因素
反复自然流产(recurrent or repetitive spontaneous abortion,RSA)是指连续发生3次或3次以上的自然流产,发生率为0.4%～1.0%,若按连续发生2次计算,则为5%.RSA原因有解剖、内分泌、感染、染色体、遗传等,其中40%～80%原因不明的RSA可能与免疫因素有关[1],是母体免疫排斥胎儿的结果[2].免疫因素中涉及到人类白细胞抗原(HLA)、滋养叶淋巴细胞交叉抗原(TXL)、血型抗原、抗精子抗体、抗磷脂抗体、多种自身免疫性抗体、细胞因子与生长因子等10多种有关因素.
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77、载体疫苗
疫苗分为利用无毒活微生物的活疫苗及杀灭微生物去除其特定毒性成分后的死疫苗.制备活疫苗采用的微生物是野生微生物的变异种,只有免疫原性而丧失致病性,并且与病原微生物具有交叉抗原而对人无致病性.因为活疫苗能在机体内增殖,所以能获得与自然感染相近的免疫力,一般持续时间长,易获得免疫力,多数既可诱导细胞免疫又可诱导体液免疫.死病毒疫苗可诱导抗体产生,但不易诱导细胞免疫,考虑到通常防御病毒时细胞免疫(以T细胞为中心的免疫)更为重要,所以活疫苗更为优越.但并不是所有病原微生物都适合做为活疫苗,并且预期接种的病原微生物非常之多,若针对每种微生物逐一开发疫苗将是很繁重的工作,受种者亦有很大的负担.
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抗幽门螺杆菌单克隆抗体与人血小板交叉识别的实验研究
目的:研究抗幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B(ureB)单克隆抗体与血小板膜糖蛋白(GP)的结合情况.方法:运用Western blot、流式细胞术(FCM)和免疫放射法(IRMA)分析血小板膜GP成分与幽门螺杆菌ureB成分的相关性.结果:抗幽门螺杆菌ureB单抗1F11与血小板成分GPⅢa、P-选择素有一定程度结合,但与GPⅠb、GPⅡb及GPⅥ无结合.结论:血小板成分GPⅢa、P-选择素与幽门螺杆菌ureB存在交叉识别的共同抗原表位,提示Hp感染与部分特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机理有关.
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日本血吸虫与斯氏狸殖吸虫交叉抗原的筛选和鉴定
目的 筛选和鉴定可与斯氏狸殖吸虫病患者血清产生交叉反应的日本血吸虫成虫抗原或其排泄分泌(ES)抗原组分,为筛选血吸虫病特异性诊断抗原奠定基础.方法 首先采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离日本血吸虫成虫蛋白和ES蛋白,然后采用Western blot鉴定其中能够与斯氏狸殖吸虫病人血清反应的蛋白条带,后取下对应的阳性条带进行质谱检测,对该蛋白进行分析和鉴定.结果 成功采用SDS-PAGE对日本血吸虫成虫蛋白和ES蛋白进行了分离.Western blot结果显示,在ES蛋白中出现了一阳性条带,分子量约为53 kDa;质谱检测结果显示该蛋白为未知蛋白.结论 日本血吸虫成虫ES成分中的53 kDa蛋白可能是日本血吸虫和斯氏狸殖吸虫的交叉抗原.
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具有保护性及诊断价值的弓形虫单克隆抗体的研制
目的:寻找具有保护性的弓形虫功能性表位,为疫苗制备和免疫诊断提供科学依据.方法:通过杂交瘤技术建立了抗弓形虫单克隆抗体的细胞株,观察了体内、外单克隆抗体的保护性效果;用夹心ELISA法检测了感染兔血清中的CAg,并观察了其与日本血吸虫抗原和弓形虫ME49株抗原的交叉反应.结果:建立了7个分泌弓形虫McAb的细胞株,Western-blot显示7个McAb可识别4种不同分子量的抗原,体外保护性实验证明这些单抗均可明显抑制弓形虫对细胞的侵袭及在细胞内的繁殖.在感染后第3 d即可检测到CAg,未发现其与日本血吸虫抗原间的交叉反应,但是与弓形虫ME49株出现了交叉反应带.结论:7个McAb对弓形虫感染具有一定的保护力,有潜在的诊断价值.
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艾蒿花粉与豚草花粉的抗原成分分析
目的比较艾蒿花粉和豚草花粉粗浸液中的蛋白质组分,探讨两者闻有无共同抗原.方法制备艾蒿花粉和豚草花粉的花粉浸液,采用SDS-PAGE及考马斯亮蓝染色分析两种花粉粗浸液中的蛋白质组分;用蒿属花粉过敏者的血清作为第一抗体,分别与两种花粉浸液发生反应,通过Western-blotting判断两种花粉间交叉抗原的存在.结果SDS-PAGE显示,艾蒿花粉显带13条,分子量在18～100kDa之间;豚草花粉显带5条,分子量在18～63kDa之间.免疫印迹表明,11份蒿属花粉过敏患者的血清,均能同时与艾蒿花粉及豚草花粉抗原发生反应,其中,同时发生反应的艾蒿花粉抗原有两条,分子量分别为18 kDa和20kDa;豚草花粉抗原有一条,分子量为18 kDa.结论艾蒿花粉与豚草花粉提取液蛋白组分差异较大,前者更复杂;但两者间存在共同抗原,可发生交叉过敏.
