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体外诱导的Helios+调节性T细胞的特征分析
目的 本研究拟对体外诱导的Helios+调节性T细胞(induced Helios+regulatory T cell, Helios+iTreg)的特征进行分析,并比较其与正常人外周血固有Helios+Treg(natural Helios+Treg, Helios+nTreg)的差异.方法 采集并分选正常人外周CD4+CD25-效应性T细胞(effector T cell,Teff),体外以抗CD3/抗CD28合并IL-2及TGF-β刺激诱导Helios+iTreg生成,以外周血Helios+nTreg作为对照,通过流式细胞术和real-time PCR分别分析其表型特征Foxp3+Treg特异性去甲基化区(Treg-specific demethylated region,TSDR)的甲基化水平.结果 体外诱导的Helios+iTreg高表达CD45RA,而Helios+nTreg几乎不表达CD45RA;体外诱导的Helios+iTreg较Helios+nTreg CD127、ICOS和PD-1的水平明显升高,IL-2和IFN-γ的表达水平明显升高,但CXCR3、CCR4等趋化因子受体的水平则明显下降;另外CD25的表达水平也明显下降;诱导型Helios+iTreg TSDR的甲基化水平明显低于Helios+nTreg.结论 诱导型Helios+iTreg具有与Helios+nTreg不同的特征,提示其在生理及病理条件下可能发挥不同的免疫调节作用.
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菟丝子多糖H3的研究
目的研究从中药菟丝子(Cuscuta chinensis Lam.)种子中提取分离所得的酸性纯多糖H3的结构特征。方法利用化学方法(糖组分分析、甲基化分析、糖醛酸还原和部分酸水解等)和光谱分析方法(1HNMR谱、13CNMR谱、IR谱等)对其结构进行了研究。结果 H3的分子量大于1.0×106，糖组分分析显示其是由阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖和半乳糖醛酸组成的，甲基化分析，部分酸水解和NMR光谱分析进一步揭示H3分子中各糖残基的连接方式及次序。结论 H3为一多分枝的结构复杂的杂多糖，为首次从该植物中分得。
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耙齿菌糖蛋白Ⅰ1-2-1的化学研究
目的对均一耙齿菌Irpex lacteus糖蛋白Ⅰ1-2-1进行化学研究.方法利用化学方法和光谱方法分析其结构特征.结果Ⅰ1-2-1的相对分子质量为40 000,由Ara、Xyl、Man、Gal、Glu组成,甲基化分析表明Ⅰ1-2-1的主链主要以1→2,1→6 linked Manp为主.结论Ⅰ1-2-1为结构复杂的糖蛋白,为首次从耙齿菌中获得.
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细脚拟青霉多糖I的化学结构
目的研究细脚拟青霉多糖I的分离纯化方法、相对分子量、单糖组成及其结合方式.方法室温下水提取出粗多糖,采用Sephadex G-100柱层析纯化.经过酸全水解,利用阴离子交换柱测定单糖的组成.甲基化分析测定单糖的结合方式.IR以及NMR光谱的研究确定糖苷键的类型.结果经高效液相色谱检测为均一性组成,从以后的GC-MS及NMR图谱也获得证明.结论细脚拟青霉多糖I为α-(1→6)连结的葡聚糖,相对分子量为2.05×104u.
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菟丝子中两个中性杂多糖的化学结构研究
目的研究中药菟丝子Cuscuta chinensis Lam.种子中的多糖成分.方法采用DEAE-cellulose离子交换与凝胶层析方法进行分离纯化,通过理化常数,化学和光谱分析研究其化学结构特征.结果分别从稀碱提取物与沸水提取物中分得2个多糖,即H6与H8,其中H6的相对分子量为3.14×105 u,而H8的相对分子量大于1.0×105u,两者均为结构复杂的中性杂多糖,都是由阿拉伯糖,鼠李糖,木糖和半乳糖组成.结论它们均为首次从该植物中分得的多糖类的化合物.
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非霍奇金淋巴瘤降钙素基因高度甲基化的检测
降钙素(CT)基因位于人类11号染色体短臂11P15,在某些肿瘤,DNA甲基化发生改变,其5′端"CCGG"发生高度甲基化,我们应用多聚酶链反应(PCR)检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)CT基因的高度甲基化,旨在探讨甲基化分析在NHL诊断和微小残留病灶监测上的应用价值。
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DNA甲基化分析技术
甲基化胞嘧啶(5'methylated cytosine,5mC)被称之为人类DNA的第5种碱基.肿瘤表观基因组(cancer epigenomics)概念的提出和人类表观基因组计划(Human Epigenetic Project,HEP)的实施将表观遗传学研究又推向了一个新的高度[1].了解DNA甲基化分析技术的原理、适应范围和优缺点有利于研究者根据自身不同需求和设备条件来选择有效方法达到终目的[2,3].
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粪便DNA甲基化分析在结直肠癌早期诊断中的价值
近年来,研究表明DNA甲基化改变与肿瘤的发生发展关系密切,有望用于恶性肿瘤的分子诊断.由于结直肠癌(CRC)组织持续脱落细胞到粪便中,因此检测粪便中CRC相关基因的甲基化状态有可能成为一条无创诊断CRC的新途径.增生性息肉蛋白基因(HPP1)是在结肠增生性息肉中鉴定出的一个新基因,在大多数CRC中表现出过甲基化[1].
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胆管癌中p14ARF甲基化分析及其与p53表达相关性研究
细胞周期调控异常可导致恶性肿瘤的形成,人类主要的细胞周期调控通路有两条即Rb(p16-Rb)和p53(p14ARF-p53)通路.
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尖吻蝮蛇降纤酶寡糖链的甲基化分析
目的:通过对尖吻蝮蛇降纤酶寡糖链的甲基化分析以测定其单糖组成及单糖残基类型.方法:尖吻蝮蛇降纤酶样品用肽:N-糖苷酶F(PNGase F)酶解释放寡糖链,经过甲基化、水解、还原、乙酰化后,制得其部分甲基化糖醇乙酸酯(PMAAs),衍生化产物用GC-MS分析,以测定其单糖组成和单糖残基类型.结果:样品中含有半乳糖(Gal)、岩藻糖(Fuc)、甘露糖(Man)和N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)4种单糖.单糖残基类型有末端Gal,末端Fuc,1,2连接、1,2,6连接、1,3,6连接及末端连接的Man,1,4连接及1,4,6连接的GlcNAc.结论:尖吻蝮蛇降纤酶寡糖链中含有Gal、Fuc、Man和Gl-cNAc 4种单糖.从单糖残基的类型可知,除了复杂型的N-连接寡糖外,高甘露糖型和/或杂合型N-连接寡糖也存在于降纤酶分子中.
