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双歧杆菌的特殊生理保健功能
双歧杆菌(bifidobacterium)是由法国巴斯德研究院的Tissier学者于1899年采用厌氧培养法首次从健康母乳婴幼儿的粪便中分离出来的一种专性厌氧菌,它是人体中很重要的益生菌,是健康人肠道内定植且数量占优势的一种细菌,具有免疫调节、抗肿瘤、抗菌消炎、抗衰老、降血脂、营养、护肝、通便等一系列特殊生理保健功能,与人类的许多病理、生理现象密切相关,现已确认双歧杆菌是人体健康的重要标志之一[1].人们应用DNA探针杂交、荧光原位杂交聚合酶链反应(PCR)、分子标记、基因芯片以及现代化医药研究高新技术,在分子学水平上相继对双歧杆菌的分类、优势菌株的培育、自身代谢产生的生物活性物质、生理保健功能及其防治疾病作用和机制等进行了系统研究,并于1990年在日本首次举行国际双歧杆菌专题学术研讨会,从而为双歧杆菌研究的全面开展奠定了坚实基础[2,3].
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大肠杆菌O157∶H7检测方法的研究进展
大肠杆菌O157∶H7(O157∶H7)是肠出血性大肠杆菌的一个主要菌型.美国于1982年发现O157∶H7引起出血性肠炎暴发,我国于1986年从病人标本中检出O157∶H7[1].1996年日本发生的O157∶H7引起的暴发、流行,引起了全世界的关注[2].O157∶H7被确认为一种新型的肠道致病菌,成为近年来食品卫生、饮水卫生和流行病学领域重要的研究对象之一[3].我国于1997年建立了全国O157∶H7监测网络,主要进行该菌的分离工作[1].近年来逐渐将分子生物学技术,如核酸探针杂交、PCR等技术用于O157∶H7的检测与鉴定.本文对O157∶H7的检测与鉴定方法的研究进展进行综述.
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HBV DNA与HBV五项指标检测的临床应用研究
目的研究乙型肝炎病毒(HBV)DNA与HBV五项指标乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)检测在临床应用中的价值.方法通过513例甲乙型肝炎血清标志检测结果分析,对HBeAg阳性的含义有了近一步的认识.结果发现它与HBeAg相关密切,在判断乙肝病毒复制时不能单凭HBeAg阳性,而应结合HBV DNA是否阳性;在判断乙肝病毒停止复制的康复期时也不能单凭HBeAg转阴、抗-HBe转阳,还应结合HBV DNA是否也转阴.结论把HBV DNA列入乙型肝炎常规检查具有较大的临床意义.
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基因芯片技术在肿瘤上的应用
防治癌症是人类共同的梦想,近年来,随着人类基因组图谱的完成,新型而有效的生物芯片技术将准确并提前预知可能发生的恶性肿瘤,成为医学领域的"宠儿”.它不同于1994年出现的第一类分子微阵列构成的DNA芯片,依赖分子杂交,成本高,探针合成工作量大,功能单一等缺点,在1996年,parinov等合成了21个碱基DNA,它可分别与十聚、五聚核苷酸杂交的凝胶元件微阵芯片,1999年Gilles等在硅片上蚀刻出电子回路和电极构成芯片,将扩增的病人DNA样品在芯片上转运、浓缩,并吸附到特定的电极上形成阵列,并与荧光标记的探针杂交,形成快速精确区分四等位单核苷酸多态性的电子点杂交的生物电子芯片,它们不仅增强了双链的稳定性,延长了探针的有效长度,提高了测序精确度,还可用于多态性及突变分析,使癌症的检查更加可靠、精确,并提前预知恶性肿瘤的发生,对其预防可起到重要作用.
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广州市部分食品中肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠艾希氏菌污染状况调查
肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠艾希氏菌(enteric shiga - like- toxin - producing and invasive E. ooli ESIEC) 是1993年徐建国等人发现和命名的第六类致泻性大肠艾希氏菌.它的特点是产志贺样毒素,与肠侵袭性大肠杆菌的INV探针、志贺样毒素1或志贺样毒素2探针杂交,对HEP-2细胞呈积聚性粘附,但不与EAggEC探针杂交.近年来,我国在粪便标本中检出该菌已有报道[1].为了探索ESIEC在食品中的污染情况,以便制订相应的预防措施,我们对广州市十二大类食品共310份样本进行检测,结果共检出ESIEC阳性菌株22株.现将调查结果报告如下:
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全自动(定量PCR)基因扩增诊断仪配套定量试剂的研制
目的研制一种能用于仪器操作的灵敏、快速、特异的定量试剂. 方法使用一个生物素标记的上游引物,对HBV DNA及其竞争模板DNA进行不对称PCR扩增,使扩增出的单链带有生物素,并可结合在固定有链亲合素的微孔板的表面. 用标有辣根过氧化物酶的待测模板探针和竞争模板探针分别与两个微孔中固定的相应单链PCR产物杂交,而后加底物显色,测定吸光度进行分级定量分析. 结果该定量方法可以检测10拷贝数的模板,而且对简便处理的标本适应性强;以分级定量的形式定量时,具有良好的重复性. 结论该试剂适用于仪器操作,可对临床血清中HBV DNA进行分级定量分析.
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不对称PCR杂交显色方法的建立及其对HBV DNA的检测
目的:建立一种灵敏、快速、特异的检测HBVDNAPCR产物的杂交显色方法.方法:使用一个生物素标记的上游引物对HBVDNA进行不对称PCR扩增,使扩增出的单链带有生物素,并可结合在固定有链亲合素的微孔板表面.用标有辣根过氧化物酶的探针与固定的单链PCR产物杂交,而后加底物显色测定吸光值.结果:该方法比常规的琼脂糖凝胶电泳法更特异,而且灵敏度高10倍~100倍,对简便处理的标本适应性强,具有良好的重复性.结论:该方法可以代替琼脂糖凝胶电泳法,有望成为PCR产物定性检测的常规临床检验方法.
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体外转录法制备地高辛标记cx43cRNA探针
原位杂交常用探针种类较多,检测组织细胞中mRNA,首选cRNA探针.与DNA探针不同,它是单链探针,杂交时无需变性,也没有互补链的干扰,敏感度比cDNA探针要高;与寡脱氧核酸探针比较,其敏感度也要高出许多;并且cRNA探针杂交形成RNA-RNA双链核酸比RNA-DNA和DNA-DNA双链核酸更稳定,从而允许多次洗涤,提高杂交信号,降低背景染色[1].
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聚合酶链反应-探针杂交-酶显色用于结核分支杆菌的检测
[目的]评价聚合酶链反应-探针杂交-酶显色方法,检测结核分支杆菌. [方法] 收集131例活动性肺结核患者和30例非结核呼吸系疾病患者的痰标本以双盲法进行痰涂片抗酸染色检查,结核菌培养、PCR-探针杂交-酶显色法、PCR-琼脂糖凝胶电泳技术检查对比.[结果]涂片法、培养法、 PCR-探针杂交-酶显色法的敏感性分别为26.72%、41.22%、70.23%,PCR-探针杂交-酶显色法的敏感性显著高于培养法和涂片法(P<0.01).PCR-探针杂交-酶显色法和PCR琼脂糖凝胶电泳法的敏感性分别为70.23%、70.99%,特异性分别为96.67%、86.67%,前者特异性比后者高,且PCR-探针杂交-酶显色法只检出结核分支杆菌和牛型分支杆菌.[结论] PCR-探针杂交-酶显色技术检测结核分支杆菌灵敏度高,特异性好,简便快速,同时能筛检非结核分支杆菌.因此,该技术具有很强的临床应用价值.