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工程酵母细胞高压破碎、蛋白低温保藏和去糖基化处理对7-木糖紫杉烷糖基水解酶LXYL-P1-2活性的影响
紫杉醇主要来源于红豆杉，作为一种“重磅炸弹”式的抗肿瘤药物，自1992年12月被美国 FDA批准上市以来，一直是销售额大的植物抗肿瘤药。但由于紫杉醇的天然含量极低，约占含量高的树皮部位的万分之二，加之红豆杉生长缓慢，早期从野生红豆杉中获取紫杉醇曾给红豆杉资源造成毁灭性破坏。目前主要依靠化学半合成或苗圃栽培手段制取。苗圃栽培虽然对保护野生红豆杉资源具有积极意义，但栽培红豆杉中紫杉醇含量低微的本质没有发生改变。另一方面，红豆杉中存在着大量的紫杉醇结构类似物，其中包括含量数十倍于紫杉醇的7-木糖-10-去乙酰紫杉醇，而后者在脱除木糖基之后形成的10-去乙酰紫杉醇仅需在 C10位乙酰化即可产生紫杉醇[1]。如能将这类副产物转变成紫杉醇，不仅可以减少其对环境的污染，还可以“变废为宝”，大大提高红豆杉资源的利用率。脱除木糖基可用化学法或生物酶法来完成，其中后者的专一性强、环境友好。但由于天然细胞中β-木糖苷酶的酶量普遍偏低，用筛选得到的微生物直接进行转化效率不高[2-3]，本实验室已尝试用基因工程方法解决这一问题。我们已从具有转化7-木糖-10-去乙酰紫杉醇为10-去乙酰紫杉醇能力的真菌香菇中克隆得到了7-木糖紫杉烷糖基水解酶 LXYL-P1-2，该酶隶属于糖基水解酶的第3家族，是一种全新的和双功能的β-木糖苷酶和β-葡萄糖苷酶，能高效且专一性地水解包括7-木糖-10-去乙酰紫杉醇在内的7-木糖紫杉烷的木糖基，生成相应的7-羟基紫杉烷。已对该酶及其重组菌开展了酶的表征、高密度发酵与生物催化等研究[4-6]。本文报告工程酵母细胞高压破碎条件、蛋白低温保藏和去糖基化处理对 LXYL-P1-2酶活性的影响，为利用纯化的重组酶进行酶结构与功能关系等的研究提供保障。
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HIV-1膜抗原部分糖基化位点改造对免疫原性及假病毒形成的影响
目的 研究HIV-1膜蛋白(Env)特定糖基化位点改造对Env免疫原性及功能性假病毒形成能力的影响.方法 采用环形诱变,DpnⅠ筛选的方法对Env进行定点突变,单周期感染试验检测功能性假病毒形成能力,免疫小鼠,利用假病毒中和试验与ELISPOT分别检测突变对中和抗体和T细胞分泌Env特异的IFN-γ的影响.结果 N197Q突变体使Env诱导中和抗体的能力提高而诱导T细胞分泌Env特异的IFN-γ的能力降低,并使Env不能形成功能性假病毒;G2突变体(N624Q,N637Q)诱导的中和抗体能更好地中和假病毒74-2,仉中和假病毒Wt的能力下降,对Env诱导T细胞分泌Env特异的IFN-γ的能力和功能性假病毒形成无明显影响.结论 特定糖基化位点的改造影响假病毒的形成及Env的免疫原性.
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去糖基化提高脑钠肽的诊断及预后价值
目前临床上常以心肌细胞来源的脑钠肽（BNP）以及脑钠肽前体N末端序列（NT-proBNP）作为急性呼吸困难患者诊断心衰和评估预后的指标。虽然应用广泛，但仍有将近15%的急性呼吸困难患者无法做出心衰诊断。因此，提升这些生物标志物的诊断和预后准确性的改进措施是十分有必要的。
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日本血吸虫虫卵可溶性糖蛋白去糖基化对其刺激机体产生Th2免疫应答能力的影响
目的 探究日本血吸虫虫卵可溶性蛋白(Schistosoma japonicum soluble egg antigen,SjEA)中的糖蛋白去糖基化后对其诱导机体产生Th2免疫应答能力的影响.方法 用胶原酶消化法制备SjEA,用过碘酸钠氧化处理后,制备成去糖基化的SjEA(deglycosylated SjEA,d-SjEA).6～8周龄雄性BALB/c小鼠随机分为PBS、SjEA和d-SjEA组,每组9只.用后足垫皮下注射的方式免疫小鼠,其中PBS组注射25μl PBS/侧,SjEA组注射50 μg SjEA/侧,d-SjEA组注射50μgd-SjEA/侧,4d后断髓法处死小鼠,取腘窝淋巴结,制备成浓度为4×106/ml淋巴细胞悬液,体外用anti-CD3和anti-CD28刺激48h后,ELISA检测细胞上清中的细胞因子IL-4.结果 SjEA组上清中IL-4的平均值为1.55 ng/ml,高于PBS组的0.03 ng/ml,差异有统计学意义(P ＜0.001)；d-SjEA组上清中IL-4为1.42 ng/ml,和SjEA组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 日本血吸虫虫卵可溶性蛋白中的糖蛋白在去除糖基化后对其诱导机体产生Th2免疫应答的能力无影响.
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人参皂苷体内代谢及其产物的生物活性
人参皂苷(ginsenoside)是从人参中提取出来的萜类化合物,是人参诸多药理药效作用的主要活性成分.天然人参皂苷口服难以被直接吸收,必须经过体内代谢后,其产物才能发挥生物活性.然而,迄今国内尚未检索到人参皂苷体内代谢过程比较系统的研究报道.因此,本文从以下4个方面概述下人参皂苷在体内的代谢研究:一是人参皂苷胃酸液、肠道菌、其他微生物的去糖基化；二是代谢产物通过被动扩散的方式进行吸收；三是代谢产物在肝脏中的酯化和聚集；四是代谢产物的生物活性.
