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产虾青素酿酒酵母工程菌的构建
目的对酿酒酵母固有的β-胡萝卜素代谢途径进行扩展，构建能够合成虾青素的酿酒酵母工程菌。
方法对不同来源的虾青素合成基因 crtZ（β-胡萝卜素羟化酶）与 crtW （β-胡萝卜素酮化酶）进行随机组合，采用overlap PCR 技术构建串联表达质粒，并将其导入产β-胡萝卜素酿酒酵母工程菌内，发酵产物经 HPLC 和 UPLC-MS鉴定，确定其成分。
结果构建出8种 TEF1p-crtZ-ADH1t-PGK1P-crtW-CYC1t组合的串联表达模式，其中基因组合分别为 crtZ1-crtW1， crtZ1-crtW4工程菌 HCCB08571、HCCB08572产生了虾青素；工程菌 HCCB08566、HCCB08568、HCCB08573未检测到产物虾青素，而出现了中间产物玉米黄质和斑蝥黄质。
结论成功构建了产生虾青素及其中间体的酿酒酵母工程菌。 -
基于外泌蛋白质组的酿酒酵母信号肽元件的分析及鉴定
目的 分析鉴定酿酒酵母细胞内源性地促进重组蛋白外泌表达的信号肽元件,并应用于重组蛋白的高效合成.方法 利用生物信息学软件SignalP4.1、Phobius、WolfPsort0.2和ProP1.0对已报道的酿酒酵母外泌蛋白质组所对应的信号肽进行计算分析,确定目标信号肽功能元件;再构建融合表达载体,转化酵母细胞,对获得的阳性克隆在摇瓶培养条件下外泌蛋白的表达进行测定验证.结果 通过生物信息学分析,从酿酒酵母外泌蛋白质组中确定了16个含有prepro区的信号肽功能元件,以敲除外切 β-(1,3)-葡聚糖酶1(EXG1)基因的酿酒酵母W303-1b/△ES为宿主菌,采用酵母 α-交配因子的信号肽功能元件作为对照,由EXG1的信号肽功能元件引导外泌的融合蛋白活性是 α-交配因子的3倍.结论 组合外泌蛋白质组和生物信息学分析的研究策略可以快速准确地分离鉴定促进异源蛋白分泌表达的信号肽功能元件,可应用于生物活性蛋白的高效表达.
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酵母UDP-葡萄糖合成途径的优化及黄酮葡萄糖苷的合成
目的：研究在酿酒酵母细胞内高表达大肠杆菌 UDP-葡萄糖合成途径的2个关键酶对工程酵母细胞的葡萄糖苷化反应活性的影响。方法利用 PCR方法获得大肠杆菌磷酸葡萄糖变位酶（PGM）和 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶（GalU）基因，构建整合型表达载体，转化酵母；同时共表达具有催化黄酮葡萄糖苷化的 UDP-葡萄糖转移酶，研究摇瓶培养条件下PGM和 GalU 基因的表达对工程细胞生物催化黄酮类化合物葡萄糖苷化的影响。结果在酵母细胞内表达大肠杆菌 UDP-葡萄糖合成途径的2个关键酶 PGM和 GalU，提高了组合表达 UDP-葡萄糖转移酶的工程菌生物催化合成野黄芩素-7-O-葡萄糖苷的效率，表明PGM和GalU基因的高表达能促进 UDP-葡萄糖的合成；所构建的工程菌也能催化木犀草素、柚皮素、白杨素、汉黄芩素、木蝴蝶素 A、黄芩素、槲皮素以及大豆黄酮等黄酮类化合物的葡萄糖苷化。结论组合表达大肠杆菌 PGM 和 GalU 基因能促进酵母细胞内 UDP-葡萄糖的合成，进而提高了工程细胞催化合成黄酮葡萄糖苷的效率。
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血清学检测ASCA和ANCA在炎症性肠病诊治中的应用价值
近期我国新版炎症性肠病诊断与治疗共识意见发布,其中ASCA、ANCA等血清学标志物检测对鉴别诊断的价值没有达成共识,不推荐作为常规检查项目.但在一些特殊病例,因症状和临床过程的不典型性,或不宜进行有创内镜检查,使具有较高特异性的血清学检测在鉴别诊断中仍具有临床意义.大部分国外研究支持ASCA、ANCA等血清学检测对预测IBD的发生、判定疾病生物学行为,预判生物制剂的疗效和手术后复发等都具有一定的意义.探讨不同血清学标志物联合检测方法的诊断价值,寻找敏感性高、特异性强的血清学标志物是这一领域今后研究的热点."未达成共识"正是对我国血清学检测对IBD诊治的临床意义做多中心、大样本临床研究的期望.
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酿酒酵母菌培养条件的研究
目的:优化酿酒酵母液体发酵得到菌体的佳条件.方法:通过单因素试验,以吸光度为指标,研究碳源、氮源、接种量、pH值及无机离子对酿酒酵母菌生长的影响.结果:酿酒酵母生长的佳碳源是葡萄糖,佳氮源是蛋白胨,佳接种量2％,佳初始pH为4.5,添加无机盐硫酸亚铁能够促进其生长.结论:得到了酿酒酵母液体生长的佳培养基配方.
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内质网应激在肝病发生中的作用
内质网(endoplasmic reticulum,ER)不仅担负蛋白质的合成、折叠、运输、成熟及分泌,也具有合成甘油三酯和胆固醇、药物代谢以及贮存和释放钙离子等重要功能.正常情况下,非折叠多肽的载荷与ER的多肽折叠能力之间存在稳态平衡.生理环境的改变可影响ER和其他细胞器之间的信号转导通路,从而影响蛋白质合成速率,调节对折叠需求的适应性,以利细胞生存.这种对非折叠蛋白堆积的自稳性适应性反应是一种进化上的保守机制,称为"非折叠蛋白反应( unfolded protein response,UPR)",早发现于酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae).UPR对于肝细胞、淋巴细胞、胰腺β细胞及腺泡细胞等富含ER并负责蛋白质合成的细胞尤为重要.
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酿酒酵母菌抗体(ASCA)与克罗恩病
一、克罗恩病的遗传学易感性克罗恩病发病系环境因子与遗传因子相互作用所致[1].环境因子中,受关注的为肠道微生物或某些食物抗原;而遗传因子中,受重视的是人种倾向性以及家属及孪生聚集性.证实炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)具有遗传学倾向的重要研究方法之一为系统性基因组(genome)筛选研究.
