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团体治疗进程中的沉默现象
沉默是团体治疗进程中常见的现象,它可能以多种形式出现在各类团体治疗中,也可能在团体治疗的不同阶段出现.沉默远非无言,它可以是团体治疗中一种强有力的沟通方式,也可能成为团体治疗中的破坏性因素,导致团体治疗进程出现困难.对沉默现象的解读对于理解团体动力,实现团体目标至关重要.本文对这一现象进行了梳理,从团体治疗中沉默现象的涵义、种类、对团体的影响、产生机制、团体带领者对沉默的处理等方面进行阐述.
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miR-92b在神经胶质瘤裸鼠移植瘤模型中的作用
目的 建立U251胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型,观察沉默miR-92b对U251神经胶质瘤裸鼠皮下移植瘤生长的影响.方法 采用神经胶质瘤U251细胞株建立神经胶质瘤的裸鼠皮下移植瘤动物模型,将shRNA-miR-92b表达的质粒稳定转染U251细胞,筛选稳转细胞采取多点注射的方法注入裸鼠皮下,以阴性质粒和PBS为阴性对照组(shRNA-miR-92b NC组)和空白对照(PBS组);检测裸鼠成瘤体积和重量;real-time PCR检测移植瘤中miR-92b、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的表达水平;western blot检测移植瘤中的IGFBP-3、β-链蛋白(β-cate-nin)和钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平;免疫组织化学技术检测移植瘤中IGFBP-3、β-catenin和E-cadherin表达水平.结果 移植瘤形成过程中裸鼠未出现死亡,全部裸鼠均皮下成瘤,肿瘤体积检测后发现shRNA-miR-92b转入后显著抑制移植瘤的生长(P<0.05);转入shRNA-miR-92b后,移植瘤中的miR-92b表达水平降低,IGFBP-3的表达水平增加(P<0.05);western blot结果显示IGFBP-3和E-cadherin蛋白表达升高,β-catenin蛋白表达降低(P<0.05);免疫组化结果也显示IGFBP-3蛋白表达升高,β-catenin蛋白表达降低(P<0.05).结论 沉默miR-92b表达后可能通过上调IGFBP3、E-cadherin蛋白表达,下调β-catenin蛋白表达,从而抑制神经胶质瘤裸鼠皮下移植瘤的生长.
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浅析心理咨询交流中沉默与多话及处理
从咨客一走进咨询室,咨询员与咨客之间的交流就已经开始了.在咨询交流的过程中咨客往往会出现沉默与多话的现象,如何正确认识与处理沉默与多话对于提高咨询交流的质量,从而达到更好的治疗效果具有重要的意义.
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靶向调控大鼠海马 CNN3基因表达载体的构建及鉴定
目的：建立可调控大鼠局部脑区CNN3基因表达的技术，为进一步研究CNN3基因参与脑内病理生理过程奠定基础。方法设计并合成针对CNN3基因的全长编码序列cDNA和3条shRNA干扰靶点序列，利用基因工程技术构建CNN3-OE和3个CNN3-shRNA慢病毒载体，在立体定位仪引导下注入大鼠海马，采用蛋白免疫印迹技术筛选CNN3基因的佳沉默序列，并找出重组表达和沉默慢病毒载体调控海马CNN3基因的变化规律。结果 CNN3-OE和3个CNN3-shRNA慢病毒干扰载体均构建成功，转染后8周内对海马CNN3基因水平均有一定调控作用，其中CNN3-shRNA2载体组在转染后的8周内海马CNN3基因编码蛋白calponin-3水平均显著性下调，高抑制率为73.26％；CNN3-OE慢病毒载体组中海马calponin-3蛋白水平具有统计学意义的升高仅在转染后第14天，上调率为93.88％。结论通过定位注射CNN3-OE和CNN3-shRNA慢病毒载体可在体调控局部脑区CNN3基因表达，为后续的机制研究和开拓疾病防治新途径奠定基础。
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长链非编码RNA lnc-GCLC-1稳定沉默的肝细胞株L02的构建与验证
目的 利用慢病毒载体构建长链非编码RNA lnc-GCLC-1沉默的稳转L02肝细胞株,为研究lnc-GCLC-1功能提供基础.方法 以lnc-GCLC-1为靶点,设计并合成4组双链发卡结构,分别与慢病毒载体psi-LVRH 1GP连接构成重组质粒;转化感受态细胞获取大量重组质粒后电泳、测序鉴定;通过瞬时转染筛选出2个有效的短发卡RNA(shRNA);将重组质粒转染293T细胞后,收集病毒液并感染L02细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株.利用荧光显微镜观察细胞绿色荧光情况以检测转染效果,采用Real-time PCR鉴定转染细胞株,并检测lnc-GCLC-1沉默对GCLC mRNA表达的影响.结果 电泳及测序结果表明重组慢病毒载体构建成功;shRNA-2和shRNA-4是有效的shRNA;用0.5 μg/ml嘌呤霉素成功筛选出稳定低表达L02细胞株;在shRNA-2和shRNA-4稳定转染L02细胞株中,lnc-GCLC-1的表达水平均低于阴性载体组(P＜0.05),沉默效率分别为21.3％和64.82％;shRNA-2组和shRNA-4组GCLC的mRNA表达量均低于阴性载体组(P＜0.01).结论 本研究成功构建了lnc-GCLC-1沉默稳转L02细胞株.
关键词： lnc-GCLC-1 沉默 L02细胞 慢病毒载体 -
社区心理咨询中常见现象的处理技术
社区心理咨询过程中来访者出现阻抗、沉默、移情、反移情等现象是咨询师必须着重处理的问题,也是对咨询师咨询技术水平的考验.本文阐述了阻抗、沉默、移情和反移情的概念、临床表现及类型,有针对性地详述了处理的原则和方法.
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护患沟通技巧
随着医学模式的转变,护理工作的范围不断拓宽,特别是近年来健康教育工作的开展,护患间的接触更加密切.现代医学研究证明,许多疾病与情绪因素有关.良好的沟通可稳定病人的情绪,建立融洽的护患关系,从而提高护理质量及促进病人的早日康复.
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转化生长因子β1基因沉默脂肪干细胞移植治疗血小板减少性紫癜
背景:有研究表明干细胞治疗为血小板减少性紫癜的治疗带来了新的希望,但对于此病的完美的治疗仍存在困难.目的:探讨转化生长因子β1基因沉默脂肪干细胞移植对血小板减少紫癜小鼠疗效的影响.方法:将构建的转化生长因子β1-siRNA质粒转染至小鼠脂肪干细胞中,使其低表达转化生长因子β1.用豚鼠抗小鼠血小板血清(GP-APS)腹腔注射构建血小板减少性紫癜模型小鼠,建模后随机分为4组,血小板减少性紫癜模型组尾静脉注射生理盐水20 μL,脂肪干细胞组和转化生长因子β1沉默组分别尾静脉注射2x106 L-1的CM-Dil标记的脂肪干细胞,转化生长因子β1沉默脂肪干细胞悬液20 μL,泼尼松组按泼尼松5 mg/kg灌胃,连续治疗14d.结果与结论:①免疫荧光染色及EILSA检测:与其他3组比较,转化生长因子β1沉默组CM-Dil标记的阳性细胞数目,血小板计数,产板型巨核细胞比例均升高,骨髓巨核细胞总数、PAIgG及转化生长因子β1水平下降(P＜0.05);②结果说明,转化生长因子β1基因沉默脂肪干细胞移植能有效降低血小板减少性紫癜小鼠转化生长因子β1及PAIgG水平,促进骨髓巨核细胞分化成熟,从而有效提高血小板计数,对治疗血小板减少性紫癜有效果较好.
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PDGF-α受体沉默对人晶状体上皮细胞增殖及凋亡的影响
目的 研究血小板源性生长因子-α受体沉默对人晶状体上皮细胞增殖及凋亡的影响,为治疗后发性白内障提供实验依据.方法 体外培养人晶状体上皮细胞SRA01/04,用脂质体将合成的血小板源性生长因子-α受体反义寡核苷酸(PDGFR-αASODN)处理SRA01/04,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡;Hoechst33258荧光染料染色法分析细胞凋亡;RT-PCR检测PDGF-α受体的表达.结果 PDGFR-αASODN作用于SRA01/04细胞24 h～72 h,SRA01/04细胞增殖受抑制,且72 h时对细胞的抑制作用明显,与低浓度药物组比较,高浓度药物组对细胞的抑制作用增强(P＜0.05);实验组细胞凋亡率分别为(3.22±0.25)％、(5.29±0.27)％,与对照组(0.75±0.67)％和错义寡核苷酸组(1.46±0.60)％比较,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组G1期细胞分布率分别为(53.31±1.30)％、(59.98±0.95)％,与对照组(47.73±1.18)％和错义寡核苷酸组(49.48±1.09)％比较,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组PDGF-α受体在SRA01/04中表达下调.结论 PDGF-α受体沉默能抑制人晶状体上皮细胞的增殖,诱导其凋亡.
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Bmi-1 siRNA对宫颈癌Hela细胞体外增殖能力的影响
[目的]观察siRNA沉默Bmi-1表达对Hela细胞增殖能力的影响.[方法]构建了表达Bmi-1 siRNA的重组真核表达载体,将其转染入Hela细胞,利用荧光法观察转柒效率.用RT-PCR及Western blot方法检测转染后细胞Bmi-1 mRNA及Bmi-1蛋白的表达情况；用MTT比色法、台盼蓝拒染法检测Bmi-1 siRNA对Hela细胞增殖的抑制作用；用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期；用平板克隆形成实验检测Bmi-1 siRNA对Hela细胞的单细胞增殖能力的影响；应用免疫细胞化学(SP法)及Western blot法检测各组细胞Ki-67及CyclinD1的表达.[结果]将构建好的重组质粒成功转染进入了Hela细胞中且转染效率在90％左右；Bmi-1 siRNA转染Hela细胞Bmi-1 mRNA及Bmi-1蛋白表达沉默,Bmi-1表达沉默后抑制Hela细胞增殖并使细胞周期阻滞于G0-G1期,能明显抑制Hela细胞的单细胞增殖能力；同时Ki-67及CyclinD1的表达均明显下降.[结论]siRNA介导的Bmi-1基因的表达沉默能抑制Hela细胞的增殖能力,Bmi-1表达可能与宫颈癌的发生发展相关.
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失语:医患交往中的沉默现象反思
本文从医生和患者交往的失语现象入手,采取案例分析的方法,分析了沉默的不同类型及特点,指出沉默的原因是对医患沟通的忽视,医生的无暇,受传统父权思想的影响,其根源在于人文精神的失落,并有针对性地提出了沉默的唤醒的途径和治疗失语的方法.
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SCO2基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究下调细胞色素C氧化合成酶2(SCO2)在乳腺癌MCF-7细胞的表达,对MCF-7细胞生长和细胞凋亡的影响,并探索其可能的作用机制.方法:构建SCO2基因特异性siRNA慢病毒载体,感染乳腺癌MCF-7细胞,设实验组、空白对照组、阴性对照组,应用实时荧光定量PCR和Western blot验证SCO2基因mRNA和蛋白的表达变化;感染96 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况;CCK8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力和克隆形成能力的情况;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase3蛋白的表达变化.结果:SCO2基因在MCF-7细胞中呈低表达;抑制SCO2基因后MCF-7细胞增殖能力增强,凋亡率下降;同时,MCF-7细胞中Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达水平均显著下降,而Bcl-2蛋白表达水平显著增加.以上结果差异均具有统计学意义(P<0.05).结论:乳腺癌MCF-7细胞中SCO2基因呈低表达,通过慢病毒转染沉默SCO2基因可促进乳腺癌细胞的增殖,抑制乳腺癌细胞的凋亡,其作用机制可能与下调Bax和Cleaved-caspase 3表达,上调Bcl-2表达有关.
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沉默c-myc基因对Raji细胞自噬活性的影响
为了研究沉默c-myc基因后Raji细胞自噬活性的变化及其机制,采用脂质体转染SiRNA法沉默c myc基因,在透射电镜下观察细胞自噬体的形成情况,采用western blot法测定LC3-Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin-1、磷酸化P70、磷酸化AKT蛋白的表达.研究发现沉默c-myc基因后,电镜下观察到Raji细胞自噬活性随时间而增强,LC3 Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值随时间而增高;Beclin-1表达增高,磷酸化P70表达降低,磷酸化AKT表达无明显变化.结果提示沉默c-myc基因使Raji细胞自噬活性明显增强,其机制是通过上调Beclin-1表达和抑制mTOR的活性来实现的.
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人巨细胞病毒潜伏-激活研究的新进展
人巨细胞病毒(HCMV)一旦感染则终身潜伏或为持续性感染,中国人群中HCMV的高感染率特别引起多方关注.
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激活微生物沉默基因簇合成新型天然产物的研究
随着微生物基因组测序项目开展,越来越多的沉默基因簇被发现.采用激活微生物沉默基因簇的方法,可以充分发掘微生物次级代谢的潜力并可以获得大量新结构天然产物,为新药发现提供更多天然化合物来源.本文简要介绍激活沉默基因簇合成微生物次级代谢产物的方法.
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RNA干扰抑制c-myc基因表达对D341细胞增殖的影响
目的 探讨应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制髓母细胞瘤D341细胞株的c-myc基因对D341细胞的生长、细胞周期及凋亡的变化.方法 制备特异性针对c-myc基因的siRNA,转染D341细胞,实时定量RT-PCR、Westera blot检测c-myc基因表达情况,流式细胞仪进行细胞周期及凋亡检测.结果 siRNA转染D341细胞后,c-myc基因表达在转染后24 h抑制效率高,c-myc蛋白在48 h抑制效率高,并随siRNA浓度的增大,沉默c-myc基因效率增高.RNA干扰抑制D341细胞c-myc基因后,细胞生长停滞于G1期.结论 针对c-myc基因的siRNA对D341细胞c-myc mRNA及蛋白有明显抑制作用,细胞生长受到抑制,有望成为髓母细胞瘤的新的治疗途径.
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护患沟通中沉默行为应对模型的构建
目的 针对护患沟通中出现的沉默行为,构建具有可操作性的应对模型.方法 根据有效沟通的6个步骤,以沟通前、沟通中、沟通后为阶段,初步制定护患沟通中沉默行为的应对流程.采用德尔菲专家咨询法对14名专家进行2轮函询.结果 专家权威程度0.8,2轮函询后结果趋于一致.终形成护患沟通中7个主题、3种类型沉默的应对流程.结论 沉默应对模型的建立,有利于护理人员正确识别护患沟通中的沉默行为,依据应对模型采取有效的沟通方法,减少护患沟通不良导致的护患纠纷.
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护患沟通双方对沉默方式感受的质性研究
目的 了解护患沟通双方对沉默这一非语言沟通方式的使用感受,为医护人员有效应对沉默提供参考.方法 采用录像法、深度访谈及焦点小组访谈相结合的质性研究方法,对150名医院实习护生客观结构化临床考试(OSCE)中的护理人文部分护患沟通进行录像分析并初步建模,结合对7名护士的深度访谈及5名患者及家属的焦点小组访谈,运用话语分析和内容分析方法分析访谈内容形成主题编码.结果 提炼出7个主题,分别为安全的沉默、解决问题的沉默、缺乏兴趣的沉默、共情的沉默、中立的沉默、制造压力的沉默、尴尬的沉默.结论 沉默行为在护患沟通过程中的出现主要与护患双方为表达某种特定情感或需求如安全、解决问题、缺乏兴趣、共情、中立、制造压力、尴尬等有关.制定护患沟通中的沉默应对模型,形成护理人员对沉默的应对措施,将利于良好护患关系建立,减少护患纠纷.
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载脂蛋白C-Ⅲ基因沉默对HepG2细胞脂代谢的影响
目的:研究RNAi技术沉默载脂蛋白C-Ⅲ基因(ApoC3)表达后对HepG2细胞内外脂质含量及其他脂代谢相关基因表达的影响.方法:合成3对针对ApoC3 mRNA不同位点序列的小干扰RNA(siRNA),并分组转染至人肝细胞株HgpG2,实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测ApoC3 mRNA及蛋白质的表达水平,筛选出沉默效果佳的一对siRNA.将有效的siRNA转染HepG2细胞,48 h后测定细胞内外脂质含量以及脂代谢相关基因的mRNA表达水平.结果:25 nmol/L siRNA和3μ上l/孔(24孔板)转染试剂的转染效率高.ApoC3-siRNA-3对ApoC3基因的沉默效果好,对mRNA的抑制率为94.6％,上清液中检测不到ApoC-Ⅲ.ApoC3-siRNA-3沉默ApoC3基因后细胞内三酰甘油(TG)和胆固醇含量显著高于对照组,细胞外TG含量显著低于对照组.与对照组比较,ApoC3-siRNA-3沉默组载脂蛋白B100基因mRNA表达水平显著增强,肝脂酶基因mRNA表达水平显著降低.结论:ApoC3基因沉默可显著升高HepG2细胞内TG含量及显著降低细胞外TG含量,其可能机制是通过减少极低密度脂蛋白(VLDL)颗粒的分泌以及增加VLDL残粒的摄取.
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蛋白激酶CK2基因表达沉默对鼻咽癌细胞放射增敏作用
目的 研究蛋白激酶CK2表达沉默对鼻咽癌细胞放射增敏作用,并探讨其可能机制.方法 通过RNA干扰技术下调鼻咽癌5-8F细胞中CK2α蛋白表达,利用Western blotting方法验证干扰效果;利用克隆形成实验观察CK2表达沉默后对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响;应用免疫荧光方法检测γ-H2AX灶点形成;Annexin-V和PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 通过RNA干扰技术可以有效沉默CK2α表达.克隆形成实验结果显示CK2α表达沉默后,鼻咽癌细胞形成克隆能力明显下降,对X线的敏感性明显增加;1 Gy照射后15min,CK2α沉默的细胞γ-H2AX灶点数目明显增加;CK2α沉默的细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01).结论 蛋白激酶CK2与鼻咽癌放射敏感性密切相关,CK2可能是一个非常有潜力的鼻咽癌治疗靶点.
