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周期蛋白A在白血病细胞中表达意义的临床与实验研究
不断增殖是肿瘤的基本特征.一些基本的细胞周期调控分子参与了肿瘤的形成.细胞周期蛋白A(cyclin A)是在G1/S期表达的细胞周期蛋白(cyclin),其异常高表达参与了肿瘤的形成.为了探讨cyclin A异常高表达与白血病细胞恶性增殖的关系,采用流式细胞仪胞浆内间接免疫荧光/DNA双染色法半定量分析了急性白血病患者、门诊修回骨髓穿刺的患者、健康献血者这三种不同来源的外周血或骨髓标本细胞,以及白血病细胞系(HL-60) cyclin A表达水平.为了进一步研究cyclin A在白血病细胞增殖中的作用,用在体内、体外均有抗肿瘤作用的六亚甲基二乙酰胺(HMBA)在体外抑制白血病细胞系HL-60增殖,并诱导其分化.增殖抑制效应采用四唑盐还原试验和细胞周期分析来检测.细胞表面分化抗原CD33、CD11b改变来检测分化.结果发现,两组来自白血病标本的细胞S期cyclin A (即急性白血病患者外周血或骨髓幼稚细胞和白血病细胞系)表达阳性率要远远高于另两组(门诊骨髓穿刺的患者骨髓细胞和健康献血员外周血细胞);在HMBA抗肿瘤细胞系HL-60增殖实验中发现随药物剂量的加大,增殖抑制和分化程度呈剂量依赖性;同时,胞内cyclin A蛋白表达水平被明显下调了,也呈剂量依赖性.结论:白血病细胞S期cyclin A异常高表达,HMBA能下调 S期cyclin A表达水平,且随着胞内S期cyclin A表达下调,细胞增殖被抑制和分化程度亦不断加深,两者均呈剂量依赖性,这证明了下调cyclin A表达是HMBA抗白血病细胞系增殖的主要机理,同时提示cyclin A的异常高表达参与了白血病恶性增殖的环节.
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六亚甲基二乙酰胺诱导HL-60细胞分化及其分子机制的研究
本研究探讨六亚甲基二乙酰胺(HMBA)对髓系白血病HL-60细胞分化的作用及其分子机制.应用MTT比色法观察不同浓度HMBA在不同时间点对细胞增殖的抑制作用,采用Wright-Giemsa染色观察细胞形态学变化,运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b的表达,并进行细胞周期分析,半定量RT-PCR分析c-myc、mad1、p21、p27、hTERT、HDAC1基因mRNA的表达.结果表明:HL-60细胞经不同浓度(0.5、1、2 mmol/L)HMBA处理后细胞增殖受到较明显的抑制,并随时间延长、剂量增大抑制作用明显增强.HL-60细胞经2 mmol/L HMBA处理后,细胞形态学上趋于分化成熟,细胞停滞于G0/G1期;CD11b表达显著增高;c-myc、hTERT mRNA表达显著下调,mad1、p21、p27 mRNA表达显著上调,而HDAC1 mRNA表达无明显变化.结论:HMBA能诱导HL-60细胞分化,其分子机制可能是通过调节c-myc/mad1开关引起p21、p27上调,并且下调hTERT mRNA表达,与HDAC1活性抑制无关.
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六亚甲基二乙酰胺对MEC-1细胞体外粘附、移动和侵袭的影响
目的 研究分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺(hexamethylene bisacetamide,HMBA)对人粘液表皮样癌细胞系MEC-1体外粘附、移动和侵袭的影响.方法 用2 mmol/L HMBA体外诱导培养MEC-1细胞,用MTT(thiazalyl blue,噻唑蓝)比色法测定细胞在重构基底膜Matrigel上的粘附,用Millicell-PCF 培养系统测定细胞的移动性和侵袭性.结果 HMBA诱导的MEC-1细胞在30 min和90 min 粘附实验中的粘附率,分别下降了26.81%和31.13%(P＜0.05).HMBA对MEC-1细胞体外移动和侵袭的抑制率分别为63.49%和67.65%(P＜0.05).结论 HMBA对人粘液表皮样癌细胞MEC-1具有抗侵袭作用.
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六亚甲基二乙酰胺体外对白血病细胞株的抗增殖作用及其机理研究
目的研究抗肿瘤药物六亚甲基二乙酰胺(HMBA)在体外对人白血病细胞株U937,K562增殖和凋亡的作用,初步从细胞周期调控的角度探讨其作用机理.方法应用MTT比色法和锥虫蓝拒染法观察HMBA对细胞增殖的抑制作用.用细胞周期素A/DNA双染色法检测不同浓度HMBA(1、2、4 mmol/L)实验组细胞胞浆内细胞周期素A蛋白表达水平,并进行DNA含量分析.用异硫酸盐荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶双染色法,DNA片段变化和亚G1峰检测细胞凋亡.结果 (1)HMBA能明显地抑制K562,U937细胞增殖,呈剂量依赖性(K562细胞经HMBA干预后第六天,对照组、1、2、4 mmol/L组MTT法的595 nm吸光度值分别为1.03、0.81、0.58、0.36).(2)HMBA能剂量依赖性地下调胞浆内细胞周期素A表达水平,(K562细胞经HMBA干预后,对照组,1、2、4 mmol/L组细胞周期素A阳性率分别为34.4%±5.2%,16.1%±2.5%,9.9%±1.7%,7.6%±2.0%),S期细胞比例与细胞周期素A的改变趋势是一致的.(3)各实验组均未检测到有凋亡发生.结论 HMBA通过下调S-G2期周期素A表达而打破了K562,U937细胞增殖的环节,是其发挥抑制白血病细胞增殖的机理之一.
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六亚甲基二乙酰胺对急性白血病细胞株HL-60和U937分化、凋亡的影响及其机制
目的研究六亚甲基二乙酰胺(HMBA)体外诱导HL-60和U937细胞分化、凋亡的作用及其机制.方法流式细胞仪检测细胞分化抗原CD11b、CD14,细胞凋亡标记Annexin-Ⅴ以及进行细胞周期分布和细胞内cyclin D、cyclin E、p27抗原的分析,RT-PCR检测c-myc、Rb、Bcl-2基因mRNA的表达.结果 HL-60、U937细胞经HMBA处理72 h后CD11b表达显著增高,高剂量HMBA促使Annexin-Ⅴ表达增加.HMBA阻滞HL-60、U937细胞于G0/G1期,并使该两种细胞内cyclin E表达显著下降,cyclin D、p27表达显著增高,呈剂量依赖关系;HMBA可使HL-60、U937细胞c-myc、Bcl-2 mRNA表达下调,而Rb mRNA在HL-60细胞表达上调,在U937细胞则无显著改变.结论 HMBA能诱导HL-60、U937细胞出现明显的分化,高剂量的HMBA有促使HL-60、U937细胞凋亡的倾向,其机制可能是通过影响细胞周期调控分子以及有关的增殖分化相关基因的表达,从而抑制细胞增殖,促进细胞分化.
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六亚甲基二乙酰胺处理粘液表皮样癌细胞后CyclinD1、E2F的表达
目的探讨分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺(HMBA)诱导人粘液表皮样癌细胞后,CyclinDi和E2F表达的变化.方法2mmol/HMBA对培养的粘液表皮样癌细胞进行体外诱导72h后,分别采用光学显微镜、免疫组织化学、图像分析等方法对处理与未处理细胞的CyclinDi和E2F表达变化进行定量分析.结果HMBA处理的粘液表皮样癌细胞CyclinDi和E2F表达,明显低于未处理组(P＜0.01).结论HMBA通过影响CyclinDi、E2F的表达而发挥对粘液表皮样癌细胞增殖的抑制作用.
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六亚甲基二乙酰胺对HL60细胞分化和凋亡的影响
目的:研究六亚甲基二乙酰胺(HMBA)诱导HL60细胞分化和凋亡的作用.方法:流式细胞仪(FCM)检测HL60细胞分化抗原CD11b、CD14和CD68抗原表达,Annexin V/PI染色法测定HMBA对HL60细胞凋亡的作用,FCM检测HMBA对于HL60细胞细胞周期的影响.结果:HMBA作用72 h后,HL60细胞CD11b抗原表达明显上调,表明HMBA诱导HL60细胞向成熟粒系分化;同时HMBA具有很弱的诱导HL60细胞凋亡的作用;HMBA作用后HL60细胞被阻滞于细胞周期的G0/G1期.结论:HMBA对HL60细胞的作用主要是促进分化,诱导凋亡不是主要作用机制;HMBA阻滞HL60细胞于G0/G1期,这种细胞周期阻滞作用可能是HMBA促分化作用的基础.
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六亚甲基二乙酰胺对粘液表皮样癌细胞p21、PCNA、Cyclin D1表达的影响
目的探讨分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺(HMBA)诱导人粘液表皮样癌细胞后,p21、增殖细胞核抗原(PCNA)和CyclinD1表达的变化.方法用2mmol/L HMBA对培养的粘液表皮样癌细胞进行体外诱导72h后,分别采用免疫组织化学、图像分析等方法对处理与未处理细胞的p21、PCNA和Cyclin D1表达变化进行定量分析.结果 HMBA处理的粘液表皮样癌细胞p21表达明显高于对照组(P＜0.01);PCNA和Cyclin D1表达明显低于对照组(P＜0.01).结论 HMBA通过影响p21、PCNA和Cyclin D1的表达而发挥对粘液表皮样癌细胞的抑制增殖作用.
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转化生长因子β1/SMAD信号通路在六亚甲基二乙酰胺抑制K562细胞增殖中的作用
目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD信号通路在六亚甲基二乙酰胺(HMBA)抑制K562细胞增殖中的作用.方法采用HMBA诱导K562细胞分化模型后,四甲基偶氮唑盐(MTT)实验和流式细胞术分别检测HMBA对K562细胞的增殖和细胞周期作用,逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1、SMAD3、SMAD4和亲嗜性病毒整合位点1(EV11)在基因水平上相对表达量的变化趋势.结果 HMBA能抑制K562细胞增殖并促进其分化,作用程度随时间延长或剂量加大而增大,作用72 h时半数抑制浓度(IC50)为2 mmot/L.K562细胞经2 mmol/L HMBA作用72 h内,G0-G1期细胞百分率逐渐增高;TGF-β1、SMAD3和SMAD4在mRNA水平的相对表达量逐渐增高,而EVI1在mRNA水平的相对表达量逐渐降低.结论HMBA通过TGF-β1/SMAD信号通路抑制K562细胞增殖.
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六亚甲基二乙酰胺对HL60细胞体外作用的实验研究
目的:研究六亚甲基二乙酰胺(HMBA)对急性髓性白血病细胞株HL60细胞的作用及机制.方法:MTT法检测HMBA对HL60细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测HL60细胞分化抗原CD11b和CD14抗原表达,FCM检测HMBA对HL60细胞细胞周期分布的影响,逆转录-聚合酶链反应法检测HMBA对HL60细胞细胞周期蛋白依赖性激酶-2(CDK2)mRNA表达的影响.结果:HMBA体外可以显著抑制HL60细胞的增殖,HMBA作用后HL60被阻滞于细胞周期的G0/G1期,并向成熟粒系分化;HL60细胞的CDK2基因mRNA表达下调.结论:HMBA可能通过调节某些细胞周期相关基因的表达,将HL60细胞阻滞于G0/G1期,进而促使HL60细胞朝成熟粒系分化,从而发挥对HL60白血病细胞的治疗作用.
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AgNORS在六亚甲基二乙酰胺诱导涎腺粘液表皮样癌细胞分化研究中的表达和意义
粘液表皮样癌是涎腺恶性肿瘤中常见的一种.本实验以六亚甲基二乙酰胺(HMBA)作为分化诱导剂,对涎腺粘液表皮样癌MEC-1细胞进行了体内外诱导,并通过银染技术对对照组和HMBA诱导组癌细胞核内核仁组成区(NORS))的数目、大小及分布特征进行了观察.结果表明:经HMBA诱导后的癌细胞,细胞核内嗜银颗粒的数目明显较对照组少,且直径变大,分布趋于集中.说明在HMBA作用下,癌细胞向成熟方向发生了一定分化,AgNORS技术在诱导分化研究中有一定应用价值.
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六亚甲基二乙酰胺:一种新的细胞周期调节药物
细胞周期调节药物治疗白血病和诱导分化剂一样,给肿瘤治疗开辟了新路.目前一种新的周期调节药物六亚甲基二乙酰胺(HMBA)已在国内开始二期临床试验.实验表明,HMBA在体外能诱导95%以上的多种肿瘤细胞株在G1期停滞、趋向分化.本文就HMBA调节细胞周期时发生的分子生物学改变作一综述,并总结国外临床试验结果.
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HMBA对粘液表皮样癌P53蛋白表达和细胞增殖周期的影响
目的:研究六亚甲基二乙酰胺(HMBA)诱导人粘液表皮样癌(MEC-1)细胞分化与细胞P53蛋白表达和细胞增殖周期的关系.方法:MTT比色法测定HMBA对MEC-1细胞体外生长的作用;Feulgen染色测定细胞DNA含量;ABC免疫酶染色检测P53蛋白;FCM法测定细胞增殖周期.结果:HMBA对MEC-1细胞的生长抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性;HMBA诱导的细胞与对照细胞比较,DNA含量减少,P53蛋白水平降低,G1期细胞数增加和S期细胞数减少.结论:HMBA对MEC-1细胞的诱导分化作用与其调节P53基因蛋白表达和细胞增殖周期有关.
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六亚甲基二乙酰胺对MEC-1细胞凋亡及bcl-2基因表达的影响
目的:研究分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺(hexamethylene bisacetamide,HMBA)诱导人粘液表皮样癌细胞系MEC-1细胞凋亡及对凋亡相关基因bcl-2表达的影响.方法:用2 mmol/LHMBA和1 mg/L 5 FU对培养的MEC-1细胞进行体外诱导72 h后,分别采用光镜、TUNEL染色、免疫组化、原位杂交、图像分析等方法进行凋亡指数、bcl-2蛋白及mRNA表达水平的检测.结果:HMBA诱导的MEC-1细胞凋亡指数为68.5%,明显高于对照组和5-FU组(P＜0.01)bcl-2蛋白及mRNA的表达强度均显著高于其它组(P＜0.01).结论:HMBA对人粘液表皮样癌MEC-1细胞具有明显的诱导凋亡作用,其作用机制可能与减弱了凋亡相关基因bcl-2的负调控作用有关.
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格列卫与六亚甲基二乙酰胺对K562细胞增殖和凋亡的影响
目的: 研究格列卫和六亚甲基二乙酰胺(HMBA)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及周期蛋白表达的影响. 方法: MTT法观察细胞生长指数和细胞存活率,流式细胞仪、电镜检测细胞周期和凋亡,半定量RT-PCR检测bcr-abl基因的表达,Western blotting检测蛋白表达. 结果: 联合应用两种药物后细胞存活率明显下降,凋亡比例略下降,细胞周期阻滞于G0/G1期,cyclinD1、cyclinE、cyclinA、CDK4、c-myc蛋白表达下调. 结论: 两种药物应用后出现细胞存活率下降、细胞周期阻滞、周期蛋白表达下调、凋亡比例下降,联合作用对细胞的增殖抑制具有协同作用,进入凋亡途径细胞减少.
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六亚甲基二乙酰胺对粘液表皮样癌细胞增殖的影响
目的探讨分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺(HMBA)对人粘液表皮样癌细胞的增殖抑制作用.方法用2mmol/L HMBA对培养的粘液表皮样癌细胞体外诱导后,分别采用MTT比色试验、光学显微镜、免疫组织化学、图像分析等方法对处理与未处理细胞的增殖活性进行检测.结果 MTT比色试验显示,HMBA处理的粘液表皮样癌细胞较未处理的细胞增殖活性明显降低.增殖细胞核抗原(PCNA)的表达HMBA处理组明显低干对照组(P＜0.01).结论 HMBA能够明显抑制粘液表皮样癌细胞的增殖.
