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H3K27的三甲基化蛋白在初治弥漫大B细胞淋巴瘤的表达及对预后的影响
目的:探讨H3 K27 me3在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达及对预后的影响.方法:收集福建省肿瘤医院102例初治DLBCL石蜡标本,利用TMA技术制成组织芯片,免疫组织化学方法检测H3 K27 me3等蛋白的表达,收集临床数据和随访信息,用Kaplan-Meier法分析治疗水平,用Cox比例风险模型分析预后因素,比较不同表达与患者临床病例特征及预后关系.结果:DLBCL组织芯片位点完整.H3 K27 me3高表达者占59.8％,与老年(＞ 60岁)、ECOG≥2、侵犯结外病灶数目≥2、高LDH、IPI高-中风险组相关.H3K27me3高表达组治疗完全缓解(CR)率和总有效(OR)率均低于低表达组,分别为20％ vs 57.5％和41.8％ vs90％(P＜0.001);高表达组中位生存时间21.5个月,较低表达组中位生存期明显缩短(P ＜0.0001).COX多因素分析显示,H3 K27 me3高表达是DLBCL预后不良的危险因素(P =0.007).结论:TMA技术可用于DLBCL组织芯片构建,部分DLBCL存在H3 K27 me3高表达.该类型患者对治疗反应差,生存期短,检测H3K27me3蛋白表达对预测DLBCL预后具有一定临床价值.
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H3K27me3和EZH2在弥漫大B细胞淋巴瘤疗效预测中的意义
目的:探讨H3K27me3及其甲基转移酶EZH2在对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)近期疗效和远期预后的预测意义.方法:收集福建省肿瘤医院102例初治DLBCL石蜡标本,利用TMA技术已制成的组织芯片,应用免疫组织化学方法检测H3K27me3、EZH2、BCL-2等蛋白表达,收集临床治疗后评价情况和随访信息,并结合组织芯片检测H3K27me3、EZH2、BCL-2表达情况,生存分析应用Kaplan-Meier法,Pearson相关性分析EZH2与H3K27me3表达及BCL-2的相关性,spearman相关分析上述指标与不同疗效间的相关性,比较EZH2、H3K27 me3表达及两者共表达与患者疗效及预后关系.结果:EZH2高表达者占61.8％,与H3K27me3及BCL-2蛋白高表达均正相关.H3 K27 me3高表达及H3K27me3/EZH2共表达组完全缓解(CR)和总有效(OR)率均低于低表达组(P＜0.001),OS、PFS均差于低表达组(P ＜0.001);在RCHOP组中,EZH2低表达者CR和OR率均高于高表达者(P=0.003,P=0.019),OS和PFS均优于高表达者.结论:在部分DLBCL存在EZH2高表达及H3 K27me3/EZH2共表达,该类型治疗反应差,生存期短.EZH2低表达患者群体使用RCHOP方案的近期疗效及远期生存率较高表达者有改善.
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骨肉瘤细胞和组织H3K27me3表达与临床病理特征相关性研究
目的 组蛋白H3K27三甲基化(H3K27me3)在肿瘤发生发展过程中起着重要作用,研究发现H3K27me3在肝癌和前列腺癌等恶性肿瘤中的表达和临床病理特征存在相关性,但其在骨肉瘤中的研究相对较少.本研究分析H3K27me3在骨肉瘤细胞和组织中的表达及其与临床病理的关系,并探讨H3K27me3在骨肉瘤发生和发展中的作用和意义.方法 所有切片均来自于河北医科大学第四医院骨科2005-01-01-2011 01-01手术切除的标本.采用蛋白印迹法检测骨肉瘤MG-63、U2-OS、Sa-OS细胞系及hFOB1.19成骨细胞中H3K27me3表达的水平差异;采用免疫组织化学染色方法检测53例骨肉瘤组织及16例骨软骨瘤组织中H3K27me3的表达水平.KaplawMeier分析比较H3K27me3高表达和低表达患者生存率之间的差异.并应用Cox回归模型分析其表达水平对预后影响.结果 hFOB1.19、MG-63、U2-OS和Sa-OS中H3K27me3蛋白表达水平分别为0.37±0.06、0.86±0.06、0.79±0.07和0.83±0.05,与hFOB1.19细胞中H3K27me3表达相比,3组骨肉瘤细胞系中H3K27me3蛋白表达水平均显著升高,P=0.023;与骨软骨瘤组织相比(56.3％),H3K27me3在骨肉瘤组织中高表达(84.9％),二者差异有统计学意义(P＜0.001),并与肿瘤大小、肺转移、Enneking分期和生存率有关,P值分别为0.037、0.020、0.023和0.046.且其表达水平与患者生存期显著相关,P=0.012.结论 H3K27me3在骨肉瘤细胞及骨肉瘤组织中呈高表达,并与肿瘤的临床病理特征相关,可能会是骨肉瘤患者重要的预后因子及治疗靶点.
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EZH2 shRNA对肾癌ACHN细胞增殖、凋亡及mTOR信号通路的影响
目的 探讨干扰沉默EZH2基因对肾癌ACHN细胞细胞株的增殖、凋亡及mTOR信号通路的影响.方法 设计针对EZH2基因干扰RNA(shRNA),经脂质体将转染EZH2 shRNA入肾癌ACHN细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,TUNEL检测细胞凋亡的变化,Western blot检测组蛋白H3K27三甲基化水平(H3K27me3),凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Procaspase-3及mTOR信号通路蛋白mTOR、 磷酸化mTOR蛋白(p-mTOR)、 磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶(phosphorylation P70 ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K)的变化.结果 EZH2 shRNA转染ACHN细胞48 h后,EZH2的mRNA和蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),EZH2 shRNA组细胞增殖率明显低于Neg shRNA组和Control组(P<0.05),EZH2 shRNA组细胞的凋亡率为(45.57±5.26)％,而Neg shRNA组和Control组分别为(3.24±1.37)％、(1.65±0.94)％,差异有统计学意义(F=48.62,P<0.05).促进凋亡蛋白Bax表达增强,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达减弱,凋亡执行蛋白前体Procaspase3减少.H3K27me3水平较Control组明显下降,而检测mTOR通路蛋白发现mTOR总蛋白未见明显下降,但是活性形式的磷酸化p-mTOR、p-P70S6K表达下降.结论 干扰沉默EZH2基因可抑制肾癌ACHN细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是调节组蛋白H3K27me3水平变化,特异性抑制mTOR信号通路的活性.
关键词： EZH2 H3K27me3 肾癌 RNA干扰mTOR信号通路 -
H3K27三甲基化蛋白可作为MPNST的重要诊断标记物
目的:探讨组蛋白3赖氨酸27位点的三甲基化(H3K27me3)在恶性周围神经鞘瘤(MPNST)中的表达及对预后的影响.方法:收集恶性周围神经鞘瘤病理组织标本43例,经福尔马林固定,石蜡包埋后,利用组织芯片技术(TMA)制成组织芯片,免疫组织化学方法检测H3K27me3等蛋白的表达,根据临床数据和随访信息,运用SPSS 19.0统计软件进行分析比较不同H3K27me3表达水平与患者临床病理特征之间的关系.结果:MPNST组织芯片位点完整.H3K27me3表达缺失组约占65.11％,其中完全缺失组占39.53％,部分缺失组约占25.58％,即以H3K27me3表达缺失为诊断依据则MPNST的检出率可达65.11％,且与原诊断一致;在39例散发病例样本中有43.58％完全缺失、28.20％部分缺失,4例NF1相关样本100％保留表达,即在非NF1相关的MPNST中检出率可达71.78％.结论:检测H3K27me3的表达水平对MPNST的诊断具有良好的灵敏性和特异性,特别是在除外NF1相关临床背景的MPNST前期诊断中具有重要意义,有望成为早期诊断散发型MPNST的生物学标记物.
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腹膜后恶性外周神经鞘膜瘤13例临床病理分析
目的 探讨腹膜后恶性外周神经鞘膜瘤( malignant peripheral nerve sheath tumors, MPNST)的临床病理学特征,及H3K27me3在MPNST中的表达.方法 回顾性分析13例MPNST的临床病理特征及预后情况;应用免疫组化法检测MPNST、滑膜肉瘤、去分化脂肪肉瘤及平滑肌肉瘤中H3K27me3的表达,并复习相关文献.结果 13例MPNST均为高级别,肿瘤平均直径20 cm;2年生存率约60% ;5年生存率约30% ;与NF-1相关型及散发型相比,放疗( radiation therapy, RT)相关型具有较差的预后(P＜0. 05);复发及远处转移患者具有较差的预后(P＜0. 05);年龄对患者生存率无明显影响(P＞0. 05).免疫组化结果显示13例MPNST中11例H3K27me3表达缺失;且H3K27me3在MPNST中的表达与在滑膜肉瘤、去分化脂肪肉瘤及平滑肌肉瘤中的表达相比差异有统计学意义(P＜0. 05).结论 腹膜后MPNST以高级别常见,肿瘤体积相对较大,预后较差;RT相关型、复发及远处转移是影响疾病生存率的重要因素;H3K27me3缺失更常见于高级别MPNST,可能是MPNST的有效标志物.
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H3K27me3聚集MEG3 lncRNA启动子通过MDM2/p53途径诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡逃逸
目的 从组蛋白甲基化与长链非编码 RNA ( ln-cRNA)相互作用角度探讨多发性骨髓瘤( MM)细胞凋亡逃逸的具体机制.方法 MTT法检测细胞增殖活性;Annex-inV-FITC/PI双标流式细胞术检测下调组蛋白H3第27位赖氨酸上三甲基化H3K27me3 的表达是否可以诱导多发性骨髓瘤细胞株—RPMI8226 细胞凋亡; RT-PCR 法检测 RP-MI8226细胞中人母系表达基因( MEG3) lncRNA及鼠双微体基因 2 ( MDM2 )的 mRNA 表达; Western blot 检测 RP-MI8226 细胞中 Zeste 基因增强子同源物 2 ( EZH2 )、H3K27me3、MDM2 及 p53 蛋白表达; ChIP Real -time PCR检测RPMI8226细胞中 H3K27me3 的结合位点.结果 在RPMI8226 细胞中,下调 H3K27me3 可诱导细胞凋亡;H3K27me3可直接结合于 MEG3lncRNA 启动子; RPMI8226细胞中抑制了 H3K27me3 可上调 MEG3lncRNA 表达; RP-MI8226经MEG3lncRNA 小干扰 RNA ( MEG3lncRNA -siR-NA)干预下调MEG3lncRNA时,细胞内MDM2 mRNA水平明显升高,并诱导 MDM2 蛋白表达.给予 MDM2 拮抗剂后, Ub-p53 表达降低, p53 降解被抑制.结论 MM 中H3K27me3结合MEG3 lncRNA启动子,MEG3lncRNA启动子H3K27me3高表达导致MEG3 lncRNA表达缺失. MEG3 ln-cRNA表达缺失解除MDM2的抑制, MDM2与p53直接结合介导p53泛素化,促使p53降解,细胞凋亡逃逸.
关键词： H3K27me3 MEG3 lncRNA Mdm2 多发性骨髓瘤 凋亡 -
Zeste基因增强子同源物2抑制剂GSK126促进骨髓间充质干细胞成软骨分化
目的 观察Zeste基因增强子同源物2(EZH2)选择性抑制剂GSK126对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化的影响.方法 体外分离培养BMSCs,取第3代细胞进行实验.噻唑蓝(MTT)检测确定GSK126的适浓度.将细胞消化、悬浮后,以5×106/ml的细胞密度进行高密度培养,用含有或不含GSK126的软骨诱导液诱导培养3周.免疫组织化学、甲苯胺蓝染色检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖的表达.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖和性别决定区Y框蛋白9 (SOX9) mRNA的表达.Westem blot检测H3K27me3的蛋白含量.结果 5μmol/LGSK126无明显细胞毒作用,被选为本实验适浓度.组织学染色显示实验组微团中的细胞体积较对照组稍大,细胞密度稍低.两组微团均有Ⅱ型胶原、蛋白多糖的合成与分泌,且实验组的表达为强烈,实验组Ⅱ型胶原吸光度(A)值为0.3685±0.0405,对照组A值为0.1322±0.021 1.Real-timePCR检测显示,GSK126干预3周后实验组Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX9基因的表达量明显高于对照组(P＜0.01).Western blot检测显示对照组H3 K27me3蛋白水平显著高于实验组,GSK126的干预使得H3 K27 me3含量明显降低,实验组A值为0.3265 ±0.0302,对照组A值为0.6742±0.0562.结论 GSK126通过降低细胞内H3K27me3蛋白水平,有效地促进BMSCs成软骨方向分化.
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EZH2和H3K27me3在食管鳞状细胞癌中的表达及意义
目的 分析EZH2和H3K27me3在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及与食管鳞状细胞癌临床病理指标之间的关系,并评价其表达对食管鳞状细胞癌患者预后的意义.方法 利用免疫组织化学法检测65例ESCC患者癌组织及相应的癌旁组织中EZH2及H3K27me3的蛋白表达,分析两者表达与ESCC患者临床病理学指标之间的相关性,并分析两者之间表达的相关性.利用Kaplan-Meier方法及Log rank检验分析两者表达与食管癌生存率之间的关系.结果 癌旁组织中EZH2和H3K27me3蛋白阳性表达率分别为44.6％和26.2％,ESCC组织中分别为70.8％和47.7％,EZH2和H3K27me3蛋白表达均与ESCC患者的组织学分级及淋巴结转移状态呈正相关关系,且EZH2和H3K27me3蛋白表达之间存在正相关关系.EZH2和H3K27me3表达阳性的ESCC患者五年总生存率均明显低于EZH2和H3K27me3表达阴性的患者;EZH2和H3K27me3双阳性的ESCC患者五年总生存率明显低于EZH2和H3K27me3单阳性和双阴性的ESCC患者.Cox回归结果显示,淋巴结转移、组织学分级、EZH2和H3K27me3表达是ESCC患者的独立预后因素.结论 EZH2和H3K27me3在ESCC中均高表达,并与ESCC患者的组织学分级和淋巴结转移状态相关,可能是ESCC患者的不良预后因子.
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H3K27甲基化与EZH2在B细胞非霍奇金淋巴瘤中表观遗传调控的研究进展
异常的组蛋白修饰与DNA甲基化是表观遗传学研究的重要领域,两者相互作用可导致特定基因的转录激活或抑制.H3K27的甲基化水平及其甲基转移酶EZH2可能与B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-cell NHL)的特殊分型及不良预后密切相关.本文着重介绍H3K27me3与EZH2在B细胞非霍奇金淋巴瘤中的发生和发展过程的作用及相应机制.
关键词： B细胞非霍奇金淋巴瘤 H3K27me3 EZH2 DNA甲基化 -
丘脑多级别肿瘤K27M-H3.3型突变对H3K27me3蛋白表达的影响及其与预后的相关性
目的:明确K27M-H3.3型突变对H3K27me3蛋白表达的影响,探讨丘脑多级别胶质瘤H3F3A基因 K27M-H3.3型突变与患者的预后相关性.方法:整理并分析2013年1月至2016年12月经术后病理证实的24例丘脑胶质瘤的临床资料,包括性别、年龄、发病年龄、病程、首发症状、临床表现、影像学资料、病理分型等,记录各病例总生存期及无进展生存期.将患者分为实验组(K27M-H3.3型突变阳性)及对照组(K27M-H3.3型突变阴性).采用H3K27me3抗体免疫组织化学后复染,观察 H3K27me3蛋白在肿瘤组织中的表达情况并摄片.采用Kaplan-Meier统计方法分析两组患者预后差异性.结果:11例K27M-H3.3型突变阳性患者肿瘤组织切片均表现出明显的H3K27me3染色细胞减少及大片染色缺失区域.其中少部分切片在染色缺失区域中呈现局部零星环状及带状染色阳性,为血管内皮细胞及成纤维细胞染色,并非肿瘤细胞.突变阴性者H3K27me3核染色极其显著,未见染色细胞减少及染色缺失区域.Kaplan-Meier分析、log-rank检验提示实验组与对照组总生存期和无进展生存期差异无统计学意义(分别为P=0.335与P=0.097).结论:K27M-H3.3型突变可明显抑制 H3组蛋白第27位氨基酸三甲基化,造成H3K27me3蛋白表达减少,H3F3A基因H3.3K27M突变与预后关系有待进一步研究.
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醒脑净注射液改善新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制研究
目的:探讨醒脑静注射液治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制.方法:建立新生儿缺氧缺血性损伤新生大鼠模型,将动物随机分为3组:假手术组、模型组和醒脑静组,每组24只.在不同时间点,收集各组脑组织,采用干湿质量法测定大鼠脑组织含水量,通过染色质免疫共沉淀及实时荧光定量PCR检测和比较各组脑组织HIF-1α在VEGF基因启动子的结合水平,以及VEGF启动子组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化(H3 K27 me3)和组蛋白H3赖氨酸4三甲基化(H3K4me3)的富集水平.结果:在各时间点,醒脑静治疗组HIF-1α结合在VEGF启动子上的水平较模型组均显著提高(P＜0.05);醒脑静组VEGF启动子上H3K27 me3富集水平较模型组显著降低(P＜0.05),而H3K4me3富集水平显著升高(P＜0.05).结论:醒脑静注射液治疗HIBD的机制可能与促进HIF-1α结合到VEGF启动子上,促进VEGF的表达,同时改变VEGF启动子上H3K27me3和H3 K4me3富集水平有关.
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启动子区H3K27me3修饰异常促使系统性红斑狼疮患者CD4+T细胞CREMα过表达
目的 探讨SLE中CREMα表达升高的原因.方法 分离5名正常对照和5名SLE患者的CD4+T细胞,用染色质免疫沉淀(ChIP)微阵列法对各种基因启动子区组蛋白H3赖氨酸27三甲基化(H3K27me3)的水平进行分析.随后分离30名正常对照和30名SLE患者的CD4+T细胞,用ChIP结合实时定量PCR检测CREMα启动子区H3K27me3、H3K27去甲基化酶JMJD3和UTX、H3K27甲基转移酶EZH2的水平,采用实时定量RT-PCR检测CREMα mRNA水平.结果 SLE CD4+T细胞的CREMα启动子区H3K27me3水平是正常对照的0.23倍.随后通过ChIP结合实时定量PCR,我们证实了SLE患者CD4+T细胞CREMα启动子区H3K27me3水平显著降低(P<0.001),且与CREMα mRNA水平呈显著负相关(P<0.001).该区的JMJD3水平显著升高(P<0.001),且与H3K27me3水平呈负相关(P<0.001),与CREMα mRNA水平呈正相关(P<0.001).而UTX(P=0.172)及EZH2 (P=0.281)水平则与对照组无明显差异.结论 SLE CD4+T细胞CREMα启动子区JMJD3增多,导致该区H3K27me3水平降低,结果促使CREMα过表达,终引起SLE的发病.
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雷公藤红素抑制人喉癌Hep-2细胞增殖并诱导其凋亡
目的 研究雷公藤红素对人喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法 以不同浓度、不同时间的雷公藤红素处理体外培养的人喉癌Hep-2细胞,采用锥虫蓝(台盼蓝)染色、CCK-8和结晶紫染色法检测其对细胞增殖的影响;DAPI荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测EZH2、H3K27me3的蛋白表达变化.结果 雷公藤红素能够抑制喉癌Hep-2细胞的增殖且呈时间与剂量依赖性,48h后其IC50为(3.19±0.83)μmol/L;与对照组相比,5μmol/L的雷公藤红素作用24h后Hep-2凋亡率显著增加(t=-11.32,P<0.05),EZH2、H3K27me3蛋白表达水平下降.结论 雷公藤红素能显著抑制人喉癌Hep-2细胞的增殖并诱导其凋亡,可能是通过下调EZH2及下游靶基因H3K27me3从而发挥作用.
