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H3 K27 me3去甲基化酶Jmjd3调节胎鼠肺上皮细胞增殖和分化
目的：分析H3K27me3特异去甲基化酶Jmjd3（KDM6B）在胎鼠肺生长发育过程中的作用。方法 HE染色、PAS染色和免疫组化方法检测E19.5 Jmjd3基因敲除胎鼠肺生长发育情况。结果与野生型（ Jmjd3＋／＋）胚胎比较，杂合型敲除（ Jmjd3＋／－）胚胎的肺发育稍差，但纯合型敲除（ Jmjd3－／－）胚胎肺发育明显不良，支气管的纤毛上皮细胞和Clara细胞以及肺泡的Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞分化不良。 Jmjd3－／－胚胎肺上皮细胞增殖指数高于野生型和Jmjd3＋／－组，未发现Jmjd3－／－胚胎肺上皮细胞凋亡异常。结论 Jmjd3对胎鼠肺上皮细胞的增殖和分化具有重要调节作用。
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组蛋白去甲基化酶JMJD3在小鼠牙发育中的表达
目的 研究组蛋白去甲基化酶JMJD3在牙发育过程中的表达.方法 采用免疫组织化学方法观察小鼠胚胎E14~18天及出生后P1~P3磨牙牙胚中组蛋白去甲基化酶JMJD3的表达.结果 JMJD3表达于细胞核内,包括上皮性细胞和间充质细胞.在小鼠磨牙牙胚发育的蕾状期(E14)和帽状期(E16),JMJD3在牙蕾上皮,成釉器内釉细胞、外釉细胞、星网状细胞中弱表达.在小鼠磨牙牙胚发育的钟状期(E18),JMJD3在成釉器的外釉细胞层,内釉细胞层,中间层、星网状层及邻近间充质细胞内呈强阳性表达.在小鼠磨牙牙胚发育钟状晚期(P3), JMJD3在成釉细胞、成牙本质细胞及邻近间充质细胞呈强阳性表达.结论 JMJD3在小鼠牙发育过程中呈时空特异性表达,提示JMJD3参与小鼠磨牙的发育.
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组蛋白去甲基化酶JMJD3与UTX在Meckel's软骨发育过程中的表达
目的 研究组蛋白去甲基化酶JMJD3与UTX在Meckel's软骨发育过程中的表达.方法 采用免疫组织化学方法观察小鼠胚胎期Meckel's软骨及其周围细胞凝聚区组蛋白去甲基化酶JMJD3与UTX的表达.结果 JMJD3与UTX均表达于细胞核内.JMJD3在软骨细胞内随着软骨细胞的发育成熟其表达由强变弱;UTX表达则是由弱变强.在Meckel's软骨周围细胞凝聚区,小鼠胚胎初期,JMJD3及UTX弱表达;细胞分化期JMJD3与UTX表达增强.结论 JMJD3及UTX参与Meckel's软骨细胞增殖、分化的发育过程,推测JMJD3及UTX参与下颌骨的发育.
关键词： 组蛋白去甲基化酶 Jmjd3 UTX Meckel's软骨 -
Jmjd3基因慢病毒干扰载体的构建及其去H3K27三甲基化作用研究
目的 构建针对小鼠Jmjd3基因的RNAi慢病毒载体,感染小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,mBM-MSCs)后观察其对Jmjd3基因表达的影响及对组蛋白H3K27me3的去甲基化作用.方法 根据Jmjd3mRNA序列设计并合成3对shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并连接入PLL3.7慢病毒干扰载体,双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,重组质粒与其他3种辅助包装质粒(pRsv-REV,pMDlg-pRRE,pMD2G)共转染293T细胞生产病毒液,病毒液感染mBM-MSCs,荧光定量PCR和Western blot检测目的基因Jmjd3的表达,筛选出有效的干扰序列.Western blot检测组蛋白H3 K27 me3的表达量,分析Jmjd3的生物学功能.结果 双酶切和测序结果证实Jmjd3基因shRNA序列正确插入慢病毒载体.荧光定量PCR和Western blot结果显示,感染后Jmjd3表达显著下调,与空载体对照组相比,Jmjd3-shRNA1组、Jmjd3-shRNA2组和Jmjd3-shRNA3组分别下调88.9％ (P ＜0.001)、67.9％ (P ＜0.001)和72.4％ (P ＜0.001),Jmjd3-shRNA1组为佳干扰组.Western blot结果显示干扰Jmjd3之后,H3K27me3的表达较空载体对照组升高.结论 成功构建了针对小鼠Jmjd3基因的慢病毒干扰载体,并能有效抑制mBM-MSCs中Jmjd3基因的表达,Jmjd3具有组蛋白H3K27me3的去甲基化作用.
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组蛋白去甲基化酶JMJD3对骨髓基质干细胞干性特征及体外成骨分化的影响
目的：探讨组蛋白去甲基化酶JMJD3对骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）体外多潜能性及成骨分化的生物学调控作用。方法：用离心和贴壁培养相结合方法分离培养大鼠四肢骨BMSCs，分别用含JMJD3-shRNA的绿色荧光蛋白（GFP）慢病毒干扰载体（实验组）及含无关序列的GFP慢病毒载体（对照组）转染BMSCs，Western blot方法检测两组BMSCs中组蛋白H3第27位赖氨酸上三甲基化（H3K27me3）及干细胞多潜能转录因子Oct4、Nanog、Sox2的表达，并比较两组细胞的克隆形成率；实时定量RT-PCR、Western blot、茜素红染色检测两组细胞的体外成骨分化能力。结果：与对照组相比，实验组BMSCs的H3K27me3表达水平升高，具有更强的克隆形成能力，且表达更强的Oct4、Nanog、Sox2等多潜能因子；体外成骨诱导7 d后，实验组BMSCs中RUNX2等成骨分化基因表达下降，诱导14 d后，钙结节形成较对照组少。结论：抑制JMJD3表达可增强BMSCs的干性特征，抑制其成骨分化。
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启动子区H3K27me3修饰异常促使系统性红斑狼疮患者CD4+T细胞CREMα过表达
目的 探讨SLE中CREMα表达升高的原因.方法 分离5名正常对照和5名SLE患者的CD4+T细胞,用染色质免疫沉淀(ChIP)微阵列法对各种基因启动子区组蛋白H3赖氨酸27三甲基化(H3K27me3)的水平进行分析.随后分离30名正常对照和30名SLE患者的CD4+T细胞,用ChIP结合实时定量PCR检测CREMα启动子区H3K27me3、H3K27去甲基化酶JMJD3和UTX、H3K27甲基转移酶EZH2的水平,采用实时定量RT-PCR检测CREMα mRNA水平.结果 SLE CD4+T细胞的CREMα启动子区H3K27me3水平是正常对照的0.23倍.随后通过ChIP结合实时定量PCR,我们证实了SLE患者CD4+T细胞CREMα启动子区H3K27me3水平显著降低(P<0.001),且与CREMα mRNA水平呈显著负相关(P<0.001).该区的JMJD3水平显著升高(P<0.001),且与H3K27me3水平呈负相关(P<0.001),与CREMα mRNA水平呈正相关(P<0.001).而UTX(P=0.172)及EZH2 (P=0.281)水平则与对照组无明显差异.结论 SLE CD4+T细胞CREMα启动子区JMJD3增多,导致该区H3K27me3水平降低,结果促使CREMα过表达,终引起SLE的发病.
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组蛋白去甲基化酶JMJD3对胃癌细胞增殖凋亡的影响
目的:研究组蛋白去甲基化酶JMJD3在人胃癌中的表达并对胃癌细胞增殖及凋亡的影响.方法:通过免疫组化分析了40对胃癌及癌旁组织中JMJD3的表达.通过重组质粒在胃癌MGC-803细胞中过表达JMJD3,利用CCK-8及流式细胞仪分别探索JMJD3对于胃癌细胞增殖及凋亡能力的影响.结果:胃癌组织中的JMJD3表达明显低于癌旁组织(P＜0.05);胃癌组织JMJD3蛋白阴性表达与较晚的TNM分期(Ⅲ+Ⅳ期,P＜ 0.05)具有相关性.过表达JMJD3能够显著抑制MGC-803细胞的增殖并促进细胞凋亡(P＜0.05).结论:JMJD3在胃癌中低表达,且JMJD3对胃癌细胞的增殖具有抑制作用而对细胞凋亡具有促进作用.
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组蛋白去甲基化酶JMJD3对乳腺癌干细胞的影响
目的 探索组蛋白去甲基化酶JMJD3对乳腺癌于细胞(BCSCs)的影响.方法 采用改良后的无血清悬浮培养肿瘤干细胞的方法从乳腺癌MCF-7细胞系中分离扩增BCSCs;通过流式侧群细胞分选和免疫缺陷裸鼠腋下接种的方法检测BCSCs的生物学特性和致瘤性.采用Western Blot研究MCF-7及BCSCs中JMJD3表达的差异;采用CCK-8法检测JMJD3促进剂U0126及抑制剂GSK-J1对MCF-7增殖的影响;通过流式细胞侧群分选,检测GSK-J1、U0126对MCF-7中BCSCs比例的影响;采用Western Blot法研究GSK-J1、U0126对BCSCs中JMJD3蛋白表达的影响.结果 改良后的无血清悬浮培养方法可成功地从MCF-7细胞系中分离并富集BCSCs;与MCF-7比较,BCSCs呈现出高致瘤性、JMJD3蛋白低表达性;U0126可抑制MCF-7的增殖,并降低MCF-7中BCSCs的比例,促进BCSCs中JMJD3的表达,而GSK-J1则呈现出相反的作用.结论 JMJD3可抑制乳腺癌细胞的增殖,这种抑制作用可能与减少MCF-7中干细胞的比例有关.
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胶质瘤细胞组蛋白去甲基化酶JMJD3表达降低
目的 检测和分析组蛋白去甲基化酶含十字形结构域蛋白3(JMJD3)在胶质瘸及瘤旁脑组织中的表达.方法 用组织芯片筛选出JMJD3表达阳性的胶质瘤组织,选取50例相关胶质瘤患者的石蜡标本,采用免疫组化SP法检测JMJD3在相关胶质瘤组织中的表达与定位以及与瘤旁组织中表达的差异,分析JMJD3与胶质瘤的相关性.结果 通过组织芯片筛选,发现JMJD3在正常少突胶质细胞中有表达.在50例胶质瘤患者的石蜡标本中,15例标本肿瘤组织为阳性,35例瘤旁组织为阳性.结论 与瘤旁脑组织相比,胶质瘤JMJD3的表达降低.
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Jmjd3和Ezh2酶活性抑制剂对人间充质干细胞成脂分化的影响及机制研究
目的 研究EZH2和JMJD3对人脂肪间充质干细胞成脂分化的影响及可能机制.方法 体外培养人脂肪来源间充质干细胞并进行诱导分化.分化过程中分别加入EZH2酶活性抑制剂GSK126(6μM)和JMJD3酶活性抑制剂GSKJ4(20μM),对照组加入DMSO.采用Realtime PCR方法检测脂肪细胞分化基因PPARγ、FABP4和ADIPOQ;棕色化标志基因UCP1、PRDM16和CIDEA,以及米色脂肪独有的标志基因CD137、TMEM26和TBX1,并计算各组与对照组的相对表达量.采用Western Blot法检测H3K27me3、UCP1、JAK2、STAT3和pSTST3的蛋白表达量.结果 GSK126组的脂滴形成略减少,GSKJ4组的脂滴形成明显减少.GSK126组的H3K27me3含量减少,GSKJ4组的H3K27me3含量增加;GSK126组的UCP1、PRDM16、TMEM26和JAK2基因表达均明显增加(P<0.05);GSKJ4组的PPARγ、UCP1和JAK2的基因表达量均明显降低(P<0.05);GSK126组的UCP1蛋白表达增加而GSKJ4组UCP1蛋白表达减少.GSK126组的JAK2和pSTST3均增加,GSKJ4组的JAK2和pSTST3蛋白表达均减少.结论 EZH2酶活性抑制剂GSK126促进人MSC向棕色或米色脂肪细胞分化.JMJD3酶活性抑制剂GSKJ4抑制人MSC向棕色或米色脂肪细胞分化;EZH2和JMJD3的酶活性影响H3K27的三甲基化修饰,可能通过JAK2-STAT信号通路,发挥调控人脂肪细胞分化的作用.
