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兔脂肪来源间充质干细胞的生物表型及其心肌样细胞的分化潜能
目的 鉴定兔脂肪来源间充质干细胞(ADMSCs)的生物学表型及其向心肌细胞分化的潜能.方法 成年兔肩胛区皮下脂肪组织经消化、培养,观察其形态变化.第3代细胞进行CD29、CD34、CD44、CD105免疫细胞化学显色、免疫荧光单标、双标及三标显色.5-氮杂胞苷(5-aza)诱导ADMSCs 7d,免疫组织化学和免疫荧光技术显示肌钙蛋白-Ⅰ(Troponin-Ⅰ)和肌球蛋白重链(MHC)表达.光学显微镜和激光扫描共焦显微镜观察并计数.结果 ADMSCs开始为圆形,后逐渐伸展,呈现形态多样性.90％以上的第3代细胞阳性表达CD29、CD44、CD105,三者共表达于胞质中.CD34阴性表达.CD分子表达阳性的细胞70.59％±1.26％表达Troponin-Ⅰ,71.98％±1.13％表达MHC.结论 90％以上的ADMSCs共表达干细胞表面标记CD29、CD44、CD105,它们具有很强的分化为心肌样细胞的潜能.
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反复呼吸道感染患儿血清免疫球蛋白、IgG亚类及细胞免疫水平分析
目的 探讨小儿反复呼吸道感染(RRTI)的发病机制.方法 选择我科被诊断为反复呼吸道感染的患儿35例,另选正常35例儿童为对照组,检测血清IgG、IgA、IgM及IgG亚类水平；检测CD分子的表达.结果 RRTI组患儿的血清IgG、IgA水平与对照组比较差异无统计学意义,IgM水平低于对照组,RRTI组患儿的血清IgG2和IgG4水平均低于对照组,IgG1、IgG3水平差异无显著性.35例RRTI患儿中IgG亚类缺陷共17例,检出率为48.6％( 17/35).RRTI组患儿的CD3、CD4分子表达水平较对照组明显降低,CD8、CD4/CD8、CD19、CD16+56等表达两组比较无差异.结论 IgG亚类能够比较敏感地反映反复呼吸道感染患儿的体液免疫功能,IgG亚类缺陷的患儿多伴有不同程度的T细胞功能障碍,因此在临床工作中应注意监测患儿血清IgG亚类及各项细胞免疫功能.
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CD分子在反复呼吸道感染患儿机体中的改变
目的：：检测28例RRTI患儿以及26例正常儿童外周血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分含量及CD4+/CD8+比值，以便进一步了解反复呼吸道感染患儿机体免疫功能的改变状态，为临床免疫调节治疗提供客观依据。方法：利用流式细胞仪检测28例RRTI患儿以及26例正常儿童外周血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分含量及CD4+/CD8+比值。结果：28例RRTI患儿外周血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分含量明显低于26例正常对照组儿童的百分含量，差异具有非常显著的意义( t值分别为14.41和30.14，P值均＜0.01）；而C D8+T淋巴细胞的百分含量则高于正常对照组儿童，差异具有显著的意义（t值为19.64，P值＜0.01）；RRTI组CD4+/CD8+比值低于对照组，差异具有显著的意义（t值为45.93，P值＜0.01）。结论：RRTI患儿细胞免疫功能异常，CD4+/CD8+比值失调，提示RRTI患儿机体内T细胞免疫功能紊乱，在积极采取病因治疗的同时，应及时调节其机体的免疫功能状态，提高其免疫能力，这对于防治RRTI具有重要意义。
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新生儿感染时CD分子变化及临床意义
目的探讨不同胎龄新生儿感染时T、B、NK细胞及中性粒细胞表面CD分子变化及临床意义.方法 2004年2～6月复旦大学儿科医院用流式细胞仪检测34例早产儿及33例足月儿CD表达.结果 (1)足月感染组CD3[(76.89±2.52)%]高于足月非感染组[(64.40±5.69)%],早产非感染组[(80.93±9.13)%]高于足月非感染组;早产非感染组CD4[(61.20±2.21)%]高于足月非感染组[(47.60±4.27)%],早产感染组[(53.63±3.23)%]低于早产非感染组;CD8各组间无统计学差异性.(2)CD19各组间无统计学差异性.(3)足月感染组CD56CD16[(5.88±0.62)%]低于非感染组[(13.00±5.31)%],足月非感染组高于早产非感染组[(6.13±1.25)%].(4)足月感染组CD64[(5056.92±1255.58)分子/单位]高于足月非感染组[(2112.60±1157.21)分子/单位],早产感染组[(4619.67±1395.99)分子/单位]高于早产非感染组[(2407.45±1247.16)分子/单位].(5)败血症、肺炎及其它感染组CD64高于非感染组.以CD64大于3000分子/单位为阳性,CD64诊断感染灵敏度为79.6%,特异度为75.1%;以CD64大于2000分子/单位为阳性,CD64诊断感染灵敏度为88.9%,特异度为60%;CRP诊断感染灵敏度为65.3%,特异度为86%.结论早产儿细胞表面CD3、CD4、CD16CD56变化不同于足月儿,可能与早产儿免疫功能低下有关;CD64可能会成为一种新型感染诊断指标.
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系列鼠抗CD分子单克隆抗体轻、重链可变区基因的克隆和序列分析
目的获取系列鼠抗人CD分子单抗的轻链及重链可变区基因并进行克隆和测序.方法采用RT-PCR技术,从WuT3、WuT4、WuTac、WuLCA、WuT9杂交瘤细胞总RNA中分别扩增出轻链和重链可变区基因,进行克隆并作核苷酸序列分析.结果以上几种抗体的轻重链可变区的PCR产物大小均为400bp左右,成功构建了pMD18-T-VL和pMD18-T-VH克隆载体,经限制性酶切分析,其大小与预期结果相符,并按ABI PRISM BigDye系统测序.结论经与Kabat、Blast抗体基因同源数据库比较,所获基因片段均为抗体基因.
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体外诱导培养健康成人外周血单核细胞源树突状细胞
目的 建立在体外从健康成人外周血单核细胞(Mo)诱导培养成熟的树突状细胞(DC)的方法.方法 采用密度梯度离心法分离健康成人外周血中的单个核细胞(PBMC),再以黏附法分离出Mo,加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)体外培养12天,并于培养第6天加入重组人肿瘤坏死因子(rhTNF-α)共同培养,于倒置显微镜下观察细胞的形态,以流式细胞仪检测培养6、9、12天DC表面CD1a、CD83、CD86和MHC-DR的表达水平,用MTT法测定DC刺激同种异体T细胞增殖的能力,进行比较分析.结果 Mo经rhGM-CSF + rhIL-4诱导培养6 d后,细胞成簇,表型为CD1a 53.2%、CD83 13.6%、CD86 65.5%、MHC-DR 75.4%;TNF-α诱导后,即培养第9 d,细胞表型为CD1a 62.1%、CD83 73.5%、CD86 92.3%、MHC-DR 98.4%,激发初始T细胞增殖的能力强.结论 rhGM-CSF + rhIL-4诱导Mo 6 d,可获得大量不成熟的DC,该体系有利于DC扩增;加入TNF-α,培养第9 d,DC成熟度高,适合于临床免疫治疗.
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M-CSF和IL-10对人单核细胞表面分子表达的影响
本文采用流式细胞术检测人外周血单核细胞表面CD14、CD23、CD64、CD11b、CD18、CD29表达,研究巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和白细胞介素(IL)-10对单核细胞炎症效应和免疫效应功能的影响.结果显示,(1)M-CSF诱导单核细胞表面CD14及CD23分子的表达(P＜0.05).IL-10抑制CD23的表达,促进CD64的表达,并协同M-CSF诱导单核细胞CD14的表达,拮抗M-CSF对CD23的诱导作用.M-CSF能协同IL-10对单核细胞CD64的诱导作用;(2)M-CSF能诱导单核细胞表面CD11b及CD18的表达(P＜0.05).结论:M-CSF通过促进单核细胞表面CD11b、CD18、CD14、CD23的表达及协同促进CD64的表达而促进单核细胞粘附、炎性渗出、IgG及IgE依赖的细胞杀伤和吞噬功能,促进单核-巨噬细胞在炎症反应、体液免疫应答效应阶段发挥效应细胞功能.IL-10通过促进CD64的表达,增强体液免疫应答效应阶段单核-巨噬细胞的免疫效应功能,但通过抑制CD23的表达,下调IgE介导的体液免疫效应.
关键词： 巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素10 单核细胞 CD分子 -
反复呼吸道感染患儿血清免疫球蛋白、IgG亚类及细胞免疫水平
目的 探讨反复呼吸道感染(RRTI)与免疫球蛋白、IgG亚类及细胞免疫的关系,为临床治疗反复呼吸道感染提供一定的理论依据.方法 RRTI患儿28例,男18例,女10例,平均年龄(3.70±1.44)岁;对照组30例,男15例,女15例,平均年龄(3.98±1.18)岁.采用免疫散射比浊法检测血清IgG、IgA、IgM及IgG亚类水平;采用流式细胞术检测CD3、CD4、CD8、CD19及CD16+56的表达.结果 RRTI患儿血清IgG、IgA水平与对照组相比差异均无统计学意义(P均>0.05);IgM水平低于对照组(Z=3.149,P<0.01);RRTI患儿血清IgG2和IgG4水平较对照组明显降低(t=2.107,Z=2.916;P均<0.05);RRTI患儿淋巴细胞CD3、CD4较对照组明显降低(t=2.319,2.44,P均<0.05),余CD分子与对照组相比差异无统计学意义(P均>0.05).结论 RRTI患儿存在一定程度的体液免疫和(或)细胞免疫功能紊乱;对RRTI患儿同时检测总IgG、IgG亚类及细胞免疫功能具有重要的临床意义.
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慢性乙型肝炎患者外周血中树突状细胞的分离、纯化与扩增
目的 探讨从慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血中分离、纯化与扩增树突状细胞(DC)的有效方法.方法 分别从健康自愿者(10例,对照组)和CHB患者(10例,实验组)外周血中分离出单核细胞(Mo),然后将实验组的Mo与GM-CSF、IL-4共同培养,于倒置显微镜下观察计数细胞,以流式细胞仪检测培养前、后的DC数量及其表面CD40、CD80、CD86和MHC-DR的表达水平,并与对照组比较.结果 与对照组相比,实验组DC表面CD40、CD80、CD86和MHC-DR表达水平较低(P＜0.01);经GM-CSF、IL-4联合培养5 d后,其Mo中的DC数较培养前明显增多(P＜0.01),且DC表面CD40、CD80、CD86和MHC-DR表达水平较培养前明显增高(P＜0.01),与对照组相比则无明显差异(P＞0.05).结论 GM-CSF、IL-4联合应用能有效地从CHB患者外周血中制备出大量具有功能活性的DC.
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体外受精-胚胎移植患者卵泡液中CD分子的测定
国外Maccio A等报道,卵泡液中存在CD分子[1];但CD分子与妊娠成功率的关系罕见报道.作者测定卵泡液中CD3、CD4、CD8、CD20、CD25百分率的表达,探讨其与所获卵子数、受精率、卵裂率及妊娠成功率的关系.
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支原体肺炎患儿血清中肺表面活性蛋白及CD分子含量的变化及临床意义
目的：探讨肺炎支原体患儿血清中肺表面活性蛋白及CD分子含量的变化及临床意义。方法选择2013年9月至2014年9月间在本院接受住院治疗的168例支原体肺炎患儿作为观察组，另取同期在本院进行疫苗接种的正常儿童151例作为对照组，比较两组儿童的血清肺表面活性蛋白及CD分子含量差异。结果(1)观察组患儿的血清肺表面活性蛋白A、B、C、D含量均明显高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；(2)观察组患儿的血清CD11b、CD4+CD25+Treg水平高于对照组，CD19、CD4、CD4/CD8水平低于对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论支原体肺炎患儿血清肺表面活性蛋白含量增高，CD分子表达紊乱，其水平变化可以指导临床治疗并判断患儿预后。
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冻干红细胞胞膜CD分子的检测与分析
目的 探讨红细胞胞膜CD分子在冻干前、后的变化。方法 使用流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测冻干前、后红细胞胞膜CD35、CD44、CD45、CD47和CD71分子数量。结果 冷冻前、冻于复水洗涤后红细胞胞膜CD35、CD44、CD45、CD47和CD71分子数量的差异不存在统计学意义(P＞0.05)。结论红细胞的冻干复水洗涤不影响红细胞膜CD分子数量。
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骨髓基质干细胞培养、鉴定及标记的初步研究
目的:对骨髓基质干细胞的培养方法、鉴定及标记技术进行初步研究.方法:采用贴壁法培养大鼠骨髓细胞,经反复传代细胞逐渐纯化,以流式细胞术检测细胞表面抗原.以BrdU标记骨髓基质干细胞,将骨髓基质干细胞注入大鼠脑内,2周后取脑作石蜡切片,进行免疫荧光染色.结果:通过贴壁法培养大鼠骨髓细胞可获得较纯化的细胞,并能在体外长期培养,流式细胞术检测显示CD34、 CD31、 CD45阴性,CD90、 CD44、 CD71阳性.BrdU可掺入DNA合成期的骨髓基质干细胞.结论:贴壁法可获得高纯度的骨髓基质干细胞,BrdU可作为骨髓基质干细胞体内示踪的理想标记物.
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膀胱肿瘤细胞培养上清对树突状细胞的形成及功能的影响
目的: 探讨人膀胱肿瘤细胞BIU-87培养上清对树突状细胞(DC)的生成和功能的影响.方法: 分离培养外周血单个核细胞(PBMC)来源的DC, 实验组加入BIU-87细胞的培养上清液, 以正常培养的DC作为对照组, 应用流式细胞术检测在实验组和对照组不同条件下培养的DC上表面标志的表达, 并用改良的MTT比色法检测和对比两组所培养的DC激活同种异体T细胞的能力及其差别.结果: DC与BIU-87细胞的上清液共培养后, CD1a、 CD83及CD86均呈低表达.实验组与对照组相比较, DC的成熟受到抑制, 对同种异体T细胞激活的作用明显降低(P＜0.05).结论: BIU-87细胞的上清液可抑制DC 的生成及相关表面标志的表达, 这可能是导致膀胱肿瘤患者DC 数量减少和功能降低的原因.
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老年慢性阻塞性肺疾病患者T淋巴细胞亚群的临床观察
目的:探讨T淋巴细胞亚群中CD分子在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病中的作用及与病程的关系.方法:随机收集住院老年COPD患者急性发作期和缓解期空腹静脉血43份,健康老年人12份、非老年人20份,分别用流式细胞仪测定DNA含量.结果:健康老年组CD3+ 、CD4+明显下降,与非老年组比较有显著性差异(P＜0.05).老年COPD组急性发作期CD3+ 、CD4+与健康老年组、非老年组、老年COPD组缓解期比较均有显著性差异(P＜0.01),CD8+在各组间均无显著差异性.CD4+/CD8+随患者年龄增大,COPD病情加重,其比值呈下降趋势.结论:老年COPD患者T淋巴细胞亚群CD3+ 、CD4+下降以及CD4+/CD8+比例失调,尤其是急性发作期更为显著,提示老年COPD患者的T淋巴细胞免疫功能低下,因此,老年COPD急性发作期在综合治疗的同时提高患者免疫功能十分重要.
关键词： 慢性阻塞性肺疾病(COPD) 老年 CD分子 T淋巴细胞亚群 -
高原地区慢性阻塞性肺疾病患者CD分子的临床观察
目的:探讨高原地区T淋巴细胞亚群中CD分子在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病中的作用.方法:应用间接荧光免疫法测定居住于2 500m以上的COPD患者急性发作期、缓解期患者(每组20例)和健康对照者(15例)3组静脉血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+百分率.结果:①急性期患者CD3+、CD4+百分率、CD4+/CD8+比值显著降低(P＜0.05),CD8+百分率明显升高(P＜0.05)；②缓解期患者CD3+、CD4+百分率降低(P＜0.05),CD8+细胞百分率略升高、CD4 +/CD8+比值略降低(差别无统计学意义)；③急性期与缓解期相比患者CD3+、CD4+百分率、CD4+／CD8+比值均有降低(P＜0.05),CD8+百分率升高(P＜0.05).结论:慢性阻塞性肺疾病患者急性期和缓解期T细胞亚群中的CD3+、CD4+百分率、CD4+／CD8+比值均降低,CD8+百分率升高.
