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姜黄素对缺氧诱导的人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响
目的 探讨姜黄素对缺氧诱导下人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响及其可能机制.方法 将HepG2细胞分3组:正常对照组、氯化钴(CoCl2)组和CoCl2加10 μmol/L姜黄素组.采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Real-time RT-PCR检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α) mRNA表达,Western blot检测HIF-1α蛋白、E-钙黏蛋白(epithelial-cadherin,E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达.结果 HepG2细胞被CoCl2诱导缺氧后,细胞增殖及迁移能力增强,HIF-1α蛋白表达上调,上皮标志蛋白E-cadherin表达下降而间质标志蛋白Vimentin表达上调,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P <0.05).姜黄素干预缺氧HepG2细胞后,其增殖与迁移能力被明显抑制,同时HIF-1α蛋白表达下降,E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin蛋白表达下降,与CoCl2组比较,差异均有统计学意义(P <0.05).3组HIF-1α mRNA表达比较,差异无统计学意义(P >0.05).结论 缺氧诱导肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力的增强可被姜黄素逆转,可能与姜黄素抑制缺氧诱导的HIF-1α蛋白上调和上皮细胞间充质转化有关.
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僵蚕含药血清对肝癌细胞侵袭能力的影响
目的 探讨僵蚕抗肝癌转移的可能作用机制.方法 10只SD大鼠给予630 mg/100g僵蚕水煎剂溶液灌胃,10只大鼠给予等体积生理盐水灌胃,连续灌胃3天后1h心脏采血,制备大鼠含药血清.将肝癌Hepa1-6细胞分为对照组和实验组,分别给予对照血清和僵蚕含药血清培养.用5-乙炔基-2-脱氧尿苷(EdU)染色法检测各组Hepa1-6细胞染色阳性率判定增殖情况;用Transwell小室法检测各组细胞侵袭能力;设立空白组,采用RT-PCR法检测Hepa1-6细胞上皮细胞间充质转化标志物E-cadherin、N-cadherin mR-NA水平.结果 实验组肝癌细胞Hepa1-6EdU染色阳性率低于对照组,肝癌细胞侵袭数目亦低于对照组(P＜0.01).与空白组比较,对照组E-cadherin mRNA下调,N-cadherinmRNA上调(P＜0.05);与对照组比较,实验组E-cadherin mRNA表达增加,N-cadherin mRNA表达减少(P＜0.05).结论 僵蚕含药血清能抑制肝癌细胞Hepa1-6体外的增殖、侵袭,可能通过减弱上皮细胞间充质转化发挥抑制肝癌转移的作用.
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胆道闭锁中上皮间充质转化机制的探讨
胆道闭锁是婴儿期引起胆汁淤积性黄疸的一种常见疾病,发病原因不清,治疗效果不理想,术后持续肝纤维化是影响其预后的主要原因.近认为上皮细胞间充质转化(EMT)可能是参与胆道闭锁中持续硬化性胆管炎、肝纤维化的一种病理机制,这一过程涉及一系列信号传导通路,其中较为重要的为TGF-β、cadherin、Snail/Slug等,并伴随一系列胚胎期传导通路如Shh信号、Wnt信号、Notch信号通路的激活.
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上皮细胞间充质转化在胚胎发育过程中的研究进展
早期胚胎发育过程中,上皮样细胞与间充质样细胞的形态转变调节了哺乳动物的胚胎发育,参与了胚层分化、神经系统分化、组织器官的形成,决定着胚胎发育成功和完全与否.上皮细胞发生间充质转化由多种环境因素诱导,深入的了解这一过程在胚胎发育中的作用,将为预防和治疗人类遗传性疾病和先天畸形的防治奠定基础.
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肿瘤相关成纤维细胞通过转化生长因子β调节胃癌细胞转移能力的研究
目的:通过研究肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)促进胃癌细胞侵袭迁移的能力,探讨胃癌转移机制.方法:从胃癌组织分离CAF.通过transwell小室模型和Western印迹法检测CAF与胃癌细胞共培养对胃癌细胞侵袭迁移能力、上皮细胞间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的影响.使用ELISA和定量PCR分别检测CAF转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)分泌水平和TGFB mRNA表达水平.进一步通过Western印迹法检测共培养后胃癌细胞中TGF-β信号通路标志物Smad2和磷酸化Smad2的表达水平.使用TGF-β拮抗剂阻断TGF-β信号通路,检测CAF对胃癌细胞EMT及侵袭迁移能力影响.结果:CAF促进MKN28侵袭迁移和发生EMT.CAF的TGF-β1分泌量较高于NF.与CAF共培养后,TGF-β信号通路活化.TGF-β拮抗剂抑制CAF诱导胃癌细胞发生EMT和CAF促胃癌细胞侵袭迁移的能力.结论:CAF通过分泌TGF-β诱导胃癌细胞发生EMT,从而促进了胃癌细胞侵袭能力,可能是胃癌转移的重要机制.
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“人源性”乳腺微环境促进人源性乳腺癌细胞发生上皮细胞间充质转化
目的 研究“人源性”乳腺微环境对人源性乳腺癌细胞生物学活性的调控作用.方法 20只重症联合免疫缺陷小鼠随机均分为“人源性”乳腺微环境小鼠模型组(实验组)和皮下注射小鼠模型组(对照组).取小鼠的乳腺癌原发灶,采用Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,免疫组织化学法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达.结果 与对照组相比,实验组细胞迁移和细胞侵袭数量都明显增加[(29.25±5.17)个vs.(67.14±6.53)个和(63.57±6.54)个vs.(118.29±12.81)个](P＜0.05).两组小鼠原发灶标本的E-cadherin均为阴性,但实验组vimentin 的表达强于对照组.结论 建立的具有“人源性”乳腺微环境的小鼠模型能很好地模拟出人源性乳腺癌细胞上皮细胞间充质转化的过程,是良好的乳腺癌转移研究的在体平台.
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乙酰辅酶A羧化酶2表达下调对高糖培养的人肾小管上皮细胞脂质沉积和间充质转化的影响
目的 探讨乙酰辅酶A羧化酶2(ACC2)表达下调对高糖培养的人肾小管上皮细胞(HKC)脂质沉积及小管上皮细胞间充质转化(EMT)的影响及可能机制.方法 构建ACC2基因特异性的短发夹双链RNA (shRNA)慢病毒感染HKC,将其分为5组:正常糖组(5.5 mmol/L葡萄糖,NG组)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖,HG组)、高渗对照组(5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇,HO组)、ACC2干扰组(感染含ACC2干扰序列慢病毒,ACC2-shR-NA组)、干扰对照组(感染携带绿色萤光蛋白的阴性对照慢病毒,NC-shRNA组),分别处理96 h,Western blotting检测ACC2干扰效率及E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,油红O染色检测细胞内脂质沉积,光镜下观察细胞形态变化.结果 与HO组相比,HG组HKC细胞内脂质沉积增加,细胞拉长,E-cadherin表达减少,α-SMA表达增多(P＜0.05);干扰ACC2基因后,高糖诱导的细胞内脂质沉积减少,细胞形态改善,E-cadherin和α-SMA表达趋于正常.结论 下调ACC2表达可抑制高糖诱导的HKC脂质沉积和小管上皮细胞EMT.
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肿瘤相关巨噬细胞在肝癌上皮细胞间质转型中的作用
目的：检测肿瘤相关巨噬细胞对肝癌细胞迁移能力的作用及机制。方法将肝癌细胞与THP-1细胞来源的巨噬细胞共培养，利用Transwell细胞迁移实验与细胞划痕实验检测肝癌细胞迁移能力的变化情况，观察肝癌细胞形态变化，并用RT-PCR检测上皮细胞间充质转化相关分子E-cadherin与N-cadherin的变化。结果与THP-1细胞来源的巨噬细胞共培养后，肝癌细胞的迁移能力明显增强，由上皮细胞形态向间质细胞形态转变，E-cadherin表达降低，而N-cadherin表达则升高。结论在肝癌中，肿瘤相关巨噬细胞可能通过EMT增强肝癌细胞的迁移能力。
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TGF-β/Smad信号通路诱导肾上皮细胞间充质转化机制的研究进展
上皮细胞间充质转化(EMT)是导致细胞增殖、进而出现肾纤维化的主要原因之一,与肾脏疾病的进展密切相关.转化生长因子β1(TGF-β1)是纤维形成生长因子,是诱导多种肾损伤出现进行性肾衰竭的关键介质.近年研究发现,TGF-β1/Sma和Mad相关蛋白(Smad)信号通路可介导EMT的发生,促进肾纤维化的发生发展.TGF-β/Smad信号通路可通过直接介导、调控整合素连接激酶(ILK)、激活小分子G蛋白(RhoA)、上调纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)等机制,使肾小球发生EMT,在肾脏纤维化过程中起到关键作用.
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同源盒基因 A13在清蛋白超载所致肾小管上皮细胞间充质转分化中的作用
目的：探讨核转录因子同源盒基因 A13（HOXA13）基因在清蛋白（HSA）诱导的肾小管上皮细胞（HKC）间充质转分化中的作用。方法采用 Western blot 印迹分析检测不同水平 HSA（0 g/ L、1 g/ L、5 g/ L、10 g/ L、20 g/ L、30 g/ L）刺激 HKC 48 h，以及20 g/ L HSA 刺激 HKC 不同时间（0 h、12 h、24 h、48 h、72 h）后， HKC 细胞角蛋白（CK）、波形蛋白（Vimentin）和 HOXA13蛋白的表达情况。采用脂质体转染技术上调 HKC 细胞 HOXA13表达后，观察 HSA 刺激后 CK、Vimentin 表达水平的变化。结果1. HSA 以质量浓度和时间依赖方式下调 CK 表达，同时上调 Vimentin 表达。2. HSA 以质量浓度和时间依赖方式下调 HOXA13表达，HSA 水平为5 g/ L、10 g/ L、20 g/ L、30 g/ L 时，HOXA13水平分别为未刺激前的58.24％（ P ＝0.005）、44.73％（ P ＝0.003）、38.40％（P ＝0.033）和24.83％（P ＝0.011）；作用24 h、48 h、72 h 时，HOXA13水平分别为未刺激前的52.00％（P ＝0.023）、46.83％（P ＝0.008）、35.10％（P ＝0.034）。3. HOXA13蛋白表达与 CK 蛋白表达呈正相关（r ＝0.86，P ＝0.005），与 Vimentin 蛋白表达呈负相关（r ＝-0.94，P ＝0.002）。4.基因转染上调 HKC 细胞HOXA13表达后，HSA 下调 CK 表达和上调 Vimentin 表达作用受到明显抑制，抑制程度分别为360.00％（P ＝0.005）和35.34％（P ＝0.005）。结论 HSA 超载所致 HKC 间充质转分化可能通过 HOXA13途径起作用。
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水通道蛋白8对结肠癌细胞侵袭转移的影响
目的 探讨水通道蛋白8(aquaporin 8,AQP8)与结肠癌细胞侵袭转移的关系.方法 应用免疫组组织化学链霉卵白素-过氧化物酶连结(SP)法检查18例发生转移的结肠癌、15例未发生转移的结肠癌原发肿瘤组织中AQP8的表达水平差异;结肠癌细胞系Caco-2细胞中过表达AQP8后聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测上皮细胞间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(钙黏蛋白和波形蛋白);Transwell侵袭实验检测过表达AQP8后细胞的侵袭能力,定量分析穿膜细胞数量.结果 AQP8在发生转移的结肠癌组织中高表达;AQP8能促进EMT的发生,细胞表型由上皮细胞向间质细胞转化;Transwell实验显示,过表达AQP8后肿瘤细胞穿膜数为88.0±7.2,显著高于对照组(51.6±4.0;P＜0.01).结论 AQP8通过促进EMT的发生,促进结肠癌细胞侵袭转移.
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胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3对胆囊癌迁移侵袭的影响
目的 探究胰岛素样生长因子Ⅱ(insulin-like growth factorⅡ,IGF-Ⅱ)mRNA结合蛋白3 (IGF2BP3)对胆囊癌迁移侵袭的作用.方法 应用实时定量PCR (qRT-PCR)法检测23份胆囊癌组织和23份癌旁组织中IGF2BP3的表达水平;在胆囊癌细胞中利用小干扰RNA (siRNA)敲减目的基因IGF2BP3;Transwell迁移实验与带胶Transwell侵袭实验检测敲减IGF2BP3后对胆囊癌细胞迁移侵袭能力的影响;细胞免疫荧光法检测敲减IGF2BP3后上皮细胞间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达水平变化.结果 IGF2BP3在胆囊癌组织中高表达(P＜0.05);与正常胆管上皮细胞比较,5株胆囊癌细胞系中IGF2BP3高表达;敲减IGF2BP3后,胆囊癌细胞系的迁移侵袭能力明显降低(P＜0.0001);敲减IGF2BP3后EMT相关蛋白表达水平下调.结论 IGF2BP3通过促进EMT,从而促进胆囊癌侵袭转移.
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SASH1与肿瘤关系的研究进展
SASH1(SAM-and SH3-domain containing 1)基因自发现以来,被逐渐发现可能具有抑制肿瘤发生发展的功能.目前认为SASH1的基因表达情况与多种肿瘤的生物学行为存在一定相关性.本文就目前SASH1基因与恶性肿瘤发生发展的相关研究进展作一综述.
