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胆道闭锁中上皮间充质转化机制的探讨
胆道闭锁是婴儿期引起胆汁淤积性黄疸的一种常见疾病,发病原因不清,治疗效果不理想,术后持续肝纤维化是影响其预后的主要原因.近认为上皮细胞间充质转化(EMT)可能是参与胆道闭锁中持续硬化性胆管炎、肝纤维化的一种病理机制,这一过程涉及一系列信号传导通路,其中较为重要的为TGF-β、cadherin、Snail/Slug等,并伴随一系列胚胎期传导通路如Shh信号、Wnt信号、Notch信号通路的激活.
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胆道闭锁肝脏组织中SHH信号与上皮间充质转化关系的研究
目的 观察胆道闭锁(BA)肝纤维化发生过程中SHH信号与上皮间充质转化(EMT)过程的关系,探讨胆道闭锁肝纤维化过程中SHH信号在EMT过程中的作用.方法 取经手术证实为BA的患儿(年龄1～3个月)肝脏组织10例,无消化道疾病新生儿(年龄1～3个月)尸检肝脏组织5例做正常对照,应用real time RT-PCR及Western blot等方法检测SHH及反映EMT的指标E-cadhetin、vimentin的表达水平.结果 与正常对照组相比,BA患者肝脏组织中SHH表达水平明显升高,E-cadherin表达无明显变化,而vimentin表达水平明显增高.结论 EMT在胆道闭锁肝纤维化中起重要作用,而SHH表达上调可能促进了这一过程,从而导致肝脏组织持续纤维化.
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初级纤毛介导的Shh信号对大鼠骨髓基质细胞神经元样细胞分化的影响
目的 探讨初级纤毛介导的Sonic hedgehog(Shh)信号对大鼠骨髓基质细胞(MSCs)神经元样细胞分化的影响.方法 全骨髓贴壁法分离培养大鼠MSCs.实验分为白藜芦醇正常培养组、白藜芦醇诱导组、Smoothened (Smo)激动剂SAG组、Smo抑制剂环巴明组,分别给予相应的药物处理.倒置显微镜下观察各组细胞形态;免疫荧光法检测各组细胞初级纤毛及Shh信号通路相关蛋白[Ac-Tu、Patched (Ptc)、Smo、Gli1]的表达;RT-PCR检测各组细胞Smo、Gli1 mRNA的表达;蛋白质印迹法检测各组细胞Smo和Gli1蛋白的表达.结果 正常培养的大鼠MSCs不表达初级纤毛.经过预诱导或饥饿处理24 h后,MSCs表达初级纤毛及Ptc、Smo和Gli1蛋白,其中Smo和Gli1蛋白位于胞质,Ptc蛋白位于初级纤毛.正常培养时,白藜芦醇不能促使Smo移位及MSCs向神经元样细胞分化.当MSCs表达初级纤毛时,白藜芦醇及SAG可使Smo从胞质进入初级纤毛,同时伴随MSCs向神经元样细胞分化及Smo、Gli1 mRNA和蛋白表达水平的增加(P＜0.05);加入抑制剂环巴明后,Smo仍主要表达于胞质,Smo、Gli1 mRNA和蛋白的表达水平降低(P＜0.05),MSCs向神经元样细胞的分化受抑制.结论 MSCs表达初级纤毛并存在Shh信号,初级纤毛介导的Shh信号参与调控大鼠MSCs的神经元样细胞分化.
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环巴胺抑制 Shh 信号对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的：探讨环巴胺靶向抑制Shh信号对乳腺癌细胞增殖、凋亡以及Survivin表达的影响。方法采用荧光定量PCR法检测乳腺癌组织及癌旁正常组织中Shh、PTCH1及GLi1的表达，MTT法检测不同浓度环巴胺对人乳腺癌细胞MCF-7增殖抑制的影响，流式细胞术检测环巴胺对MCF-7细胞凋亡的影响，Western blot检测环巴胺处理前后MCF-7细胞GLi1和Survivin的表达。结果 Shh、PTCH1及GLi1在乳腺癌组织中均呈高表达；不同浓度环巴胺均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡；环巴胺处理后GLi1和Survivin的表达均降低。结论 Shh信号在乳腺癌组织中呈激活状态，靶向抑制Shh信号可抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡，其可能通过抑制Survivin表达发挥作用。
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白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞的神经元样细胞分化伴Shh信号激活
目的 研究Sonic Hedgehog(Shh)信号在白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)分化为神经元样细胞中的作用.方法 采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs.MSCs分为3组,白藜芦醇诱导组:用含白藜芦醇的无血清DMEM/F12诱导MSCs分化；对照组:用无血清DMEM/F12诱导MSCs分化；正常组:不做诱导处理.倒置显微镜下观察细胞形态,免疫荧光法、免疫印迹法检测NSE、MAP-2、GFAP、Smo和Gli1蛋白的表达和移位.结果 白藜芦醇诱导后细胞胞体收缩,伸出长突起,类似神经元.免疫荧光显示正常组及对照组MSCs轻度表达神经元NSE蛋白,白藜芦醇诱导组MSCs NSE、MAP-2阳性,但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白.免疫荧光显示,MSCs具有初级纤毛,并表达Smo和Gli1.白藜芦醇诱导组Smo从细胞质进入初级纤毛,Glil从细胞质进入细胞核,同时,Smo、Glil蛋白的表达增加(P＜0.01).对照组则无明显变化.结论 白藜芦醇能诱导MSCs分化为神经元样细胞；此过程中Shh信号通路被激活,推测Shh信号在MSCs分化过程中可能发挥着重要作用.
