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针刺联合鼠神经生长因子对脑瘫幼鼠神经行为和脑组织生长代谢相关蛋白表达的影响
目的:探讨针刺联合鼠神经生长因子(NGF)对脑瘫幼鼠的疗效及对其脑组织神经凋亡、修复生长及能量代谢相关蛋白表达的影响.方法:选取70只SD幼鼠,其中50只采用结扎单侧颈动脉使脑组织缺血+密闭缺氧法建立脑瘫幼鼠模型,20只设立空白对照组和假手术组,每组10只.30只造模成功的幼鼠随机分为模型组、NGF组和联合治疗组.空白对照组不予处理;假手术组:切开颈部皮肤分离出左侧颈动脉而后缝合并消毒创口;NGF组:腹腔注射NGF 2000 U · kg-1· d-1;联合治疗组腹腔注射给药NGF 2000 U · kg-1 · d-1的基础上进行针刺治疗,穴取"百会"、左侧"颞I针" "大椎" "脊中" "曲池" "涌泉" "合谷" "肘节" "膝前穴",每天1次;模型组腹腔注射同体积的0.9％NaCl溶液,均连续干预14 d.治疗完成后进行神经行为能力评分,而后取各组幼鼠脑组织TUNEL法检测细胞凋亡率、PCR检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2及Casp3的表达;Western blot检测各组幼鼠脑组织中神经生长相关蛋白(GAP-43)和单羧酸转运蛋白1(MCT 1)的表达量.结果:干预后,空白对照组和假手术组幼鼠各项神经行为能力均无异常,而模型组、NGF组及联合治疗组均有不同程度的神经行为异常情况,其中联合治疗组和NGF组神经行为能力评分低于模型组(均P＜0.05),且联合治疗组低于NGF组(均P＜0.05).联合治疗组及NGF组左侧脑细胞凋亡率、Bax及Casp3表达水平均低于模型组(均P＜0.05),且两组Bcl-2均高于模型组(均P＜0.05),联合治疗组较NGF组Bax及Casp3降低更明显(均P＜0.05);联合治疗组和NGF组GAP-43及MCT1蛋白表达量高于模型组(均P＜0.05),且联合治疗组高于NGF组(均P＜0.05).结论:针刺联合NGF治疗脑瘫幼鼠可有效改善神经行为能力,抑制神经细胞凋亡,并通过上调GAP-43和MCT 1表达促进脑组织损伤修复和能量代谢.
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单羧酸转运蛋白1、2在乳腺浸润性导管癌中的表达变化及其与病理级别之间的关系
目的：探讨单羧酸转运蛋白（MCT）1、2在人不同病理级别乳腺浸润性导管癌（IDC）中的表达变化及其对增殖、生长的分子机制。方法收集人不同病理级别乳腺IDC标本37例，以肿瘤周围相对正常乳腺组织作为对照，运用苏木素-伊红（ HE）染色作病理诊断分级，石蜡切片免疫组织化学显色，并用Western印迹方法观察MCT 1、2的表达变化。结果与正常乳腺组织相比，MCT 1、2在乳腺IDC中均有高表达；其表达量随病理级别的升高逐渐增强。结论 MCT 1、2在乳腺IDC组织中表达增强，其强度变化与肿瘤的恶性程度呈正相关。
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MCT1、CD147、CD44 mRNA在非小细胞肺癌中的表达相关性及意义
目的 探讨单羧酸转运蛋白-1( MCT1)、CD147、CD44 mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其在NSCLC发生、发展和预后中的意义.方法 取经病理确诊的56例NSCLC患者的癌及癌旁组织(距肿瘤边缘＞5 cm)、20例肺良性病变、7例正常肺组织组织标本,采用实时荧光定量RT-PCR检测MCT1、CD147、CD44 mRNA表达,并分析癌组织中三者表达的相关性及与临床病理特征的关系.结果 (1)MCT1、CD147、CD44 mRNA在肺癌组织中的表达量高于癌旁组织、正常肺组织和肺良性病变组织,差异均有统计学意义(P均＜0.05);(2)癌组织中MCT1、CD147、CD44 mRNA三者表达具有相关性(P＜0.05)；(3) MCT1、CD147、CD44 mRNA的表达与NSCLC患者的性别、年龄、是否吸烟、肿瘤大小、pTNM分期均无关,但与肿瘤的组织类型(P均＜0.05)、淋巴结转移(P均＜0.05)有关；MCT1、CD44 mRNA的表达还与肿瘤分化程度有关(P均＜0.05).结论 在NSCLC患者组织中MCT1、CD147、CD44 mRNA表达上调,它们可能参与肿瘤的发生、发展,有望成为NSCLC诊断和预后评价的指标.
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单羧酸转运蛋白1、2在不同病理级别星形细胞瘤组织中的表达
目的 分析单羧酸转运蛋白(MCT)1、2在人星形胶质细胞瘤组织中的表达变化,探讨其与病理级别的关系.方法 从神经外科选取55例不同病理级别星形细胞瘤标本作为研究组,以正常脑组织标本(12例)作为对照组.使用HE染色进行病理诊断分级,免疫组织化学显色与免疫印迹观察不同标本MCT1、2的表达变化.结果 不同病理级别肿瘤组织中MCT1、2表达均明显高于对照组(P均＜0.05),且随着病理级别的升高,肿瘤组织中MCT1、2表达递增(P均＜0.05),不同病理级别肿瘤组织间比较差异均具有统计学意义(P均＜0.05).结论 人星形胶质细胞瘤组织中MCT1、2表达明显增强,其强度与病理级别(肿瘤恶性程度)呈正相关.
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线粒体乳酸穿梭对小鼠主动脉弓缩窄术后心室重构和心力衰竭的影响
目的:研究单羧酸转运蛋白l(monocarboxylate transporter 1,MCT1)介导的线粒体乳酸穿梭对小鼠主动脉弓缩窄术(transverse aortic coarctation,TAC)后心室重构和心力衰竭的影响,并探讨其可能的机制.方法:本实验采用雄性C57BL/6小鼠,实验分为4组:①假手术组;②rAC 2周组;③TAC 4周组;④TAC 8周组.TAC术建立小鼠动物模型,分别于术后第2周末、第4周末和第8周末使用心脏超声检测小鼠心功能,比色法测定心肌组织内乳酸及丙二醛(malondialdehyde,MDA)浓度,Western blot检测心肌胞质cleaved-caspase 3和线粒体MCT1蛋白的表达.结果:小鼠心超结果显示TAC术后2周出现明显心肌肥厚,TAC术后4周出现心力衰竭,TAC术后8周出现严重心力衰竭.假手术组、心肌肥厚的TAC 2周组及心力衰竭的TAC 4周、8周组心肌组织中乳酸和MDA浓度以及cleaved-caspase 3和MCT1蛋白表达逐渐升高.与假手术组和TAC 2周组相比,TAC 4周和8周组心肌组织中乳酸和MDA浓度、cleaved-caspase 3和MCT1蛋白的表达均明显升高.结论:MCT1介导的线粒体乳酸穿梭在心室重构和心力衰竭发生发展过程中起着重要的作用,其机制可能包括诱导氧化应激和活化线粒体凋亡通路.
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GLUT1与MCT1在直肠癌组织中的表达及意义
目的 探讨葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,GLUT1)和单羧酸转运蛋白1(mono-carboxylate transporters 1,MCT1)在人直肠癌组织中的表达及在肿瘤发生、发展中的意义.方法 应用免疫组化法检测75例直肠癌及32例活检正常直肠组织标本(对照组)中GLUT1及MCT1的表达,分析GLUT1与MCT1在直肠癌组织中表达的关系,GLUT1、MCT1的表达与TNM分期及淋巴结转移的关系.结果 GLUT1表达阳性直肠癌组59例(78.67％),对照组1例(3.13％),差异有统计学意义(x2=51.97,P＜0.05);GLUT1表达与直肠癌TNM分期及淋巴结转移有关(x2=9.252、6.460,均P＜0.05).MCT1表达阳性直肠癌组47例(62.67％),对照组2例(6.25％),差异有统计学意义(x2=28.76,P＜0.05);MCT1表达与直肠癌TNM分期以及淋巴结转移有关(x2=9.744、9.316,均P＜0.05).随着直肠癌的进展,GLUT1和MCT1阳性表达率均呈上升趋势(Z=2.969、3.109,均P＜0.01).进一步分析发现,两者的表达水平在直肠癌组织中呈线性相关(r=0.639,P＜0.05).结论 GLUT1与MCT1的表达在直肠癌发生、发展过程中可能存在一定的协同作用.
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单羧酸转运蛋白1抑制剂AZD3965对胃癌BCG-823细胞增殖和凋亡的影响
目的:探究单羧酸转运蛋白1(MCT1)抑制剂AZD3965通过抑制肿瘤细胞MCT1对胃癌细胞BCG-823增殖及凋亡的影响及其相关的分子机制.方法:MTT法检测不同浓度AZD3965(0、20、40、80μmol/L)对胃癌细胞的增殖抑制作用.通过倒置显微镜观察胃癌细胞BCG-823在不同浓度AZD3965(0、20、40、80μmol/L)处理后细胞形态的改变.集落克隆形成实验观察AZD3965对胃癌细胞BCG-823集落形成能力的影响.PI单染流式细胞术检测AZD3965对胃癌细胞BCG-823细胞凋亡的影响.Western blotting检测AZD3965作用下MCT1和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达.结果:经AZD3965作用后BCG-823细胞的生长受到抑制,且随着药物浓度和作用时间的增加,AZD3965对人胃癌细胞BCG-823的增殖抑制作用逐渐增强(P<0.01).通过倒置显微镜观察不同浓度AZD3965(20、40、80μmol/L)处理胃癌细胞后,相较空白对照组(0μmol/L AZD3965)胃癌细胞数目明显减少,细胞发生皱缩破裂,细胞形态发生改变.集落克隆形成实验表明AZD3965对胃癌细胞BCG-823有增殖抑制作用.PI单染流式细胞术结果显示,20、40、80μmol/L AZD3965处理BCG-823细胞24 h后,细胞的凋亡率分别为(13.33±4.13)％、(22.53±2.97)％和(36.63±5.23)％,与空白对照组(0μmol/L AZD3965)相比明显升高(P<0.01).Western blotting结果显示,AZD3965可以下调BCG-823细胞中MCT1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达.结论:AZD3965可通过抑制MCT1活性,并且激活Bax和抑制Bcl-2,从而抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡.
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葡萄糖转运蛋白1和单羧酸转运蛋白1、单羧酸转运蛋白4在结肠癌组织中的表达和意义
目的 观察葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和单羧酸转运蛋白1(MCT1)、MCT4在结肠癌组织中的表达及其与临床特征之间的相关性.方法 收集杭州市第一人民医院2008年1月至2016年1月经手术切除的结肠癌组织标本84例和相应的癌旁正常结肠组织标本40例,采集患者的临床资料,采用免疫组化检测患者GLUT1、MCT1、MCT4的表达,进行统计分析.结果 结肠癌组织中GLUT1、MCT1、MCT4阳性表达率分别为54. 8% (46/84)、47. 6% (40/84)、58. 3% (49/84),均显著高于正常结肠组织的12. 5% (5/40)、7. 5% (3/40)、15.0%(6/40),两者差异均有统计学意义(χ2=19. 987、19. 253、20. 615,均 P ＜0. 01);GLUT1、MCT1、MCT4的表达与性别、年龄、肿瘤大小无关,与病变部位、分化程度、淋巴结转移、远处转移和临床分期有相关性(GLUT1:χ2=6. 227、11. 629、10. 029、14. 817、4. 709;MCT1:χ2=6. 891、8. 615、9. 185、5. 337、16. 131;MCT4:χ2=8. 641、7. 077、12. 131、6. 917、7. 077;均P＜0. 05).结论 结肠癌组织高表达GLUT1、MCT1、MCT4,GLUT1、MCT1、MCT4可能通过能量代谢途径影响结肠癌的发生、发展.
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易普利姆玛对Lewis肺癌小鼠体内PTHrP表达的影响及与癌细胞衰老的关系
目的 建立Lewis肺癌小鼠模型,观察Ipilimumab对荷瘤小鼠体内PTHrP及MCT1表达的影响并探讨与癌细胞衰老的关系.方法 取C57BL/6小鼠共30只,建立Lewis肺癌小鼠模型,随机分为对照组、低剂量处理组、高剂量处理组,每组10只.开始给药,给药剂量与方法:低浓度Ipilimumab处理组3mg/kg,高浓度Ipilimumab处理组5 mg/kg,共给药5次,对照组给予等量生理盐水.采用免疫组织化学法检测3组中PTHrP、MCT1的表达.结果 3组动物细胞PTHrP蛋白的分泌及MCT1的阳性表达率高度一致,且随Ipilimumab浓度的增高而增高,第3组表达水平较第2组和第1组明显升高,有统计学意义(P＜0.05),第2组表达水平较第1组明显升高,有统计学意义(P＜0.05).且2个指标阳性表达率均与细胞衰老相关基因βGal的表达呈显著负相关性(P＜0.05).结论 Ipilimumab处理后的荷瘤小鼠通过上调PTHrP、MCT1的表达,延缓癌细胞的衰老,终引起癌细胞侵袭或转移.
关键词： 肺癌 易普利姆玛 甲状旁腺激素相关蛋白 单羧酸转运蛋白1 细胞衰老 -
葡萄糖影响丁酸钠诱导结肠癌细胞凋亡和增殖抑制作用及其可能机制
目的 观察葡萄糖对丁酸钠诱导结肠癌细胞凋亡和增殖抑制作用效果的影响,并探讨这种影响的可能机制.方法 细胞生存率的检测采用MTT法,流式细胞仪法检测细胞凋亡.RT-PCR方法检测单羧酸转运蛋白1(MCT1)和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)mRNA的表达情况.结果 低葡萄糖浓度培养条件下可以诱导结肠癌细胞HT-29凋亡,并影响其生长.且葡萄糖能够明显抵制丁酸钠诱导凋亡和增殖抑制作用,同时葡萄糖轻度抑制GLUT1 mRNA表达,对MCT1 mRNA也有一定抑制作用.结论 葡萄糖浓度变化能够明显影响丁酸钠诱导凋亡和增殖抑制作用,这种影响可能与葡萄糖和丁酸钠在细胞内浓度变化有关.
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3-溴丙酮酸抑制人肝癌细胞株糖酵解的研究
目的 观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对人肝癌细胞株糖酵解的影响.方法 不同浓度3-BrPA处理人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞QSG-7701后,细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测HepG2和QSG-7701经过3-BrPA处理前后细胞内c-Myc、单羧酸转运蛋白1(MCT1) mRNA和蛋白表达,酶耦联法检测上述细胞葡萄糖吸收、乳酸分泌及细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量.结果 细胞存活和凋亡结果显示随3-BrPA浓度增加,细胞生长抑制率和凋亡率随之增高.不同浓度3-BrPA(25、50、75μmol/L)处理HepG2细胞24h后,凋亡率分别为(4.64±2.68)％、(14.57±8.41)％、(40.55 ±23.41)％,对照组0μmol/L下HepG2凋亡率为(5.62±3.24)％,75 μmol/L组与对照组比较差异有统计学意义(P=0.025).在mRNA和蛋白水平上,与QSG-7701比较,HepG2中c-Myc、MCT1均高表达(P=0.001、0.000),且当3-BrPA浓度为75 μmol/L时表达均下降(P=0.041、0.000).糖代谢结果显示当3-BrPA浓度为75 μmol/L时HepG2的葡萄糖吸收、乳酸分泌及细胞内ATP含量均逐渐降低(P=0.035、0.000、0.045),而QSG-7701中无改变(P=0.898、0.841、0.112).结论 3-BrPA通过抑制c-Myc/MCT1表达抑制HepG2的糖酵解,从而抑制HepG2细胞生长、促进细胞凋亡.
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抑制单羧酸转运蛋白1可增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性
目的 探讨siRNA沉默单羧酸转运蛋白1(MCT1)增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性及其可能机制.方法 Western blot检测HNE1和HNE1/DDP细胞中MCT1的表达及siRNA转染沉默MCT1在HNE1/DDP细胞中MCT1的表达;MTT法检测不同浓度顺铂和MCT1 siRNA联合顺铂对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测Mcl-1、Bak、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 MCT1在HNE1/DDP细胞中高表达,抑制MCT1的表达可增加HNE1/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05),部分逆转鼻咽癌细胞对顺铂的耐药.此外,抑制MCT1的表达可增强HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的作用,MCT1 siRNA与8μmol/L顺铂联合作用于HNE1/DDP细胞24 h的凋亡率为(51.23±2.86)%,较单用MCT1 siRNA、顺铂的凋亡率明显升高(P<0.05).同时使细胞线粒体膜电位降低,下调Mcl-1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达.结论 抑制MCT1的表达可增强鼻咽癌HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,其机制可能与下调Mcl-1、Bcl-2和上调Bax有关.
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单羧酸转运蛋白1增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸的敏感性
目的 探究单羧酸转运蛋白1(MCT1)在增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸(3-BrPA)敏感性中的作用,为乳腺癌治疗提供新思路.方法 MTT法检测3-BrPA对乳腺癌细胞的增殖抑制作用,溴化丙啶单染法流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA试剂盒检测细胞内己糖激酶Ⅱ、乳酸脱氢酶、乳酸、三磷酸腺苷水平,Western blot检测MCT1蛋白的表达,瞬时转染cDNA上调MCTl的表达后,检测3-BrPA对MDA-MB-231细胞的增殖和三磷酸腺苷水平的影响.结果 3-BrPA对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响不明显,200 μmol/L作用24 h后增殖抑制率和凋亡率仅为8.72％和7.8％;但200 μmol/L 3-BrPA作用MCF-7细胞24 h后其增殖抑制率和凋亡率为84.6％和82.3％.MDA-MB-231细胞的MCT1过表达后,200 μmol/L 3-BrPA对细胞的增殖抑制率为72.44％,明显高于对照组(P＜0.05);25、50、100、200 μmol/L 3-BrPA作用细胞6h后,细胞内三磷酸腺苷水平和对照组相比分别为96.98％、88.44％、43.3％、27.56％.结论 MCT1能增强乳腺癌细胞对3-BrPA的敏感性,其机制可能是将3-BrPA转运到细胞内,从而抑制细胞糖酵解来发挥抗肿瘤作用.
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MCT1、CD147、CD44蛋白在非小细胞肺癌中的表达相关性及意义
目的:探讨单羧酸转运蛋白1(Monocarboxylate transporters 1,MCT1)、CD147、CD44蛋白在非小细胞肺癌(Non-smallcell lung cancer,NSCLC)表达相关性及其在NSCLC发生发展、预后中的意义.方法:取经病理确诊的50例NSCLC患者癌组织(肺癌组)、远癌组织(距肿瘤边缘大于5cm,远癌组)和21例肺良性病变组织(对照组).采用免疫组化方法检测MCT1、CD147、CD44蛋白表达.结果:(1)肺癌组中MCT1、CD147、CD44蛋白的阳性表达均明显高于远癌组和对照组(P＜0.05)；(2)MCT1在肺癌细胞膜中表达与CD147、CD44蛋白表达(x2=7.284,P=0.007;x2=6.522,P=0.011)均存在相关性；(3)MCT1、CD147、CD44蛋白的表达与NSCLC患者的性别、年龄、肿瘤大小、PTNM分期均无关,但与肿瘤的组织类型(x2=12.888,P=0.039；r=3.997,P=0.043；x2=3.982,P=0.000；x2=7.670,P=0.035)、淋巴转移(x2=13.406,P=0.021；x2=13.406,P=0.021；x2=11.809,P=0.039；x2=12.493,P=0.000)显著相关,另外MCT1(细胞膜)蛋白表达还与肿瘤分化程度(x2=7.135,P=0.013)及吸烟史(r=6.623,P=0.010)显著相关,CD44与肿瘤的分化程度显著相关(x2=5.486,P=0.000).结论:在NSCLC患者组织中MCT1、CD147、CD44蛋白表达均高于癌周组织及肺良性病变组织,统计结果显示3者在NSCLC细胞膜表达具有显著相关性.MCT1、CD147、CD44可能参与肿瘤的发生、发展及远处淋巴结转移,它们可能作为检测NSCLC和预后评价指标.
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二甲双胍联合MCT1抑制剂α-氰基-4-羟基苯乙烯治疗小鼠Lewis肺癌的研究
目的 探讨二甲双胍联合单羧酸转运蛋白1 (monocarboxylate transporter 1,MCT1)抑制剂α氰基-4-羟基苯乙烯(CHC)干扰乳酸代谢是否有抗肿瘤作用.方法 体外检测对照组、二甲双胍组(1 mmol/L、5 mmol/L)、CHC组(5 mmol/L)及联合用药组(二甲双胍5 mmol/L和CHC 5 mmol/L)24、48 h LL/2细胞的增殖、乳酸代谢的改变及24 h细胞凋亡变化.C57BL/6小鼠于右背侧皮下接种LL/2肿瘤细胞(5×105/只),建立小鼠Lewis肺癌模型,将28只荷瘤小鼠随机平均分为4组:对照组(0.1mL生理盐水灌胃,同时给予0.1 mL生理盐水腹腔注射)、二甲双胍治疗组(二甲双胍灌胃,200mg/kg,0.1 mL/只,同时给予0.1 mL生理盐水腹腔注射)、CHC治疗组(CHC腹腔注射,100 mg/kg,0.1 mL/只,同时给予0.1mL生理盐水灌胃)和联合治疗组(同时给予上述剂量二甲双胍灌胃和CHC腹腔注射).观察各组小鼠肿瘤生长、测量体积大小并进行肿瘤组织原位凋亡检测.结果 在体外,联合使用二甲双胍和CHC可以显著增加肿瘤细胞的乳酸生成,同时抑制肿瘤细胞的增殖,与对照组、二甲双胍组和CHC组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).体内动物模型证实联合使用二甲双胍和CHC可以早期减缓肿瘤的生长,与对照组、二甲双胍组和CHC组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)；同时促进肿瘤细胞的凋亡.结论 二甲双胍联合CHC可以改变肿瘤细胞乳酸代谢,诱导细胞凋亡,具有一定的抗肿瘤作用.
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Lewis肺癌小鼠体内PTHrP表达与癌细胞衰老的关系
目的:建立Lewis肺癌荷瘤小鼠动物模型,研究肺癌细胞中.PTHrP、MCT1表达的相关性及与癌细胞衰老的关系和意义.方法:C57 BL/6小鼠共30只,随机分三组:正常小鼠组(第1组)、早期肿瘤组(第2组)、晚期肿瘤组(第3组).免疫组织化学法检测三组中PTHrP、MCT1的表达.结果:三组动物细胞PTHrP蛋白的分泌及MCT1的阳性表达率高度一致,且与衰老相关指标βGal的表达成明显负相关性;两个指标在第3组的表达较在第2组和第1组中的表达明显升高,结果有统计学意义(P＜0.05);在第2组的表达较在第1组中的表达明显升高,结果有统计学意义(P＜0.05).结论:晚期肿瘤组织PTHrP、MCT1的表达具有显著正相关性,且与衰老相关指标βGal的表达成明显负相关性.
关键词： 肺癌 甲状旁腺激素相关蛋白 单羧酸转运蛋白1 细胞衰老
