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螺旋藻提取物对DNA拓扑异构酶活性的抑制及对DNA的直接影响
目的:探讨螺旋藻提取物对DNA拓扑异构酶活性的影响以及对DNA的直接作用.方法:TOPOI介导的负超螺旋pBR322解旋反应检测对TOPOI酶活力的影响;TOPOII介导的kDNA去连环作用检测对TOPOII活力的影响;采用负超螺旋pBR322和kDNA检测对DNA的直接作用.结果:螺旋藻提取物的水溶性成分和DMSO可溶性成分在浓度分别为3.2μg/ml和80μg/ml时,能完全抑制TOPOI介导的负超螺旋pBR322解旋反应;两者对TOPOII介导的kDNA去连环作用完全抑制的浓度分别为16μg/ml和2000μg/ml.此外,螺旋藻提取物水溶性成分在高浓度时可直接引起DNA的双链断裂.结论:TOPO酶,主要是TOPOI,是螺旋藻提取物抗肿瘤的细胞内作用靶点之一.
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半边旗有效化合物对肺癌细胞DNA拓扑异构酶、TPK及c-myc基因的影响
目的:研究半边旗有效化合物6F和A对肺癌细胞DNA拓扑异构酶(TOPO)Ⅰ和Ⅱ活性的影响;化合物A对细胞胞浆和胞膜酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性及癌基因c-myc蛋白表达的影响.方法:通过电泳法测定化合物6F和A对肺癌细胞DNA拓扑异构酶(TOPO)Ⅰ、Ⅱ活性的影响;用液体闪烁计数法测定化合物A对酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响;流式细胞仪间接荧光检测法测定化合物A对c-myc基因蛋白表达的影响.结果:化合物6F和A可抑制细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的活性,1.0mg/L的6F和A即开始抑制TOPOⅠ的活性,随浓度升高抑制作用增强;0.01mg/L的6F和10.0mg/L的A对TOPOⅡ的活性有强烈的抑制作用;化合物A对细胞中胞膜TPK活性有一定的抑制作用,但对胞浆TPK的活性几乎没有影响;化合物A对c-myc基因的蛋白表达有抑制作用.结论:DNA拓扑异构酶是化合物6F和A抑制细胞生长的靶点之一,化合物A对TPK活性有一定的抑制作用,对c-myc基因的蛋白表达有抑制作用.
关键词： 半边旗 DNA拓扑异构酶 酪氨酸蛋白激酶(TPK) c-myc -
灵芝提取物对DNA拓扑异构酶的抑制作用及诱导K562细胞凋亡
目的:研究中华灵芝宝的抗肿瘤作用机理.方法:DNA超螺旋解旋法检测中华灵芝宝对拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ(TOPOⅠ、Ⅱ)活性的影响;琼脂糖凝胶电泳检测其对DNA的直接打断作用及诱导K562细胞凋亡的能力.结果:中华灵芝宝能抑制TOPOⅠ、Ⅱ的活性,促进DNA的解旋、断裂;同时还能直接打断质粒和大分子DNA;作用于K562细胞后电泳显示有凋亡细胞特有的"梯状"条带.结论:中华灵芝宝能同时抑制TOPOⅠ、Ⅱ活性,直接打断质粒和大分子DNA,并能诱导K562细胞凋亡.
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食管鳞状细胞癌P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达及临床意义
目的 探讨耐药基因蛋白P-gp、GST-π和TopoⅡ在食管鳞状细胞癌及正常食管组织中的表达及其与临床病理的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测144例手术切除的食管鳞状细胞癌组织和30例正常食管组织中P-gp、GST-π和TopoⅡ的表达.结果 P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达与患者年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤大小及浸润深度无关(P＞0.05),与肿瘤的分化程度有关,高分化、中分化和低分化鳞癌组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 食管鳞状细胞癌耐药由多种耐药基因共同参与,联合检测多项耐药相关蛋白表达,对指导临床化疗药物选择具有意义.
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国内铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药机制的Meta分析
目的 系统评价我国铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物的相关耐药机制.方法 计算机检索CNKI、WanFang Data、CBM、VIP、PubMed、EMbase和The Cochrane Library数据库,检索时限均从建库至2012年12月,查找来自中国的有关铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药机制研究的相关文献.按照纳入与排除标准筛选文献后,采用RevMan 5.0软件进行Meta分析.结果 共纳入19篇文献,合计723株耐喹诺酮类铜绿假单胞菌.统计分析结果显示:gyrA、gyrB、parC和parE基因检出率在淮河以北地区分别为88.0％、13.3％、31.4％和16.7％；在淮河以南地区分别为64.6％、50.0％、35.4％和11.5％.质粒介导的耐药基因aac(6’)-Ib-cr淮河以北地区检出率为0(0/66),淮河以南地区检出率则为39％ (25/64),主动泵出系统表达率为68.1％.结论 在我国,铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物的机制以gyrA基因突变为主,其主动泵出系统是重要的耐药机制,而DNA拓扑异构酶Ⅳ的异常及质粒介导的耐药是次要机制.
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雷公藤内酯醇对K562细胞热休克蛋白70表达及拓扑异构酶活性的影响
目的:研究雷公藤内酯醇(TPL)对K562细胞热休克蛋白70(HSP70)表达、溶酶体膜透化作用(lysosomal membranepermeabilization,LMP)以及对DNA拓扑异构酶(TOPO)Ⅰ、Ⅱ的影响.方法:应用MTT法检测TPL对K562细胞增殖的影响;Westernblot法检测TPL对K562细胞热休克蛋白70的影响;用丫啶橙重新定位法检测,TPL对LMP的影响;通过电泳法测定TPL对K562细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ活性的影响.结果:TPL对HSP70蛋白表达有抑制作用;TPL能明显诱导K562细胞LMP的发生:TPL不能抑制TOPO Ⅰ的活性,400μg/ml的TPL开始抑制K562细胞TOPO Ⅱ的活性.结论:TPL可能通过下调HSP70蛋白的表达,使HSP70失去了抑制LMP的功能,导致了LMP的发生;DNA拓扑异构酶不是TPL抑制K562细胞增殖的靶点.
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人骨肉瘤耐药表型P-gp, GST-π, TopoⅡ的表达意义
目的: 探讨骨肉瘤组织中P-糖蛋白(p-gp),胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)和DNA拓扑酶Ⅱ(TopoⅡ)的表达与临床耐药的关系. 方法: 采用免疫组织化学方法检测骨肉瘤,骨化性纤维瘤和骨正常组织p-gp,GST-π和TopoⅡ的表达,并对有关临床及病理指标综合分析. 结果: 骨肉瘤P-gp, GST-π和TopoⅡ的阳性表达率分别为45.7%,71.3%和34.0%,正常骨组织相应值为0,12.5%和87.5%;骨化性纤维瘤相应值为20%,33.3%和93.3%,骨肉瘤和骨化性纤维瘤或正常骨组织比较差异有显著性意义(P<0.05). p-gp,GST-π在骨肉瘤中的表达低于在骨化性纤维瘤和正常骨组织, TopoⅡ在骨肉瘤中的表达高于在骨化性纤维瘤和正常骨组织,之间的差异有显著性(P<0.05). 此外,p-gp和TopoⅡ的表达与WHO新分型相吻合(χ2=12.92, P<0.01; χ2=25.21, P<0.01). 结论: p-gp, GST- π和TopoⅡ等多因素联合作用可能是骨肉瘤多药性的主要作用机制.
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耐药表型GST-π、P-gp及Topo Ⅱ在大肠癌中的表达及其临床意义
目的探讨大肠癌组织中胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)、糖蛋白(P-gp)和DNA拓扑酶Ⅱ(Topo Ⅱ)的表达与临床病理和预后的关系.方法采用免疫组化方法检测170例大肠癌组织中GST-π、P-gp和Topo Ⅱ的表达,对其组织病理改变和5年生存率进行综合分析.结果在高、中分化及低分化大肠癌中,GST-π阳性率分别为56.3%、65.6%和93.8%;Topo Ⅱ阳性率为25.0%、32.8%和68.8%,P-gp阳性率为37.5%、50.0% 和75.0%.GST-π和Topo Ⅱ表达在高、低分化两组间及中、低分化两组间均有非常显著的差异(P<0.01),P-gp表达均有显著差异(P<0.05).而在不同的年龄、性别、Duke's分期及有无淋巴结和远处转移中,GST-π、P-gp、Topo Ⅱ的表达均无显著差异(P>0.05).5 年内生存者GST-π、P-gp和Topo Ⅱ表达阳性率低于5年内死亡者,GST-π和P-gp有显著差异(P<0.05),Topo Ⅱ有非常显著差异(P<0.01).结论耐药表型GST-π、P-gp、Topo Ⅱ的表达可能作为评估大肠癌预后的有价值的指标.
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DNA拓扑异构酶Ⅱ是salvicine作用于酿酒酵母的主要靶点
目的：确定DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)是否为salvicine在酿酒酵母细胞内的主要作用靶点及其作用方式.方法：用TopoⅡ介导的超螺旋pBR322解旋反应检测salvicine在无细胞体系中对TopoⅡ催化活力的影响；用克隆形成实验检测salvicine对四种酵母细胞系生长的作用.结果：salvicine能明显抑制无细胞体系中TopoⅡ对超螺旋pBR322的解旋作用.salvicine对JN394母系细胞及TOP1缺失的JN394top1-细胞毒作用相似，验证了TopoⅠ不是其作用靶点.在25℃时，salvicine对温度敏感型JN394t2-1细胞具有良好的细胞毒作用；但在30℃时，TopoⅡ的活力大为降低，在有意义的浓度范围内salvicine对此类细胞的生长无明显抑制作用.另外，TopoⅡ发生突变的JN394t2-5细胞显示出对salvicine和etoposide(VP16)高度的耐受性.结论：TopoⅡ是salvicine细胞内主要作用靶点；salvicine通过捕获TopoⅡ-DNA断裂复合物而杀死细胞.此外，salvicine与VP16在TopoⅡ上有相似的作用位点.
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急性淋巴细胞白血病患者DNA拓扑异构酶的表达及临床意义
目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者DNA拓扑异构酶(Topo)mRNA水平的表达及其临床意义.方法用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了90例ALL患者DNATopo的表达.结果DNA Topo各亚型(Topo-Ⅰ,Topo-Ⅱa,Topo-Ⅱb)的表达阳性率初治组(58.1%,51.2%,81.5%)高于复发难治组(33.3%,44.4%,77.9%)和完全缓解(CR)组(14.9%,23.4%,34.1%),各组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).表达量各组间比较,CR组与初治组差异有统计学意义(P＜0.005);CR组与复发难治组Topo-Ⅱb差异有统计学意义(P＜0.05),DNA Topo各亚型表达量之间有显著相关性(P＜0.001),且各亚型表达量与WBC数之间亦有显著相关性(P＜0.01).结论ALL患者DNA Topo各亚型mRNA水平的表达量可能与WBC数共同作为Topo抑制剂药物个体化合理用药的参考指标,但不宜作为判断患者是否对Topo抑制剂耐药的参考指标.
