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非小细胞肺癌基因突变与影像特征相关性的研究进展
对于基因突变的非小细胞肺癌,分子靶向治疗可以显著提高病人的生存期及预后.影像学的应用对预测基因突变具有一定价值,是近几年研究的热点之一.本文就国内外在非小细胞肺癌表皮生长因子受体(EG-FR)、鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)及间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因突变与影像特征相关性的研究进展进行综述.
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不同病理级别胶质瘤细胞中IDH1基因变异表达观察
背景与目的:胶质瘤是常见的成人原发性神经系统恶性肿瘤,具有较高的病死率和病残率.深入研究胶质瘤的发生发展,无论对于其诊断还是治疗,都具有重要意义.本文通过观察异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)基因变异在不同病理级别胶质瘤中表达,初步分析IDH1基因变异与胶质瘤病理分级的相关性及意义.方法:采用直接测序法对30例不同病理级别胶质瘤标本进行IDH1基因变异检测,并取5例外伤额颞叶减压脑组织标本作为对照.比色法计算肿瘤组织内IDH1酶活力,结果采用SPSS13.0进行统计学分析.结果:30例胶质瘤标本中16例(53.33％)发生IDH1基因变异,并与肿瘤病理分级具有相关性,变异后酶活力下降明显.结论:IDH1基因变异在胶质瘤中发生频率较高,变异后酶活力下降,将影响胶质瘤的发生发展.
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抑制突变TP53增强胶质母细胞瘤细胞替莫唑胺敏感性及其相关机制
背景与目的:胶质瘤化疗耐药是胶质瘤治疗效果差的一个瓶颈.导致化疗耐药的分子机制目前尚未完全清楚.突变TP53的“获得功能”被认为是决定肿瘤发生及发展中的重要因素.本研究目的在于探讨突变TP53“获得功能”在多形性胶质母细胞瘤化疗耐药中的作用及其相关机制.方法:对人脑胶质瘤母细胞株T98G细胞进行mRNA测序,确定其TP53基因是否突变及突变位点.采用脂质体法包裹化学合成的突变TP53干扰小RNA片段(siRNA)转染T98G细胞.运用RT-PCR方法在转染后的第1天至第5天检测肿瘤中突变TP53在mRNA水平的表达,及相应时点6-氧甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)mRNA的表达.将转染siRNA的T98G细胞接种于96孔板中,加入梯度浓度(10～1000μmol/L)的替莫唑胺.模拟人体用药,替莫唑胺组在头5天内每天更换培养基,加入替莫唑胺;对照组加入司莫司汀.用MTT法观察各组在突变TP53沉默前后的化疗敏感性变化.结果:T98G细胞的237号密码子发生突变,且高表达突变TP53及MGMT mRNA.设计的siRNA可以有效地沉默T98G细胞株内突变TP53基因,使其在mRNA水平不表达或者低表达,沉默作用时间可达5天.沉默突变TP53基因后,T98G细胞株对替莫唑胺的敏感性增加4倍,对司莫司汀的敏感性无明显改变.沉默突变TP53基因后,可使MGMT的表达降低,两者呈正相关.结论:突变型TP53能增强胶质母细胞瘤细胞对替莫唑胺化疗的耐药性,其耐药机制可能是通过上调MGMT的表达实现的.
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TP53突变与胶质瘤恶性进展
背景与目的:WHO Ⅱ级的星形细胞瘤手术后在部分患者可能复发,而且,复发时多出现恶性程度增加.本研究探讨TP53蛋白质分子的表达与胶质瘤恶性进展之问的关系.方法:收集第一次手术时为星形细胞瘤(WHO Ⅱ级)的石蜡包埋标本53例份,其中10例复发时第二次手术肿瘤仍然为Ⅱ级(复发无进展组);10例复发时肿瘤级别升高(Ⅲ级或Ⅳ级)(复发进展组);另外13例在5年内没有复发(无复发组).免疫组化检测TP53在肿瘤中的表达,并采用DNA测序法分析TP53蛋白阳性标本TP53外显子5、7、8的突变情况.结果:LTP53阳性率为45.5%(15/33).复发恶性进展组TP53高于无复发组和无进展组(P＜0.05);TP53无进展组与无复发组之间差异无统计学意义.基因测序共在6例组织中发现7个(共4类)突变,其中1例同时存在2个突变.所有突变者都是恶性进展组病例.结论:TP53突变/蛋白质分子过表达可能是Ⅱ级星形胶质细胞瘤复发恶性进展的预示指标.
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线粒体DNA突变与肿瘤
线粒体是真核细胞中普遍存在的细胞器,主要负责调节细胞能量代谢、自由基生成和凋亡途径的执行.反常的氧化磷酸化和有氧代谢是线粒体功能障碍的结果,被认为与肿瘤发生、发展有关.在过去的几十年里,肿瘤细胞mtDNA编码和控制区突变已经进行了广泛研究并已得到确认,突显mtDNA突变积累是引发持续的线粒体缺陷的一个关键因素,并与肿瘤发生、发展密切相关.然而,这些mtDNA突变在肿瘤发生、发展过程中所发挥的作用仍然知之甚少.本文概述了肿瘤中发现的多种细胞mtDNA突变,并着重介绍了在肿瘤转化和进展中mtDNA突变的因果关系,还扼要说明了mtDNA突变是如何激活线粒体-细胞核逆行信号,从而调节相关核基因的表达或诱导表观遗传变化,并促进肿瘤细胞的恶性表型.根据目前研究成果,mtDNA突变可以作为肿瘤早期诊断的一个生物学标记,也有望成为肿瘤治疗的潜在靶点,但仍需进一步研究mtDNA在肿瘤中特定突变的功能和意义.
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P53基因在胃癌前病变组织中表达及干预治疗后的变化
目的:观测P53基因在胃粘膜肠上皮化生、异型增生中的异常表达,以及经过干预治疗后胃粘膜病变的改善和P53基因突变的变化.方法:60例经胃镜检查有萎缩伴中重度肠化、异型增生的患者(其中41例Hp检测阳性),应用PCR-SSCP方法检测P53基因的突变率;然后经根除Hp和叶酸治疗6月后,复查胃镜、Hp、P53基因观察其变化.结果:在干预治疗前肠化组有2例、异型增生组有5例P53基因突变,(2/35,5.71%:5/25,20.00%;P＜0.05);Hp阳性组有6例,阴性组有1例P53基因突变,(6/41,14.63%:l/19,5.26%),二组差异有显著性(P＜0.05);经治疗后胃粘膜病变有显著改善,总有效率65.00%;Hp根除率为87.82%;P53基因突变率在异型增生组和Hp阳性组有显著降低.结论:在胃癌前病变时就有P53基因的突变,而根除Hp和叶酸治疗后,胃癌前病变得到改善,P53基因的突变率也有降低.
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通用模板实时PCR法对YMDD突变的检测
目的：本研究旨在建立一种快速准确的方法，用于乙肝患者拉米夫定治疗过程中的耐药突变的检测与监控。方法：通过运用通用模板和Taqman探针，我们建立了一种用于检测YMDD突变的实时PCR的方法，通过I反应，V反应，和对照组的C反应，可以检测到YIDD，YVDD突变，以及HBV的总量。当ΔCt <3.5时，即可确认突变存在。含有乙肝病毒聚合酶基因YMDD变异株的质粒经过梯度稀释，并进行检测验证。本研究对163例接受拉米夫定治疗的乙肝患者血清样本采用这种方法进行检测，结果与DNA测序法一致。结果：检测范围可至103拷贝/ml，并且可以排除非特异性扩增。在163例样本中，有51例可以检测到耐药突变。结论：这种通用模板实时PCR方法对于接受拉米夫定治疗乙肝患者的YMDD突变的定量是快速准确的，可以用于拉米夫定治疗前以及治疗过程中耐药突变的监控。
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非小细胞肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药机制
非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)的药物治疗目前仍以含铂双药联合化疗为标准治疗方案,但多项研究表明,化疗药物对于NSCLC的疗效达到瓶颈.在这样的背景下,通过干预表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶信号转导以治疗NSCLC的酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)逐渐成为我们关注的焦点.但无论近期疗效如何,终患者都不可避免的产生耐药及病情进展.因此,了解EGFR-TKI耐药机制有利于指导临床制定克服耐药的策略.故本文对EGFR-TKI的耐药机制进行综述.
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由MDS进展为急性白血病患者线粒体DNA D-loop区的突变
目的：研究4例由骨髓增生异常综合征（MDS）进展为急性白血病的患者骨髓线粒体DNA D-loop区的突变。方法：提取4例由MDS进展的白血病患者骨髓以及口腔上皮组织的线粒体DNA，对线粒体DNA D-loop区两个高变区（HV1和HV2）进行PCR扩增，通过直接测序的方法对PCR产物的基因序列进行检测。结果：在4例急性白血病患者骨髓标本中有3例检测到突变，突变位点共4个，计算突变率为：75%，突变类型为碱基置换突变和碱基缺失。结论：在由MDS进展的白血病患者中检测到D-loop区的突变，可能与MDS的疾病进展有关。
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脂质代谢异常一例:极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症
目的:提高对极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCADD)临床特征的认识.方法:总结1例VLCADD患儿的临床表现和治疗过程,并综合文献进行分析.结果:患儿,女,1岁6个月,表现为呕吐、抽搐、发热,窦性心动过速,频繁发生的低血糖,肝功能及心肌酶异常,终因症状频繁发作,放弃治疗而死亡.基因检测已证实患儿为VLCADD.结论:VLCADD为幼儿期潜在猝死性疾病之一,需要早期诊断与治疗.
关键词： 遗传 代谢 突变 极长链酰基辅酶A脱氢 病例报告 -
Peutz-Jeghers综合征患者STK11基因突变的研究
目的 探讨两个中国Peutz-Jehgers综合征(PJS)家系STK11基因突变类型及与表型的关系.方法 从PJS患者外周血中提取基因组DNA,采用PCR和Sanger测序的方法检测STK11基因9个外显子及非编码区序列.结果 在2个PJS家系中均发现STK 11基因第6号外显子第783位核苷酸胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶尿嘌呤(G)替代即c 7.83 C>G,导致第261位氨基酸由酪氨酸(TAC)转变为终止密码子(TAG),形成一个截短蛋白(p.Y261),导致STK11蛋白激酶区部分缺失以及C-末端的α螺旋区域完全缺失.两个家系中2例PJS患者分别发生了结肠癌和肝癌.结论 STK11基因突变p.Y261可能是PJS患者的致病原因,还可能与恶性肿瘤发生相关.
关键词： Peutz-Jeghers综合征 STK11基因 突变 恶性肿瘤 -
微波辐射与健康的关系研究
为阐明生产、生活中频率在3×108-3×1011(0.3-300GHz)的电磁波——微波的辐射是否对人类健康有危害,对有关微波辐射对人类健康影响的文献作一综述.微波辐射对人类的神经系统、心血管系统、眼睛、生殖系统都有影响,还可能引起细胞突变,对人体微量元素的功能也可能有影响.对日常生活中手机、微波炉等微波辐射源对人体可能的危害要采取保护性措施.
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功能性构音障碍FOXP2基因14外显子突变研究
目的 明确中重度功能性构音障碍FOXP2基因14外显子G到A的突变情况.方法 收集中重度功能性构音障碍患儿108例,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)法进行FOXP2基因14外显子G到A的突变筛查,对其中30例重度功能性构音障碍患儿进行FOXP2基因14外显子直接测序分析.结果 108例中重度功能性构音障碍患儿均未发现“KE”家族中FOXP2基因14外显子G到A的突变.30例重度功能性构音障碍患儿中也未发现FOXP2基因14外显子的其他序列变异.结论 FOXP2基因14外显子突变可能不是功能性构音障碍的直接原因.
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核苷(酸)类药物治疗慢性乙型肝炎的耐药突变分析
目的 分析核苷(酸)类药物治疗慢性乙肝诱导HBV基因耐药的变异特征.方法 通过常规PCR和DNA反向斑点杂交相结合的DNA芯片技术对211例服用核苷(酸)类药物治疗慢性乙肝的耐药患者和195例未治疗的慢性乙肝患者进行HBV DNA基因分型和耐药位点检测,分析核苷(酸)类药物耐药突变规律.结果 406例患者中B基因型占61％,C基因型占31％,C基因型耐药突变发生率(65％)显著高于B基因型(46％),差异有统计学意义(P<0.001).rtM204I为常见的耐药突变位点(43％),rtM204V、rtL180M、rtM250V、rtA181T/V、rtN236T、rtM250L常与其它耐药位点相伴出现,rtT184S/A/I/L、rtS202G、rtM/V207I仅以多耐药模式存在.C基因型更容易发生公共耐药通路突变,耐药通路突变与患者的HBeAg状态无相关性.结论 深圳地区HBV基因型以B型为主,C基因型较B基因型有更高的耐药突变发生率,且更容易发生公共耐药通路突变.
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MtDNA 12SrRNA基因1555G点突变10家系表型分析及16SrRNA基因序列分析
目的:探讨线粒体基因(mtDNA)1555G点突变与遗传性耳聋的关系及突变家系对氨基糖甙类抗生素(AmAn)耳毒敏感性差异的原因.方法:收集10个遗传性耳聋家系,抽取外周血,提取DNA;PCR扩增mtDNA目的片段,以A1w 26 I环限制性内切酶检测1555G点突变;对mtDNA 12SrRNA及16SrRNA基因测序.按有无AmAn用药听力差别以及用药至发病间隔将10个家系分为AmAn耳毒敏感及不敏感两类,分析两种表型与基因序列变化之间的关系.结果:经酶切及测序证实,10家系均含mtDNA1555G点突变.表型分析显示AmAn耳毒敏感及不敏感家系各5个.基因测序显示:mtDNA 16SrRNA基因序列变化为:2230G点突变、2230AG插入、2243AG插入,均出现在AmAn耳毒敏感家系中,呈母系遗传;不敏感家系中未发现.结论:单纯1555G点突变家系表现为无诱因的渐进性遗传性耳聋或先天性耳聋;1555G突变合并16SrRNA基因突变者对AmAn高度敏感,表现为家族性AmAn敏感致聋.
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膀胱癌原癌基因c-Ha-ras点突变的研究
膀胱癌是泌尿系统常见的肿瘤,在我国是第8位常见的肿瘤,在所有膀胱癌中,上皮性肿瘤占98%,其中移行性上皮性肿瘤占95%,表浅膀胱肿瘤初次治疗后的复发率高达约60%[1].
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由MDS进展为急性白血病患者线粒体DNA D-loop区的突变
目的:研究由MDS进展为急性白血病患者线粒体DNA D-loop区的突变.方法:提取4例由MDS进展的白血病患者骨髓以及口腔上皮组织的线粒体DNA,对线粒体DNA D-loop区两个高变区(HVI和HV2)进行PCR扩增,通过直接测序的方法对PCR产物的基因序列进行检测.结果:在4例急性白血病患者骨髓标本中有3例检测到突变,突变位点共4个,计算突变率为:75％,突变类型为碱基置换突变和碱基缺失.结论:在由MDS进展的白血病患者中检测到D-loop区的突变,可能与MDS的疾病进展有关.
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结直肠癌k-ras突变与ERCC1mRNA表达相关性研究
目的:探讨结直肠癌k-ras基因突变与ERCC1mRNA表达相关性,为结直肠癌化疗提供理论依据.方法选择2012年1月~2014年6月间我院送检的结直肠癌病例92例,应用直接测序法检测肿瘤组织k-ras基因突变情况,应用RT-PCR相对定量分检测肿瘤组织ERCC1mRNA表达水平.结果:92例结直肠癌患者肿瘤组织中,共有29例发生了k-ras突变,突变发生率为31.5%.k-ras突变型患者ERCC1mRNA表达水平显著高于k-ras野生型患者(P<0.05).不同肿瘤长度、浸润深度、分化程度、临床分期及淋巴结转移患者ERCC1mRNA表达水平(△CT)无统计学差异(P>0.05).Pearson相关分析显示ERCC1mRNA表达水平与肿瘤长度、浸润深度、分化程度、临床分期及淋巴结转移无相关性(P>0.05),与k-ras突变发生呈正相关(r=0.667,P<0.05).结论:结直肠癌k-ras突变与ERCC1mRNA表达密切相关,二者可能与结直肠癌化疗联合西妥昔单抗治疗耐药有一定关系.
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寒冷性荨麻疹研究进展
寒冷性荨麻疹(Cold urticaria,CU)是暴露于寒冷后复温的几分钟内发生的风团.寒冷性荨麻疹依据有无家族史,分为家族性和获得性.寒冷性荨麻疹的病因及其发病机制目前尚不完全清楚,目前已报道CIAS1基因、NLRP12基因、PLCG2基因和NLRC4基因是家族性寒冷性荨麻疹的致病基因,除此之外,可能还存在其他致病基因.迄今为止在多个家族性寒冷性荨麻疹家系中已发现16个CIAS1基因突变,6个NLRP12基因突变,1个PLCG2基因突变和1个NLRC4基因突变位点.本文就寒冷性荨麻疹的研究进展做一综述.
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乙型肝炎病毒准种对干扰素治疗慢性乙型肝炎的影响
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)准种与慢性乙型肝炎病人(CHB)对干扰素(IFN)应答的关系.方法在接受IFN治疗的病人中,选择以PCR加RFLP方法测定为A1896或T1762-A1764突变株感染者各5例,应用克隆加限制性片段长度多态性(RFLP)方法检测A1896和T1762-A1764突变,以了解每位病人的准种池中这两种突变株的比例与IFN应答之间的关系.结果在PCR检测为T1762-A1764突变株感染者中,3例应答者均为检出A1896突变株,1例非应答者也如此,另1例非应答者A1896突变株占40%.在PCR检测为A1896突变株感染者中,2例应答者的A1896突变株在准种池中的比例(70%和88%)低于另2例对IFN无应答者(均为100%),其中1例50%克隆为T1762-A1764突变株;另1例非应答者A1896突变株和T1762-A1764突变株比例分别为60%和30%.结论 HBV准种分析可以更准确地反映突变与CHB病人对IFN应答之间的关系.T1762-A1764突变株在准种池中的比例愈高者对IFN应答率愈良好;A1896突变株情况似乎正相反.
