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自噬在血管性痴呆发病中的作用研究
目的 研究自噬在血管性痴呆(VD)发病中的作用及自噬抑制剂对其的影响.方法 180只SD大鼠随机分为假手术组、VD组和自噬抑制剂干预组(自噬抑制剂组),每组又分为术后1、2、4、8、12周亚组.采用四血管阻断法制作VD大鼠模型,自噬抑制剂组大鼠在术前1h给予渥曼青霉素0.5 mg/kg腹腔注射.用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力;免疫组化SP法检测大鼠海马CA1区自噬相关蛋白Bec-lin-1、Cathepsin B的表达,Western-blotting法检测自噬活性微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ与Ⅰ的比值.结果 与假手术组比较,VD组和自噬抑制剂组各亚组大鼠的学习、记忆能力明显降低;海马CA1区Beclin-1、Cathepsin B蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值明显升高(P ＜0.05 ～0.01),并均以术后第4周为高.而自噬抑制剂组各亚组大鼠的学习、记忆能力明显好于,海马CA1区Beclin-1、Cathepsin B蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值明显低于VD组(P ＜0.05～0.01).结论 VD大鼠的认知功能减退,海马自噬相关蛋白表达及自噬活性明显增高;自噬抑制剂对其有改善及抑制的效果.自噬在VD发病中起了重要的作用.
关键词： 血管性痴呆 自噬 自噬相关蛋白 微管相关蛋白1轻链3 自噬抑制剂 -
颅脑创伤后大鼠脑组织自噬表达变化及渥曼青霉素保护作用的研究
目的 探索颅脑创伤后大鼠脑组织自噬表达变化及渥曼青霉素的保护作用,为临床治疗脑外伤提供实验依据.方法 将120只健康成年雄性SD大鼠随机分为3组[假手术组(A组)、颅脑创伤组(B组)、渥曼青霉素治疗组(C组)],每组40只.B、C组使用PinPointTM精密颅脑创伤撞击器、直径4mm的打击头制作中度创伤性脑损伤模型,其中C组于建模前10min侧脑室注入渥曼青霉素(0.5μg/kg),B组注入含有二甲基亚砜(DMSO)的PBS(25μl/kg);A组暴露硬脑膜但不撞击,建模前注入含有DMSO的PBS(25μl/kg).采用Western blot检测自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ,p62)表达水平,应用大鼠行为学评分观察大鼠颅脑创伤后神经功能的变化,采用干湿法检测脑组织含水量.结果 与A组相比,B组和C组大鼠在颅脑创伤后24、72、168h脑组织LC3-Ⅱ表达水平增加,p62表达水平减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与B组相比,C组大鼠在颅脑创伤后24、72、168h脑组织LC3-Ⅱ表达水平减少,p62表达水平增加,差异均有统计学意义(均P＜0.05);伤后72、168h脑组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低(均P＜0.05).颅脑创伤后48、72h,C组大鼠行为学评分均高于B组(均P＜0.05).颅脑创伤后72h,B组和C组脑组织含水量均较A组明显增加(均P＜0.05),但C组较B组明显减少(P＜0.05).结论 渥曼青霉素能明显抑制颅脑创伤后过度的自噬反应,减轻脑水肿,改善大鼠神经功能.
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姜黄素联合阿糖胞苷对人急性髓系白血病细胞KG1a增殖、自噬及凋亡的影响
目的 探讨姜黄素( CUR)联合阿糖胞苷( Ara-C)对人急性髓系白血病KG1a细胞株增殖、凋亡的影响,及与自噬间的联系.方法 MTT法筛选CUR及Ara-C的佳联合浓度并检测联合效应,分析 CUR 和 Ara-C 对 KG1a 细胞的增殖、自噬、凋亡和细胞周期的影响,评估CUR和Ara-C的联合用药效果.结果 CUR和Ara-C均对KG1a细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),且呈一定的剂量、时间依赖性.经40 μmol·L-1CUR和0.5 μmol·L-1Ara-C联合处理的细胞抑制率明显高于各自剂量的单用组,经3-MA预处理的细胞存活率明显降低(P<0.05).吖啶橙染色观察到细胞内出现自噬泡,联合用药的表达率高于单用组,且能被3-MA抑制.联合组细胞的凋亡率高于单用组,经3-MA预处理组 细胞凋亡率均高于各自单用组( P<0.05).细胞在 G0/G1期比例明显多于S期. caspase-3、LC3、Beclin-1 基因的表达上调,Bcl-2基因则下调(P<0.05).联合组caspase-3和Be-clin-1的蛋白量明显高于单用组(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值升高. 3-MA预处理组的Beclin-1表达降低,caspase-3的表达则升高(P<0.05).结论 姜黄素能诱导KG1a细胞自噬与凋亡,并能提高白血病细胞对阿糖胞苷的敏感性,自噬抑制剂3-MA不仅能抑制该自噬,而且能促进其凋亡.
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辣椒素通过抑制自噬活性抑制实验性自身免疫性神经炎
目的 观察辣椒素对大鼠实验性自身免疫性神经炎(EAN)的影响并探讨其机制.方法 ♂ Lewis大鼠采用P257-81多肽与完全弗氏佐剂的混合液足底注射诱导EAN模型.在免疫后0.5h,通过腹腔注射给予雷帕霉素(2.5 mg·kg-1),免疫后1h给予辣椒素(1 mg· kg-1·d-1)灌胃,共15 d.每天观察大鼠发病情况,并进行神经系统体征临床评分和体质量测量,坐骨神经病理切片进行HE染色和劳克坚牢蓝染色,透射电镜观察坐骨神经的超微结构.采用ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)水平;Western blot检测坐骨神经中自噬相关蛋白的表达.结果 与EAN组比较,EAN+辣椒素组大鼠从免疫后d7～16神经系统体征临床评分明显降低,体质量从免疫后d3～16明显增加(P＜0.05),髓鞘脱失现象明显减少,炎症细胞浸润数明显减少(P＜0.05),血清中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6水平明显降低(P＜0.05),大鼠坐骨神经轴突中自噬体数量明显减少(P＜0.05),坐骨神经中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达及LC3-Ⅱ/LC3-I的比值均明显下调,p62的表达明显上调(P＜0.05).雷帕霉素部分逆转了辣椒素的作用.结论 辣椒素能抑制实验性自身免疫性神经炎,其机制与抑制细胞自噬活性有关.
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饥饿对大鼠大脑皮质自噬相关蛋白 LC3、Beclin 1表达的影响
目的：观察饥饿对大鼠大脑皮质微管相关蛋白1轻链3（ LC3）、Beclin 1自噬相关蛋白表达的影响。方法将70只SD大鼠随机分为3组，对照组10只、短期组30只（饥饿1、2、3 d各10只）、长期组30只（饥饿5、7、9 d各10只）。对照组正常饮食，短期组和长期组均采取全饥饿处理。对照组于饥饿起点、短期组与长期组分别于相应饥饿终点断头取脑，采用Western blot法检测大脑皮质的LC3与Beclin 1。结果短期组饥饿3 d大脑皮质LC3与Beclin 1较对照组表达上调（P＜0．05、0．01），长期组较对照组及短期组大脑皮质LC3与Beclin 1表达上调（P均＜0．01）。短期组饥饿1 d与2 d时大脑皮质LC3、Beclin 1表达比较，P均＞0．05；长期组饥饿7 d与9 d时大脑皮质Beclin 1表达比较，P＞0．05。结论短期饥饿2 d内大鼠大脑皮质LC3、Beclin 1表达未发生明显改变，随饥饿时间延长，大鼠大脑皮质LC3与Beclin 1表达上调。
关键词： 自噬 饥饿 大脑皮质 微管相关蛋白1轻链3 自噬相关蛋白 -
二氢杨梅素对高脂诱导动脉粥样硬化兔自噬相关蛋白表达的影响
目的:探讨二氢杨梅素对高脂诱导动脉粥样硬化(AS)兔主动脉弓自噬相关蛋白表达的影响,以阐明其抗AS的分子机制.方法:24只健康雄性新西兰兔随机分为对照组、高脂组、高脂+低剂量(10mg·kg-1·d-1)二氢杨梅素组和高脂+高剂量(40 mg·kg-1·d-1)二氢杨梅素组.高脂组给予高脂饲料,高脂+低二氢杨梅素组给予高脂饲料同时每天灌胃二氢杨梅素.24周后处死动物,检测血脂水平,取胸主动脉行苏丹Ⅳ染色检测斑块面积,颈总动脉石蜡切片,HE染色观察病理形态学变化,Western blot检测胸主动脉中自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1和p62/SQSTM1的表达.结果:与对照组比较,高脂组的血清HDL、LDL、TC和TG水平均显著升高(均P＜0.05),胸主动脉管壁内表面呈弥漫性隆起,形成明显AS斑块,AS斑块区域占血管内膜总面积的百分比与对照组相比显著增加(P＜0.01),颈总动脉内膜增生,结构不完整,管腔形成明显AS斑块,斑块中大量泡沫细胞和脂质沉积,血管内中膜界限不清楚.高脂组兔主动脉弓中的Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著降低(均P＜0.05),而p62的表达显著上调(P＜0.05).与高脂组比较,高脂+高剂量二氢杨梅素组的血清HDL、LDL和TC水平均显著降低(均P＜0.05),胸主动脉管壁内表面隆起减少,AS斑块区域占血管内膜总面积的百分比显著降低(P＜0.01),总颈动脉AS病变程度明显减轻,主动脉弓中的Bec-lin-1、LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著增加(均P＜0.05),而p62的表达显著下调(P＜0.05).高脂+低剂量二氢杨梅素组上述指标与高脂组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论:二氢杨梅素能抑制高脂诱导新西兰兔AS的形成,其机制与促进细胞自噬有关.
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Apelin-13对兔脑外伤模型中自噬相关蛋白表达中的影响及其机制
目的 观察Apelin-13对兔脑外伤自噬相关蛋白的影响,探讨其对兔脑外伤后自噬相关蛋白调节的作用机制.方法 取健康雄性新西兰大白兔30只,随机分为假手术(Sham)组、生理盐水(Saline)组、Apelin-13组.Apelin-13组和Saline组在建立脑外伤模型前10 min,分别注射Apelin-13(0.3μg/g体质量)或等量生理盐水于侧脑室,然后利用Western blot检测脑外伤后24、48 h组大脑皮质自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62、Beclin-1和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)等的表达.结果 与Sham组比较,在脑外伤后24、48 h,Saline组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(1.147±0.125),Beclin-1的蛋白表达(1.035±0.112),均显著上调(P＜0.01),同时bcl-2、p62的蛋白表达水平(0.613±0.087、0.608±0.085)显著下调.然而,与Saline组比较,Apelin-13组可显著下调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(0.226 ±0.048)和Beclin-1的蛋白表达水平(0.181±0.039,P＜0.01),同时显著上调bcl-2和p62的表达水平(0.385±0.062和0.360±0.035),亦明显降低Beclin-1/bcl-2的比值(0.704±0.064).结论 Apelin-13可以明显抑制脑外伤后兔模型大脑皮质细胞的自噬活性,这一作用可能是通过调节Beclin-1、bcl-2蛋白表达水平来实现的.
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Apelin-13对高血压性肾纤维化的影响及机制研究
目的 探讨血管紧张素受体AT1相关的受体蛋白(APJ)激动剂Apelin-13对高血压性肾纤维化的影响及其机制.方法 12周龄雄性自发性高血压大鼠随机分为对照组、1μg/(kg·d) Apelin-13组、10 μg/(kg·d)Apelin-13组、100 μg/(kg·d)Apelin-13组;Apelin-13通过尾静脉给药.测量大鼠24 h尿蛋白量、血清肌酐和尿素氮浓度.采用套尾法测量尾动脉收缩压,HE染色和Masson染色观察大鼠肾脏组织学改变,Western blot检测肾脏组织中自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1和p62的表达.结果 与对照组比较,10 μg/(kg·d)Apelin-13组、100 μg/(kg·d) Apelin-13组以剂量依赖方式降低大鼠收缩压、24 h尿蛋白量、血清肌酐和尿素氮水平、肾脏损伤评分和胶原容积分数(均P＜0.05),减轻肾小管上皮细胞水肿,减少间质胶原沉积,降低肾间质纤维化程度.10μg/(kg·d) Apelin-13组、100 μg/(kg·d) Apelin-13组也以剂量依赖方式增加大鼠肾脏组织中LC3-Ⅱ表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Beclin-1表达,降低p62表达(均P＜0.05).结论 Apelin-13抑制高血压性肾纤维化的进展,其机制可能与Apelin-13抑制细胞自噬有关.
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自噬相关蛋白Beclin-1表达与缺血性心肌病的相关性
目的 探讨自噬相关蛋白Beclin-1表达与缺血性心脏病的相关性.方法 病例组选自贵州医科大学法医司法鉴定中心于2013年7月至2016年12月接收的尸检案例中被确诊为“缺血性心肌病”的80例死者,对照组为同期接收的尸检案例中经病理组织学检查确认无心肌组织病变的122例死者.用免疫组织化学检测Beclin-1在病例组和对照组心肌细胞中的表达.通过建立广义线性模型,调整多个混杂因素(包括性别、年龄、身高、体质指数、左心室壁厚度、右心室壁厚度、酗酒史、Gensini评分、心肌梗死史、是否合并高血压、慢性肾病和慢性呼吸系统疾病),评估Beclin-1和缺血性心肌病发病的相关性.结果 Beclin-1在心肌细胞中的表达与缺血性心肌病呈正相关(OR=1.2,95％CI为1.1～1.3,P＜0.001).即在调整其他混杂因素后,Beclin-1对缺血性心肌病的作用是:Beclin-1的表达每增加0.01个单位,缺血性心肌病风险增加20％.结论 Beclin-1可能是缺血性心肌病的独立危险因素.
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高迁移率族蛋白B1对宫颈癌细胞化学治疗敏感性的影响及其机制
目的:探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)对宫颈癌细胞化学治疗敏感性的影响及其机制.方法:采用Western印迹法检测宫颈癌细胞HeLa和CaSki经不同药物浓度顺铂处理后LC3,Beclin1及P62的表达水平,检测使用自噬抑制剂和/或顺铂处理后宫颈癌细胞HeLa和CaSki中LC3,Beclin1及P62的表达水平;采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖水平.构建HeLa-shHMGB1,CaSkishHMGB1,HeLa-CTR及CaSki-CTR的稳定细胞系.以CCK-8检测上述细胞系顺铂半数抑制浓度(half maximum inhibitory concentration,IC50)水平;Western印迹法检测上述细胞系中HMGB1, LC3,Beclin1及P62的表达水平.结果:在一定浓度范围内,随着顺铂药物浓度的增加,宫颈癌细胞HeLa和CaSki中LC3及Beclin1的表达增加,P62表达降低.与单用顺铂组相比,顺铂联合自噬抑制剂组细胞存活率更低(P＜0.05).在宫颈癌细胞中,HMGB1的表达与顺铂药物敏感性有关(P＜0.05),与LC3,Beclin1表达呈正相关,与P62表达呈负相关.结论:HMGB1可能通过调控宫颈癌细胞内自噬的水平,影响其对顺铂的敏感性.铂类药物结合自噬抑制剂可能成为宫颈癌治疗的新策略.HMGB1可能成为预测化学治疗药物敏感性的分子标志物.
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二氢杨梅素调控自噬抑制氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的研究
目的 观察二氢杨梅素(DMY)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响,并探讨自噬在其中的作用.方法 DMY(0.01、0.10、1.00和10.00μmol/L)预处理HUVECs 2 h,用100.0 mg/L ox-LDL继续培养细胞24 h.以辛伐他汀作为阳性对照组.采用噻唑蓝法检测细胞活力,Hoechst 33258染色观察细胞核形态,透射电镜观察自噬体,Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1和p62/SQSTM1的表达,观察自噬抑制剂对DMY作用的影响.结果 与对照组比较,ox-LDL组细胞的存活率降低(<0.05),细胞核呈集中高强度蓝色荧光,固缩致密浓染或碎块状致密浓染,颜色发白,细胞核较小,形态不规则,自噬体和自噬溶酶体数量增加;Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调,而p62的表达下调(<0.05).与ox-LDL组比较,0.1、1.0和10.0μmol/L DMY预处理组细胞存活率均升高;细胞核荧光强度降低,核固缩致密浓染和碎块状致密浓染减少,形态较规则;1.0μmol/L DMY预处理组的自噬体和自噬溶酶体数量增加;Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调,而p62的表达下调(<0.05).自噬抑制剂3-MA部分抵消DMY抑制ox-LDL诱导的HUVECs存活率降低(<0.05).结论 DMY能抑制ox-LDL诱导的HUVECs损伤,其机制与诱导自噬有关.
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转化生长因子β1体外诱导肾脏成纤维细胞活化中自噬的变化
目的 探索转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导肾脏成纤维细胞活化过程中自噬的变化情况.方法 (1) 10 μg/L TGF-β1刺激大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F)不同时间(0、12、24 h),倒置显微镜观察细胞形态变化,Western印迹检测细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)表达情况.(2)不同浓度TGF-β1(0、2、5、10、15、20 μg/L)刺激细胞1h,10 μg/L TGF-β1刺激细胞不同时间(0 min、7 min、15 min、30 min、1h、2h、4h、8h、12h),Western印迹检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62及自噬相关蛋白总哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(t-mTor)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTor)、Beclin 1表达情况.(3)血清饥饿处理细胞2.5 h后,加入10μg/L TGF-β1刺激细胞不同时间(0、1、4h),倒置显微镜观察细胞形态变化,Western印迹检测LC3、p62表达水平.结果 (1)TGF-β1刺激NRK-49F细胞后,细胞形态逐渐由星状转变为长梭形;随着刺激时间的延长,细胞活化标志物α-SMA、Col Ⅰ表达水平也逐渐增加(均P＜0.05).(2)TGF-β1增加NRK-49F细胞中p62蛋白表达(4h左右达峰值),同时测得细胞中p-mTor一过性增加(约30 min时达峰值)、Beclin1表达量逐渐降低(均P＜ 0.05).(3)TGF-β1降低了血清饥饿处理后的NRK-49F细胞中LC3-Ⅱ的表达,同时促使细胞p62蛋白表达升高(均P＜0.05).结论 在TGF-β1体外诱导肾脏成纤维细胞活化过程中,细胞自噬活性受到抑制,进而可能促进肾间质纤维化的发生和发展.
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细胞自噬影响实验性大鼠肝纤维化进展的分子机制以及药物抗肝纤维化的作用研究
目的 探讨细胞自噬影响实验性大鼠肝纤维化进展的分子机制以及药物抗肝纤维化的作用.方法 将49 只SD 老鼠随机分成正常对照组、模型对照组、药物治疗组[熊去氧胆酸(UDCA)组、雷帕霉素(RAPA)治疗组、羟氯喹(HCQ)治疗组、羟氯喹和熊去氧胆酸(HCQ+UDCA)治疗组、雷帕霉素和羟氯喹(RAPA+HCQ)治疗组].造模后分给予媒介、自噬促进剂雷帕霉素(RAPA)、自噬抑制剂羟氯喹(HCQ)、熊去氧胆酸(UDCA)单用或者合用灌胃.治疗4周后,处死所有的老鼠收集肝标本.HE 染色检测肝病理变化.Western blot技术检测自噬相关分子ATG-5、Beclin-1 以及 LC-3 Ⅱ.同时,血液标本生物化学方法检测肝功能以及单胺氧化酶(MAO).结果 与模型对照组相比,RAPA治疗组大鼠肝重、肝指数、胶原指数、肝纤维化评分均显著性升高(P<0.05),而其他治疗组大鼠显著降低(P<0.05).但病理显示HCQ或者与其他药物合用不能改善肝组织细胞坏死和脂肪样变性.Western blot 显示与正常对照组肝组织相比,模型对照组肝组织中ATG-5、Beclin-1、LC3-Ⅱ表达量显著增加(P<0.05);与模型对照组鼠肝组织相比,UDCA治疗组和HCQ+UDCA治疗组肝组织自噬相关蛋白表达显著性降低(P<0.05),其他治疗组与模型对照组相比ATG-5、Beclin-1、LC3-Ⅱ表达量明显增强.此外,所有的治疗组大鼠血清TBIL、AST、ALT 比模型对照组显著性降低(P<0.05);而与模型对照组相比,RAPA治疗组MAO明显增加(P<0.05),其他治疗组则明显降低(P<0.05).结论 肝纤维化可能涉及到肝脏中细胞自噬水平变化,调节细胞自噬既影响肝脏肝纤维化同时也影响肝脏组织细胞变性以及肝功能.UDCA 改善肝脏肝纤维化可能与其调节细胞自噬有关,调节细胞自噬可能为治疗肝纤维化一个新的切入点.
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疟原虫和弓形虫的自噬作用研究进展
自噬(autophagy)是一种十分保守且普遍存在于真核细胞的代谢途径.虽然原生生物的自噬具有很多特殊性,但随着近年来对酵母和哺乳动物自噬机制的深入研究,顶复门原虫(Apicomplexa)的代表性生物疟原虫(Plasmodium)和弓形虫(Toxoplasma gondii)的自噬研究也取得了一定进展.疟原虫和弓形虫能够进行经典的自噬代谢,也涉及一种和顶质体相关的非典型代谢机制.在顶复门原虫中也发现了许多经典的自噬相关蛋白,其在自噬代谢途径中的功能和分子机制受到广泛关注.本文重点对疟原虫和弓形虫的自噬研究进展进行综述.
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参附强心丸对心肾综合征模型大鼠心肌细胞中LC3b、Bax表达的影响Δ
目的：研究参附强心丸对心肾综合征（CRS）模型大鼠心肌细胞中自噬相关蛋白LC3b和促凋亡基因Bax表达的影响。方法：取大鼠随机分为假手术组（水）、模型组（水）、阳性对照组（卡托普利片2.3 mg/kg）和参附强心丸高、中、低剂量组[13.2、6.6、3.3 g（生药）/kg]，每组10只，除假手术组外其余各组大鼠采用腹主动脉缩窄合并肾脏急性缺血再灌注法复制CRS模型；术后8周开始ig相应药物，每天1次，连续4周。末次给药后24 h检测各组大鼠血浆中肌酐（Cr）、醛固酮（ALD）含量和心肌组织中LC3b、Bax蛋白表达，计算心室指数，观察心肌组织形态学变化。结果：与假手术组比较，模型组大鼠血浆中Cr、ALD含量，心室指数和心肌组织中LC3b蛋白表达均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）；心肌细胞出现胞浆红色缺失，心肌横纹排列紊乱，细胞间隙有纤维化加重等现象。与模型组比较，阳性对照组和参附强心丸高剂量组大鼠血浆中Cr、ALD含量（除阳性对照组）和心肌组织中LC3b蛋白表达均明显降低，心肌组织中Bax蛋白表达明显降低（P＜0.05或P＜0.01），心肌细胞病理变化得到改善；参附强心丸低、中剂量组大鼠的心室指数明显降低（P＜0.05）。结论：参附强心丸可降低CRS模型大鼠血浆中Cr、ALD含量，抑制心肌细胞的自噬和凋亡。
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细胞自噬相关蛋白8及其连接系统与头颈部恶性肿瘤
细胞自噬相关蛋白（ATG）8-磷脂酰乙醇胺（PE）是迄今唯一定位于细胞自噬体膜上的蛋白质，与细胞自噬体的形成密切相关。细胞自噬泡通过细胞骨架蛋白运送至溶酶体，其外膜与溶酶体膜结合形成细胞自噬溶酶体。细胞自噬体内膜及其包含的内容物在酸性环境和溶酶体酶的共同作用下降解所产生的大分子通过膜的通透酶释放入细胞质。ATG8-PE连接系统是调控细胞自噬的核心，当细胞受到细胞自噬诱导时，大量的ATG8蛋白以膜结合形式定位于细胞自噬体的内膜和外膜上，因此ATG8-PE是检测细胞自噬的良好标志物。自噬体膜上任何ATG复合物的变异，都将导致细胞自噬体形成缺陷。在某些人类的肿瘤，如结肠癌、乳腺癌和肺癌中可观察到ATG蛋白表达的增加，微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ缺失可能与肿瘤的不良预后有关。本文就细胞自噬及其分子机制、ATG8连接系统、ATG在头颈部恶性肿瘤中的表达等研究进展作一综述。
关键词： 细胞自噬 自噬相关蛋白 微管相关蛋白1轻链3 头颈部 恶性肿瘤 -
丹酚酸B对高糖干预下的人肾小管上皮细胞自噬相关蛋白的影响
目的 探究丹酚酸B对高糖干预下的人肾小管上皮细胞自噬相关蛋白的影响.方法 根据人近端肾小管上皮细胞HK-2细胞培养方式的不同,分为对照组、葡萄糖组和实验组,对照组加入5.5 mmol/L的葡萄糖;葡萄糖组加入葡萄糖的浓度分为10、20和30 mmol/L;实验组在培养基中分别加入丹酚酸B和葡萄糖(30 mmol/L),丹酚酸B的浓度分为0.1、1、10和100 μmol/L,培养24 h.使用蛋白提取试剂盒分别提取3组培养细胞中的总蛋白,采用Bradford法测定不同培养组细胞自噬相关蛋白的含量,进行分析比较.结果 随着葡萄糖刺激浓度的增高,p62蛋白表达增加.24 h后,高糖可诱导HK-2细胞自噬相关蛋白p62表达增加,LC3表达减少,且呈剂量依赖性.与对照组相比,随着丹酚酸B干预剂量的增高,24 h后的细胞LC3的表达增加,不同剂量丹酚酸B干预可减少高糖诱导下的p62蛋白的表达增加,同时LC3的表达得到明显恢复,且呈剂量依赖性(P<0.05).Logistic回归分析的结果显示,LC3蛋白含量、p62蛋白含量是影响细胞自噬的独立影响因素.结论 在高糖的干预下,不同剂量丹酚酸B干预可减少高糖诱导下的p62蛋白的表达增加,同时LC3的表达得到明显恢复,且呈剂量依赖性.
