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人参皂苷Re对大鼠心室肌细胞钠、钾离子通道的影响
目的:观察人参皂苷Re对大鼠心室肌细胞电压依赖性的钠、钾离子通道的影响,揭示其抗心律失常的作用机制。方法:采用酶分法获得单个大鼠心室肌细胞,在全细胞膜片钳技术模式下,记录电压依赖性钠通道、瞬时外向钾通道和内向整流钾通道电流,并观察不同浓度的人参皂苷Re对电流幅度的影响。结果:给予人参皂苷Re(10,100μmol· L-1)后钠通道电流幅度呈现减小的趋势,对通道电流幅度的抑制率分别为(25.5±5.7)%(n=3)和(46.2±18)%(n =4)。给予人参皂苷Re(10,100μmol· L-1)对瞬时外向钾电流幅度略有抑制,洗脱后电流恢复,其中100μmol· L-1人参皂苷对电流的抑制率为(13±9)%(n=3)。给予人参皂苷Re(10,100μmol· L-1)后内向整流钾电流幅度呈现逐渐减小的趋势,药物洗脱后电流完全恢复,(10,100μmol· L-1)对通道电流幅度的抑制率分别为(16.3±8.7)%(n=5)和(35.4±11.2)%(n=5)。结论:人参皂苷Re能够抑制心室肌细胞电压依赖性的钠通道、瞬时外向钾通道和内向整流钾通道电流发挥抗心律失常的作用。
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二十二碳六烯酸对心室肌细胞离子通道的影响
近年来,n-3多不饱和脂肪酸(n-3PUFAs)对心血管的有益作用已受到广泛重视.大量研究表明n-3PUFAs具有抗心律失常作用,能降低冠心病的猝死率及心肌梗死后恶性心律失常的发生率[1].基于这些研究结果,在心血管疾病的一级和二级预防中,美国和欧洲等心脏病学会推荐每日摄入小剂量n-3PUFAs[2].目前,n-3PUFAs抗心律失常的机制仍不完全清楚.n-3PUFAs主要包括二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA).本文通过膜片钳技术探讨DHA对大鼠心室肌细胞静息电位(RP)、动作电位时限(APD)、延迟整流性钾通道电流(IK)及内向整流性钾通道电流( IKl)的影响,阐述DHA抗心律失常的可能机制.1.材料和溶液组成:Axopatch 700B膜片钳放大器、Digi-Data 1322型数/模(或模/数)转换器、pClamp 9.0脉冲发放和数据采集软件(美国Axon Instruments公司).DHA(美国Sigma公司)以无水乙醇配制成50 mmol/L的母液,分装避光保存于-80℃备用.使用时无水乙醇的终浓度<0.4%,以避免无水乙醇对离子通道的影响.牛血清白蛋白(BSA,美国Sigma公司)配制成2 mg/ml,4℃保存.
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恒流灌注分离心肌细胞及膜片钳记录钾电流方法学探讨
目的 探讨膜片钳实验中豚鼠、大鼠心肌细胞急性分离过程中的观察指标和影响因素,并进行膜片钳记录.方法 使用改进的Langendorff恒流灌注法分离心肌细胞和全细胞膜片钳记录钾通道电流.结果 分离即刻,存活细胞可达80%以上,复钙后约40%~50%呈静息状态,余出现自发性收缩,存活细胞能够进行膜片钳封接,于室温KB液中可成活8 h以上.结论 使用恒流灌注法,观测灌注压的变化,可以较客观的掌握酶解消化的程度,利于获取生理状态良好的心肌细胞.且细胞能够进行膜片钳实验.
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人外周血淋巴细胞膜电压依赖性钾通道的特性分析
淋巴细胞是直接参与机体免疫的重要效应细胞.淋巴细胞膜上存在多种离子通道,其中主要为电压依赖性钾通道.目前,对鼠淋巴细胞该通道的研究较深入,它可分为n、n'和l型三种亚型,但对人外周血淋巴细胞膜上钾通道的研究较少.国内尚未见这方面的报道.本文采用膜片钳技术记录人外周血淋巴细胞电压依赖性钾通道电流,并对其进行特性分析,为研究其异常变化与某些疾病的关系提供实验依据.
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内向型整流钾通道IK,Ach电流在胚胎发育期的动力学变化
在研究不同发育时期的心肌细胞的乙酰胆碱激活的内向型整流钾通道电流IK,ACh的过程中,我们发现其动力学特性在胚胎的发育过程中发生变化.我们选用鼠胚胎心肌细胞E10.5-12.5d为发育早期的心肌细胞,E16.5-19.5d为发育晚期的心肌细胞.在对早期心肌细胞和发育晚期的心肌细胞的动力学特性的研究中我们发现:(1)加入乙酰胆碱早期心肌细胞动作电位具有频率减慢的现象,周期为不加乙酰胆碱的两倍.
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心肌细胞感染病毒后钙、钾通道电流及其表达改变和牛磺酸的作用
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对吸入麻醉药敏感性不同的果蝇脑神经元钾电流的研究
目的:以对吸入麻醉药具有不同敏感性的果蝇幼虫脑神经元为模型,利用膜片钳技术记录其钾电流,探讨吸入麻醉药的作用机制.方法:分离制备对吸入麻醉药敏感(S)、耐药(R)和野生(H)果蝇品系脑神经元,以膜片钳技术记录其全细胞钾电流.实验数据以"均数士标准差"表示,SPSS软件进行统计分析.结果:在果蝇晚三龄幼虫脑神经元上只记录到外向钾电流,未见其它电流成分.三品系脑神经元大小(细胞膜电容)没有显著性差异(P>0.05),而电流峰值有显著性差异:敏感>野生>耐药(P<0.05).结论:钾通道可能是吸入麻醉药的中枢作用位点之一.
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心房颤动与Kv1.5钾离子通道研究进展
心房纤颤(AF),简称房颤,是临床上常见的一种持续性快速心律失常,治疗效果欠佳.研究表明,心房电重构是房颤发生的主要原因,其中心房肌动作电位时间(APD)和心房有效不应期(AERP)缩短是电重构的基本特征,而心肌细胞膜离子通道是心肌细胞电活动的基础.钾离子的膜通道是心肌细胞膜中亚型多、影响其表达因素多的离子通道,而超快速延迟整流钾电流(IKur)是仅在心房肌发现的钾通道电流,其分子基础是Kv1.5钾通道[妇.研究[2]发现Kv1.5钾通道阻断剂对心房肌具有延长APD的作用.因此探索Kv1.5钾通道在房颤心肌电重构中的作用和表达对房颤的发生机制及临床用药具有重要意义.