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聚酰胺色谱法联合中压液相制备色谱法提取分离镰形棘豆中活性黄酮类成分
目的:对藏药镰形棘豆中黄酮类成分进行提取分离,并将得到的黄酮化合物进行抗人肺腺癌A549细胞的活性筛选.方法:镰形棘豆药材浸提液经乙酸乙酯萃取,该萃取部位通过聚酰胺柱色谱梯度洗脱,结合中压液相制备色谱法进一步纯化分离,获得单一黄酮化合物,通过高效液相色谱法(HPLC)、质谱法(MS)及核磁共振波谱法(NMR)对化合物进行分析、鉴定;采用CCK-8法,检测黄酮化合物对人肺腺癌A549细胞的抑制作用.结果:从镰形棘豆的乙酸乙酯部位分离得到2个黄酮类单体,鉴定为7-羟基二氢黄酮及2′,4′-二羟基二氢查尔酮,HPLC分析两者纯度均大于98％;CCK-8法结果显示,7-羟基二氢黄酮及2′,4′-二羟基二氢查尔酮均能显著抑制A549细胞活力,并呈量效关系,48 h的IC50值分别为137.6μg/mL和63.83μg/mL.结论:分离得到的2个黄酮成分对A549细胞均有良好的抑制作用,为后期抗肺癌机制研究提供了实验基础.聚酰胺柱色谱法具有富集黄酮的作用,适用于分离黄酮类成分,聚酰胺色谱法联合中压制备液相色谱法,提取分离镰形棘豆中黄酮类成分,简便易行,为分离黄酮类成分提供参考.
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藏药镰形棘豆的化学成分及其抗肿瘤活性研究
目的:研究藏药镰形棘豆Oxytropis falcata的化学组成及其抗肿瘤活性.方法:通过硅胶柱色谱、制备TLC分离纯化镰形棘豆的化学成分,通过NMR等波谱技术解析鉴定化合物结构,通过MTT法研究化合物1,3,5抑制人肝癌细胞HepG2、小鼠黑色素瘤细胞B16F10、人肝癌细胞SMMC-7721、人肝癌细胞HuH7以及人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖影响.结果:从镰形棘豆乙醇提取物中分离得到了5个化合物,分别为7-甲氧基二氢黄酮(7-methoxy flavanone,1),7-羟基二氢黄酮(7-hydroxy flavonone,2),2′,4′-二羟基查耳酮(2′,4′-dihydroxy chalcone,3),2′,4′-二羟基-4′-甲氧基查尔酮(2′,4′-dihydroxy-4′-methoxy chalcone,4),N-(2-苯乙基)肉桂酰胺(N-2-phenylethyl cinnamamide,5).四甲基偶氮唑盐比色(MTT)结果表明化合物3具有较好的抗肿瘤活性,其IC50分别为68.60,169.67,105.88,175.18,172.37μmol·L-1.结论:其中化合物5为首次从该种属中分离得到,化合物3对5种肿瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用.
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镰形棘豆总生物碱对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究
目的:研究镰形棘豆总生物碱的体内抗肿瘤作用并探讨其作用机制.方法:采用S180荷瘤小鼠模型,将生理盐水和总生物碱灌胃给药,阳性药环磷酰胺腹腔注射,给药后检测小鼠的体质量、抑瘤率、胸腺指数以及脾指数,并通过HE染色,光镜下观察肿瘤细胞的形态变化.结果:镰形棘豆总生物碱高、中、低剂量组对S180荷瘤小鼠的抑瘤率分别为74.8%、79.3%、69.4%,总生物碱各剂量组对S180荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数均高于环磷酰胺组和生理盐水组,但无显著性差异.实验过程中,小鼠体质量没有降低,未显示任何毒性反应.HE染色发现,给药组肿瘤间质可见炎细胞浸润.结论:镰形棘豆总生物碱具有明显的抗肿瘤作用,其机制可能是通过增强小鼠的免疫调节功能来实现的.
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HPLC法测定藏药镰形棘豆中鼠李柠檬素-3-O-β-新橙皮糖苷的含量
目的:建立镰形棘豆中鼠李柠檬素-3-O-β-新橙皮糖苷的含量测定方法,同时比较药材的不同部位经不同溶剂提取后所得含量.方法:采用HPLC法,色谱柱:Symmetry C<,18>柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相:1％乙酸水溶液-乙腈(79:21)；流速:1.0mL/min；检测波长:350nm.结果:鼠李柠檬素-3-O-β-新橙皮糖苷在20-100μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9995),平均回收率为99.49％,RSD=1.30％.溶剂对该化合物的提取率由高至低依次为甲醇,95％乙醇、水；药材叶中含量比根高.结论:本法简便、准确、重现性好,可用于该药材或相关制剂的质量控制；药材不同部位经不同溶剂提取所得含量差别较大.
关键词： 镰形棘豆 鼠李柠檬素-3-O-β-新橙皮糖苷 高效液相色谱 含量测定 -
藏药镰形棘豆鼠李柠檬素对免疫抑制小鼠非特异性免疫功能的影响
目的：探讨藏药镰形棘豆提取物鼠李柠檬素增强免疫的作用机制。方法选用昆明种小鼠，随机分为空白组、模型组、阳性药组及中药高、中、低剂量组，各给药组给予相应药物灌胃，连续10 d。第8日起，除空白组腹腔注射生理盐水外，其他各组均腹腔注射环磷酰胺，连续3d。通过巨噬细胞炭粒廓清试验、巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、免疫抑制小鼠器官指数测定，观察鼠李柠檬素对免疫抑制小鼠非特异性免疫功能的影响。结果与模型组和空白组比较，中药各剂量组能提高免疫抑制小鼠的吞噬活性、廓清指数和吞噬系数(P＜0.05)，增加免疫器官脏器指数；与阳性药组比较，中药各剂量组药效较低。结论藏药镰形棘豆鼠李柠檬素具有一定的免疫增强作用，可促进小鼠鸡红细胞免疫后脾细胞血清溶血素的形成。
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镰形棘豆中鼠李柠檬素抗炎作用研究
目的：观察鼠李柠檬素的抗炎作用,为寻找镰形棘豆抗炎活性成分提供实验依据。方法分别将昆明种小鼠及Wistar大鼠,随机分为模型组、萘普生组和鼠李柠檬素高、中、低剂量组,灌胃给药,连续7 d。通过二甲苯诱导小鼠耳肿胀、冰醋酸诱导小鼠腹腔毛细管通透性、蛋清致大鼠足跖肿胀、棉球致大鼠肉芽肿的方法,观察鼠李柠檬素对急慢性炎症动物模型的影响。结果鼠李柠檬素各剂量组和萘普生组对上述4种方法所致的炎症反应有一定的抑制作用,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。其中鼠李柠檬素高剂量组和萘普生组对肿胀的抑制作用较强,2组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论鼠李柠檬素具有一定的抗炎作用,是镰形棘豆发挥抗炎作用的重要成分之一。
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镰形棘豆生物碱对临床9种致病菌的抑制作用研究
目的：观察镰形棘豆生物碱提取物对9种常见致病菌的抗菌作用。方法以镰形棘豆为原料,提取生物碱,选择临床常见的4种革兰氏阳性菌和5种革兰氏阴性菌,采用琼脂扩散法对其体外抑菌活性进行评价,试管二倍稀释法测定其低抑菌浓度(MIC)和小杀菌浓度(MBC)。结果镰形棘豆生物碱提取物对9个菌种均有抑菌效果,抑菌作用敏感度与浓度呈良好的量效关系,其中对枯草杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌的抑菌效果优于其他各菌,MIC和MBC分别为0.95 mg/mL和1.91 mg/mL,而其他各菌种的MIC和MBC范围在1.91～7.63 mg/mL之间。结论镰形棘豆生物碱提取物具有较为广谱的抑菌作用,对革兰氏阳性菌的抑制作用比革兰氏阴性菌强。
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HPLC 同时测定藏药镰形棘豆中鼠李柠檬素和2',4'-二羟基查耳酮含量
目的 建立同时测定藏药镰形棘豆中鼠李柠檬素和2',4'-二羟基查耳酮含量的高效液相色谱方法.方法 色谱柱:Lichrospher C18 柱(5 μm,4.6 mm×250 mm);流动相:0.4%磷酸水溶液-甲醇(30:70);流速:1.0 mL/min;检测波长:266 nm;柱温:30 ℃.结果 鼠李柠檬素、2',4'-二羟基查耳酮分别在0.080～0.60 μg(r ＝0.999 8)、0.22～1.68 μg(r ＝1.000)范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率分别为98.8%(RSD＝1.17%)、99.0%(RSD＝1.15%).结论 本法快速、简便,结果准确、可靠,可用于镰形棘豆中鼠李柠檬素和2',4'-二羟基查耳酮的质量监控.
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HPLC法测定藏药镰形棘豆中鼠李柠檬素的含量
目的 建立镰形棘豆中主要活性成分鼠李柠檬素的含量测定方法.方法 采用HPLC法,色谱柱:Lichrospher C18柱(5 μm,4.6mm×250mm);流动相:0.4%磷酸水溶液-甲醇(20:80);流速:1.0 mL/min;检测波长:350nm.结果 鼠李柠檬素在4～30 μg范围内线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为99.7%,RSD=1.4%;5批镰形棘豆药材中鼠李柠檬素的平均含量为0.39%.结论 本法操作简便,结果准确,可用于镰形棘豆药材的质量控制方法之一.
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应用ITS2条形码鉴定藏药镰形棘豆
目的：对藏药镰形棘豆及其易混伪品进行分子鉴定，以确保该药材的质量及临床疗效。方法提取样本基因组DNA，对核基因ITS2片段进行PCR扩增并测序，并对所得序列进行同源性比较，利用MEGA软件进行相关数据分析，并构建基于ITS2序列的邻接（NJ）树。结果镰形棘豆物种种内K2P遗传距离为0，与其他混伪品的K2P遗传距离分布于0.068～0.084，构建的NJ树表明ITS2序列能够区分镰形棘豆与其他易混伪品。结论 ITS2序列作为DNA条形码可以方便快捷地鉴别镰形棘豆及其易混伪品，为其种质资源鉴定及临床安全用药提供了重要分子依据。
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镰形棘豆的化学成分研究
目的:研究镰形棘豆的化学成分.方法:90%乙醇冷浸提取,所得浸膏经柱色谱分离,通过波谱学方法鉴定化合物的结构.结果:分离鉴定了14个化合物,分别鉴定为:(-)-7-甲氧基-二氢黄酮[(-)-7-methoxy-di-hydroflavone,1],(-)-5-羟基-7-甲氧基-二氢黄酮[(-)-5-hydroxy-7-methyoxy-dihydroflavone,2],(-)-pinocembrin(3),(-)-7-羟基-二氢黄酮[(-)-7-hydroxy-dihydroflavone,4],4′-甲氧基-2′-羟基-查耳酮(4′-methoxy-2′-hydroxy-chalcone,5),2′,4′-二羟基-二氢查耳酮(2′,4′-dihydroxy-dihydrochalcone,6),2′,4′-二羟基查耳酮(2′,4′-dihydroxy-chalcone,7),(-)-maackiain(8),tetrahydroflemichapparin-B(9),dalbergin(10),N-苯甲酰基-2-苯基乙胺(N-benzoyl-2-phenylethylamine,11),rhamnocitrin-3-O-β-neohesperidoside(12).结论:所有化合物均为首次从该植物中分得.
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藏药镰形棘豆中黄酮类化学成分研究
目的:对藏药镰形棘豆Oxytropisfalcata的黄酮类化学成分进行研究.方法:通过正相硅胶柱色谱,Sephadex LH-20柱色谱,ODS反相色谱分离、纯化,用NMR,MS鉴定结构.结果:从镰形棘豆的氯仿萃取部分分离鉴定了8个黄酮类化合物,分别为2',4'-二羟基-4-甲氧基查尔酮(1),2',4'-二羟基查尔酮(2),5,7-二羟基-4'-甲氧基黄酮醇(3),7-羟基-4'-甲氧基二氢黄酮(4),3',7-二羟基-2',4'-二甲氧基异黄烷(5),2'-羟基-4'-甲氧基查尔酮(6),2'-甲氧基-4'-羟基查尔酮(7),2',4'-二羟基二氢查尔酮(8).结论:这些化合物均为首次从该植物中分离得到.
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镰形棘豆对SMMC-7721肝癌细胞增殖及MMP-2表达的影响
目的:观察镰形棘豆对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖及其基质金属蛋白酶-2(MMP-2)分泌量的影响.方法:以不同质量浓度(25,50,100,250,500 mg·L-1)的镰形棘豆挥发油、总多糖、总黄酮、总生物碱和总皂苷部位处理SMMC-7721细胞24 h后,采用MTT法检测各部位对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用;采用ELISA法测定挥发油部位和总黄酮部位处理SMMC-7721肝癌细胞24 h后细胞上清中MMP-2的分泌量;Real-time PCR法检测处理24 h后MMP-2 mRNA的转录情况.结果:MTT实验结果表明,挥发油和总黄酮部位抑制SMMC-7721细胞的增殖,并表现出一定的浓度依赖性.ELISA实验表明挥发油部位显著性地抑制MMP-2分泌量;Real-time PCR实验表明挥发油和总黄酮均显著抑制MMP-2 mRNA的表达.结论:镰形棘豆挥发油和总黄酮部位抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖活性,可能与其下调MMP-2的分泌量和转录水平有关.
关键词： 镰形棘豆 SMMC-7721肝癌细胞 基质金属蛋白酶-2 -
镰形棘豆诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及初步的机制研究
目的:观察镰形棘豆总黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及初步的机制探讨.方法:不同剂量的镰形棘豆总黄酮处理SMMC-7721细胞24 h后,MTT法观察总黄酮对细胞增殖的抑制作用;应用光学和荧光显微镜观察总黄酮对SMMC-7721细胞形态的影响;应用流式细胞仪检测SMMC-7721细胞周期的变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测总黄酮对SMMC-7721细胞凋亡的影响.结果:MTT实验结果表明,镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈现出一定的浓度依赖性.Hoechst33258染色结果显示,经镰形棘豆总黄酮处理的细胞出现了多种凋亡特征和超微结构的变化.镰形棘豆总黄酮作用SMMC-7721细胞后可观察到G1期细胞明显增多,凋亡细胞的比例升高,并且呈浓度依赖性.结论:镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,与其诱导细胞周期阻滞和使细胞形态发生变化而引起细胞凋亡的活性有关.值得进一步深入研究和阐述镰形棘豆抗肿瘤的作用机制.
关键词： 镰形棘豆 总黄酮 SMMC-7721肝癌细胞 细胞凋亡 -
藏药镰形棘豆的生药学鉴定
镰形棘豆Oxytropis falcate Bunge为豆科植物棘豆属的干燥全草,藏药名为莪达夏[1].生长于海拔2700～4600 m的河滩、沙地、沟谷、山坡、灌丛、草甸.主要产于我国的青海、甘肃南部、四川西部等省区.
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藏药镰形棘豆毒性及化学成分相关性分析
将镰形棘豆全草分为地上和地下部分,分别用不同溶剂提取得到地上水溶、地下水溶、地上脂溶、地下脂溶4种提取物.各提取物以大剂量(以生药量计为50 g·kg-1·d-1)连续灌胃小鼠15 d,各组小鼠外观和行为未见明显异常,但脏器系数、血液生化指标、组织病理切片等分析表明地上和地下脂溶性提取物对小鼠肝脏有轻中度损伤,地上和地下水溶性提取物及地下脂溶性提取物对小鼠肾脏有轻度损伤.化学成分分析表明地上和地下脂溶性提取物含有丰富的黄酮苷元,尤以地上部分含量较高,而多糖和蛋白含量较低;地上和地下水溶性提取物则含有较多多糖和蛋白,黄酮苷元含量较低.
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藏药镰形棘豆抗深Ⅱ度烧伤活性部位筛选
目的 优选出藏药镰形棘豆抗深Ⅱ度烧伤作用的活性部位.方法 采用热铜棒烫伤法建立SD大鼠深Ⅱ度烧伤模型,98只大鼠随机分为正常组、模型组、空白基质组、阳性对照组(湿润烧伤膏)和给药组(镰形棘豆总黄酮组、总多糖组、总生物碱组),分别每日2次给药.采用硫酸纸描图观察创面愈合情况,HE染色评价大鼠皮肤愈合进程.结果 与模型组相比,总黄酮组和总多糖组均能明显缩短大鼠脱痂时间(P＜0.01),促进皮脂腺和毛囊增生,表皮修复;且总黄酮组能够减轻炎性渗出(P＜0.01).与阳性对照组比较,总黄酮组脱痂时间和渗出时间无显著性差异,总多糖组脱痂时间无显著性差异.结论 初步实验表明,镰形棘豆抗深Ⅱ度烧伤活性部位为总黄酮、总多糖,两者均能明显促进大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合,提高同期愈合率,作用效果与阳性对照药相当.
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镰形棘豆黄酮类化合物对紫外线辐射引起的角质形成细胞损伤的保护作用
目的 探讨镰形棘豆黄酮类化合物对中波紫外线照射所致人角质形成细胞损伤的保护作用.方法 体外培养人角质形成细胞系,以60、90、120mJ/cm2中波紫外线照射,加入镰形棘豆黄酮类化合物进行干预处理,倒置相差显微镜观察细胞受损程度,以MTT法检测细胞增殖活性,ELISA检测上清液TNF-α、1L-10分泌量,实时荧光定量PCR检测TNF-αmRNA 、IL-10 mRNA表达.结果 中波紫外线照射后,细胞形态受损,随着照射剂量增加,细胞增殖活性下降,损伤程度加重,TNF-α、IL-10分泌量增加,TNF-α mRNA、IL-10 mRNA表达水平增加.加入镰形棘豆黄酮类化合物干预后,细胞活性有所恢复,TNF-α、IL-10分泌量降低,TNF-α mRNA、IL-10 mRNA表达水平下调,具有显著性差异.结论 镰形棘豆黄酮类化合物具有一定的光保护作用,抑制炎症细胞因子分泌可能是其减轻紫外线辐射损伤的机制之一.
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藏药镰形棘豆中的黄酮类化合物
从藏药镰形棘豆中分离得到27个黄酮类成分,包括10个异黄酮、9个二氢黄酮、3个二氢查耳酮、2个黄烷,其化学结构通过质谱、核磁共振波谱以及圆二色谱等波谱法得以确定.其中12个化合物为首次从镰形棘豆中分离得到,10个化合物为首次从棘豆属植物中分离得到.
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藏药镰形棘豆和轮叶棘豆的高效液相色谱指纹图谱分析
本文首次建立了藏药“俄大夏”的两种基源药材一镰形棘豆和轮叶棘豆的一种简单、灵敏、可靠的高效液相色谱指纹图谱分析方法,并对不同产地以及不同时间采集的药材进行了分析,结果显示镰形棘豆有19个共有指纹峰,轮叶棘豆有24个共有指纹峰,镰形棘豆和轮叶棘豆有11个共有指纹峰.通过对照品对照指认了两种药材中共有的7个指纹峰以及轮叶棘豆特有的1个指纹峰的化合物结构.研究结果表明两种药材尽管在化学成分上存在一定差异,但是其主要成分基本相同,因此从化学成分的角度上为两种药材均作为“俄大夏”入药提供了科学依据,同时也提示为了保证临床用药的疗效和一致性,有必要对这两种药材的化学和生物活性区别进行深入细致的研究.
