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甲基莲心碱对长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡的影响
目的观察甲基莲心碱(Nef)在体外对长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡的影响.方法采用MTT比色法检测药物的细胞毒性作用,并用流式细胞术、AO/EB双重荧光染色法和TUNEL法测定甲基莲心碱对长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡率的影响.结果 2.5、 5、 10 μmol*L-1 Nef能增强长春新碱对人胃癌细胞(SGC7901)增殖的抑制作用;10 μmol*L-1 Nef能增强长春新碱(0.1、 0.5、 2、 4 mg*L-1)诱导SGC7901细胞凋亡.结论甲基莲心碱能增强长春新碱诱导人胃癌细胞凋亡,推测其为一种低毒高效的化疗增敏剂.
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甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞凋亡抗性的影响
目的探讨甲基莲心碱(neferine,Nef)对耐阿霉素人乳腺癌细胞(MCF-7/Adr)凋亡抗性的影响及其机制.方法应用Tunel法和PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,间接免疫荧光流式细胞仪检测P-gp的表达,高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内阿霉素(ADR)的浓度.结果①MCF-7/Adr细胞能耐受5 mg*L-1 ADR诱导的凋亡,而1,5,10 μmol*L-1 Nef可使5 mg*L-1 ADR诱导的MCF-7/Adr细胞凋亡从7.95%分别增加至21.3%,27.9%,61.3%;②10 μmol*L-1 Nef可使MCF-7/Adr细胞内ADR积累由0.52 μg*(106 cells)-1增加到1.50 μg*(106 cells)-1;③10 μmol*L-1 Nef作用24 h后, MCF-7/Adr细胞P-gp的表达明显下降.结论甲基莲心碱能逆转MCF-7/Adr细胞的凋亡抗性,其作用机制可能与抑制P-gp的功能和表达、增加ADR在MCF-7/Adr细胞内的积累有关.
关键词： 甲基莲心碱 细胞凋亡 耐阿霉素人乳腺癌细胞 多药耐药性 -
甲基莲心碱增强阿霉素对骨肉瘤的抑制作用及机制初探
目的研究甲基莲心碱(Nifeine,Nef)与化疗药物合用时,对骨肉瘤的化疗增敏作用及其机制.方法用MTT法测定药物的细胞生长抑制率,PI染色流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡.间接免疫荧光流式细胞术和S-P免疫组化检测蛋白表达.结果 5,10 μmol*L-1 Nef能降低ADM对Saos-2的IC50.10 μmol*L-1 Nef增加了ADM诱导的Saos-2凋亡,增强了细胞的Rb蛋白表达,使G1期细胞增多.结论 Nef能增加ADM对Saos-2的化疗敏感性,其机制可能与增强Saos-2的Rb蛋白表达和G1期阻断有关.
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甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞内阿霉素积累的影响
目的研究甲基莲心碱(Nef)对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/Adr内阿霉素(ADM)积累的影响.方法 MTT法检测Nef对多药耐药性(MDR)的逆转作用,高效液相色谱(HPLC)法检测细胞内阿霉素浓度.结果 Nef能降低阿霉素对MCF-7/Adr细胞IC50值,能提高MCF-7/Adr细胞内ADM的浓度.结论 Nef逆转MCF-7/Adr细胞多药耐药的机制与其增加多药耐药细胞内抗癌药物积累有关.
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甲基莲心碱对有机磷中毒小鼠胆碱酯酶的重活化作用
目的探讨甲基莲心碱(Nef)对LD100剂量的敌敌畏(DDVP )和敌百虫(Dip)中毒小鼠胆碱酯酶的重活化作用及其保护效应.方法将昆明种小鼠分为DDVP或Dip中毒组及Nef、阿托品和氯磷定等各治疗组,采用急性毒性试验及DTNB 比色法测定小鼠胆碱酯酶(ChE)活力单位.结果①Nef(15 mg·kg-1,ip)对中毒小鼠有确切的保护作用,因为Ne f处理的小鼠24 h死亡率低于生理盐水组(P<0.01),其死亡率接近阿托品(0.5 mg·kg-1,ip)处理组,二者间死亡率差异无显著性(P>0.05),但均低于氯磷定组,差异有显著性(P<0.05).②Nef与氯磷定对中毒小鼠的ChE活力均有重活化作用,二组间ChE活力单位百分率差异无显著性(P>0.05),但均高于生理盐水对照组及阿托品组(P<0.01).结论实验结果表明Nef具有重活化有机磷中毒小鼠体内被抑制的ChE功效,并具有与阿托品相似的对抗有机磷中毒的作用,其作用机制尚需进一步研究.
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甲基莲心碱的药理作用
甲基莲心碱是一种双苄基异喹啉类生物碱.该文就甲基莲心碱的扩血管、降压,抗心律失常,抗血小板聚集,抗血栓形成,抗氧化,抗有机磷农药中毒,抗瘢痕形成以及化疗增敏等药理作用作一综述.
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HPLC法测定不同炮制工艺莲子心中生物碱的含量
目的 HPLC法测定不同炮制工艺莲子心中生物碱的含量,从而确定莲子心佳炮制工艺.方法 莲子心测定:色谱柱:Hypersil BDS柱(250mm×4.6mm,5μm);乙腈-水(46:54.V/V),乙二胺调pH为10.98为流动相;流速:1.0mL·min-1;紫外检测波长(λ)为282nm;测定不同炮制工艺莲子心中生物碱的含量.结果 莲心碱在0.192μg～1.344μg范围内,异莲心碱在0.152μg～1.064μg范围内,甲基莲心碱在0.176μg～0.75μg范围内呈良好的线性关系;并均具有较好的加样回收率.结论 该方法灵敏度高,重复性好,可同时用于对莲子心药材中3种异喹啉生物碱的含量测定.
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甲基莲心碱的药理作用研究进展
综述近年来甲基莲心碱的药理学研究进展,甲基莲心碱在增强肿瘤细胞的敏感性方面具有确切的作用且具有一定的开发价值.
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福建莲子心的质量评价
目的 建立评价福建莲子心质量的方法. 方法 根据《中国药典》测定了福建莲子心的含水量、总灰分含量,用薄层色谱法进行鉴别；建立了HPLC测定莲子心生物碱含量的方法. 结果 福建莲子心的含水量、总灰分含量符合《中国药典》要求,莲子心的莲心碱高含量为0.29％.结论 福建莲子心生物碱含量差异较大；我们所建立的HPLC法简单、快速、灵敏、准确,可对莲子心进行有效的质量控制.
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甲基莲心碱对耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性逆转机制的初步研究
目的 探讨新的钙阻断剂甲基莲心碱(Nef)对耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及其机制.方法 采用MTT比色法,检测药物的细胞毒作用;应用免疫细胞化学SP法及流式细胞术,检测Nef对人胃癌细胞Bcl-2蛋白表达的影响.结果 10 μmol/L Nef对SGC7901及 SGC7901/VCR无显著细胞毒作用;2.5、5、10 μmol/L Nef能使VCR对SGC7901/VCR细胞的IC50从2.32 μg/ml依次下降至0.340、0.128、0.053 μg/ml,逆转倍数分别为6.8、18.1、43.8.当Nef浓度为10 μmol/L时,逆转SGC7901/VCR多药耐药活性较VRP高(P＜0.01);SGC7901/VCR细胞中Bcl-2蛋白表达水平较SGC7901细胞高,经Nef处理后,SGC7901/VCR细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显下降,表明Nef能下调SGC7901/VCR细胞中Bcl-2蛋白表达水平.结论 甲基莲心碱在体外能逆转耐长春新碱人胃癌细胞(SGC7901/VCR)的多药耐药性,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达水平有关.
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甲基莲心碱增强环磷酰胺诱导小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的作用
目的评价甲基莲心碱(Nef)对环磷酰胺(CTX)诱导小鼠Lewis肺癌细胞凋亡作用的影响.方法 Lewis肺癌移植瘤小鼠40只,雄性,体重18～22 g,随机分成CTX+Nef、CTX、Nef、NS 4个组,每组10只.通过检测瘤重抑制率及瘤细胞凋亡率,观察Nef联合CTX对小鼠Lewis肺癌的疗效和诱导癌细胞凋亡的影响.结果 CTX+Nef、CTX组的瘤重抑制率分别为80.08%、58.95%,明显高于Nef组(6.78%),P<0.01;而CTX+Nef组较CTX组也有增高(P<0.05);流式细胞术检测CTX+Nef、CTX组的癌细胞凋亡率分别为53.50%、25.92%,明显高于Nef、NS组(7.09%,5.63%),P<0.01;CTX+Nef组也高于CTX组(P<0.05);TUNEL法检测CTX+Nef、CTX组的癌细胞凋亡指数分别为(10.24%±11.08%),(5.36%±6.24%),较Nef、NS组明显增加(1.45%±1.98%,1.03%±1.65%),P<0.05;CTX+Nef组的凋亡指数较CTX组也有明显增加(P<0.05).结论甲基莲心碱能增强环磷酰胺诱导的小鼠Lewis肺癌细胞凋亡作用,且两者具有协同效应.
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甲基莲心碱对增生性瘢痕成纤维细胞整合素β1和整合素α3亚型mRNA表达的影响
目的 探讨甲基莲心碱(Nef)对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞(HSFBs)整合素(integrin)β1和integrinα3亚型mRNA表达的影响.方法 进行HSFBs体外培养,选取3～6代对数生长期的HSFBs,以2×106个/瓶分别接种于细胞培养瓶中,随机分为5 μg/mL Nef 组、10 μg/mL Nef 组、20 μg/mL Nef 组、20 μg/mL盐酸维拉帕米注射液(Ver)组和对照组共5组,每组各6瓶细胞.进行条件培养基培养24 h后,收集各组细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定各组HSFBsintegrinβ1和integrinα3亚型mRNA的表达.结果 10 μg/mL Nef组、20 μg/mL Nef组和20 μg/mL Ver组HSFBsintegrinβ1 mRNA表达水平均明显低于对照组(均P＜0.01),20 μg/mL Ver组HSFBsintegrinβ1 mRNA表达水平与10 μg/mL Nef组比较差异无统计学意义(P＞0.05),5 μg/mL Nef组HSFBsintegrinβ1 mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).10 μg/mL Nef组、20 μg/mL Nef组HSFBs integrinα3 mRNA表达水平均明显低于对照组(均P＜0.01),5 μg/mL Nef组、20 μg/mL Ver组HSFBs integrinα3 mRNA表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05),10 μg/mL Nef组HSFBs integrinα3 mRNA表达水平与20 μg/mL Nef组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Nef以浓度依赖方式抑制HSFBs integrinβ1 mRNA和integrinα3 mRNA的表达.
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甲基莲心碱对移植至裸鼠的增生性瘢痕胶原和酸性粘多糖合成的影响
目的探讨甲基莲心碱(Neferine,Nef)对移植至裸鼠的人增生性瘢痕的作用.方法建立人增生性瘢痕裸鼠动物模型,将瘢痕组织块植入18只裸鼠皮下,术后第24 d组织成活后,随机分为3组:①Nef治疗组(A组);②稀盐酸对照组 ( Nef溶媒0.03 M HCl∶NS =1∶9)(B组);③空白对照组(C组).A、B组每只每2 d分别局部注射Nef 100 μl(1.2 mg/ml)和稀盐酸100 μl.两周后,用光、电镜观察组织和细胞形态学变化,测量植入物的体积,用全自动图像分析仪测量组织中胶原和酸性粘多糖含量.结果 A组植入物体积缩小,与B、C组比较,差异有非常显著性意义( P＜0.001);胶原排列较整齐;Ⅰ型胶原减少,Ⅲ型胶原增加;胶原和酸性粘多糖含量显著降低(P＜0.001).结论 Nef对移植至裸鼠的人增生性瘢痕有减小体积,改变Ⅰ、Ⅲ型胶原成分,降低胶原和酸性粘多糖含量的作用.表明Nef对移植至裸鼠的增生性瘢痕有一定的治疗作用.
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高效液相色谱法同时测定莲子心中四种异喹啉生物碱的含量
目的:建立同时测定莲子心中四种异喹啉生物碱-莲心季铵碱、莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱含量的离子对反相高效液相色谱(RP-HPLC)法.方法:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,色谱柱:HibarTR,5μm,250 mm×4.6 mm;流动相:乙腈-水-冰醋酸(55:45:1,每1000 ml中加入4 g十二烷基磺酸钠);流速:1.2 ml/min;检测波长:282 nm;柱温:30℃.结果:莲心季铵碱在0.94～2.82μg,莲心碱在1.14～3.42μg,异莲心碱在0.7～2.1μg,甲基莲心碱在0.96～2.88μg范围内均呈良好线性关系;并均具有较好的加样回收率(＞95%).结论:该分析方法快速、准确、灵敏度高,重复性好,可用于同时对药材莲子心中四种异喹啉生物碱的含量测定.
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甲基莲心碱对RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响
目的探讨甲基莲心碱(Nef)对巨噬泡沫细胞形成的作用及机制.方法采用体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,ox-LDL诱导建立泡沫细胞模型,用Nef进行干预.油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶比色法定量细胞内总胆固醇和胆固醇酯的变化,免疫荧光和流式细胞术分析CD36受体蛋白表达,RT-PCR检测CD36受体mRNA表达.结果与ox-LDL诱导组相比,Nef保护组巨噬细胞的油红O染色阳性细胞数和细胞内脂质含量均显著减少;同时CD36受体蛋白和mRNA表达明显降低.结论 Nef可抑制ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化,该作用可能与Nef下调巨噬细胞CD36受体表达,从而减弱巨噬细胞对ox-LDL的摄取有关.
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甲基莲心碱增强阿霉素抑制骨肉瘤作用
目的探讨甲基莲心碱增强阿霉素抑制裸鼠体内骨肉瘤生长的作用.方法将人成骨瘤细胞(MG-63)接种于BALB/C裸鼠,建立人成骨肉瘤裸鼠移植模型.随机分4组:生理盐水组(Ns)、甲基莲心碱组(Nef)、阿霉素组(Adr)、甲基莲心碱+阿霉素组(Nef+Adr).腹腔内注射以上药物,Nef浓度3.0mg/kg体重、Adr 2.0mg/kg体重.测量瘤重、计算瘤重抑制率、制病理切片,在光镜下观察肿瘤形态与改变.流式细胞术检测肿瘤原发灶细胞凋亡.结果Ns、Nef、ADR、Nef+ADR组原发肿瘤重量分别为:(8.03±0.92)、(7.86±0.80)、(4.16±0.54)、(1.86±0.73)g,Nef+ADR组肿瘤重量较ADR组显著减轻(P＜0.05);Nef、ADR合并用药效果q=1.38.4组原发灶细胞凋亡率分别为8.29%、11.80%、25.70%、71.20%,Nef+ADR组较ADR组明显增高(P＜0.05).病理切片发现Nef+ADR组较ADR组肿瘤细胞明显减少,坏死明显增多.结论甲基莲心碱对阿霉素抑制裸鼠体内骨肉瘤生长有增效作用.
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甲基莲心碱对乳腺癌MCF-7/Adr细胞MDR逆转的研究
目的 探讨甲基莲心碱(Neferine,Nef)对耐药人乳腺癌细胞增殖,细胞内ADM积聚浓度及mdr-1/P-gp表达的影响.方法 采用MTT法测定细胞毒作用,高效液相色谱法测定细胞内ADM积聚浓度,RT-PCR技术及蛋白质印迹技术检测mdr-1/P-gp表达.结果 10μg/ml Nef+ADM组细胞的抑制率及细胞内ADM积聚浓度比ADM组高(P＜0.01);20μg/ml Nef+ADM组细胞抑制率及细胞内ADM积聚浓度较5μg/ml异博定+ADM组及10/ag/ml Nef+ADM组均高(P＜0.01).10μg/ml Nef+ADM组MCF-7/Adr细胞mdr-1 mRNA及P-gp表达比ADM组明显下降(P＜0.01).20μg/ml Nef+ADM组细胞mdr-1 mRNA及P-gp表达较10μg/ml Nef+ADM组明显下调(P＜0.01).结论 Nef能抑制耐药人乳腺癌细胞增殖.Nef能增加MCF 7/Adr细胞内ADM积聚浓度.Nef通过降低耐药人乳腺癌细胞mdr-1 mRNA及P-gp的表达逆转MDR.
关键词： 甲基莲心碱 多药耐药 P-糖蛋白 MCF-7/ADR细胞 -
转铁蛋白修饰的甲基莲心碱纳米脂质体的研制及脑靶向性考察
目的:制备转铁蛋白(Tf)修饰的甲基莲心碱(Nef)纳米脂质体(NefNL),并考察其脑部靶向性.方法:以二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、胆固醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-羧基(DSPE-PEG200-COOH)为成膜材料,采用薄膜分散法制备NefNL,并将Tf共价结合于DSPE-PEG200-COOH的COO-上制备Tf修饰的NefNL(Tf-NefNL).HPLC法测定小鼠中血浆及脑部Nef浓度.以同剂量的NefNL为对照,测定Tf-NefNL给药后不同时间点小鼠血浆及脑部的Nef浓度,并利用DAS2.0软件计算主要药动学参数,并用相对摄取率(re)、靶向效率(te)及峰浓度比(Ce)3个指标评价其脑靶向性.结果:与同剂量的NefNL相比,Tf-NefNL在小鼠脑组织中的峰浓度(Cmax)及曲线下面积(AUC)明显增加,达峰时间(Tmax)缩短(P<0.05),re、te、Ce分别为1.90、1.37、2.0.结论:Tf修饰的纳米脂质体可显著增加Nef在小鼠脑部的浓度,加快达峰,具有明显的脑靶向性.
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甲基莲心碱对HepG2细胞增殖及凋亡的影响
目的:研究甲基莲心碱对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用CCK-8法观察甲基莲心碱对人肝癌细胞HepG2细胞生长增殖的影响;Hoechst33258染色观察甲基莲心碱作用 HepG2细胞后细胞形态的变化;测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率观察HepG2细胞受损程度;Annexin V-PI双染测定甲基莲心碱对HepG2细胞凋亡率的影响;PI/RNase单染检测不同浓度的甲基莲心碱对其凋亡周期的影响.结果:甲基莲心碱对体外培养的人肝癌HepG2细胞的生长具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;细胞膜的受损程度随着药物剂量的增大逐步提高;Hoechst33258及流式结果表示,甲基莲心碱可使HepG2细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率随药物浓度的增大亦呈增长趋势.结论:甲基莲心碱可显著抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖,并在一定的范围内呈剂量、时间依赖性,诱导其阻滞于G0/G1期,发生晚期凋亡.
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甲基莲心碱对慢性脑缺血诱导的大鼠学习记忆功能保护机制
目的：观察甲基莲心碱（neferine，Nef）对慢性脑缺血大鼠的学习记忆功能的影响及海马功能区Notch1和SYN蛋白表达的影响。方法：雄性SD大鼠（250-300g）随机分为假手术（Sham）组，模型（Mod）组，尼莫地平（nimodipine， Nim）阳性对照组，Nef治疗组，每组5只。采用双侧颈总动脉永久性结扎（ Bilateral common carotid artery ligation ，2-VO）建立慢性脑缺血模型，术后第1天口服给予NS（5 mg· kg－1），Nim（1 mg· kg－1），Nef（20 mg· kg－1）至21 d。记录大鼠体质量变化；Nissel染色观察大鼠海马神经元数量变化；Morris水迷宫法检测大鼠学习记忆功能；IHC和Western blot 分析海马Notch1和SYN蛋白的表达水平的变化。结果：与Mod组比较，Nef可以明显改善2-VO诱导大鼠在21 d的体质量减轻，海马CA1区神经元数量减少，寻找平台路线和时间、逃避潜伏期延长，跨越平台次数降低，且优于Nim（P＜0．05）；Nef可明显上调2-VO诱导的大鼠在第21天时海马CA1区Notch1和SYN蛋白表达降低。结论：Nef可有效改善2-VO诱导的CCl大鼠学习记忆功能障碍，其机制可能与增强海马CA1区Notch1信号通路，增强突触可塑性有关。
