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液相色谱-质谱联用法在药物研究中的应用
LC/MS已成为药物研究中的主流分析技术.本文简要回顾了现代药物研究对分析技术的需求和LC/MS的发展,通过一些实例,着重介绍了LC/MS/MS在生物样品定量分析和药物代谢产物鉴定中的应用,并总结了该项技术的一些特点.
关键词： 液相色谱-质谱联用法 药物研究 药物代谢 药物动力学 -
蓬莪术药材醇提取物LC-MS指纹图谱的研究
目的:建立蓬莪术药材醇提取物的LC-MS指纹图谱评价方法.方法:以四川中药材规范化种植基地的蓬莪术药材为研究对象,采用甲醇冷浸法提取蓬莪术有效成分,用液相色谱-质谱联用法测定其指纹图谱(LCMS-FPS).并采用国家药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004版)对测定结果进行评价.结果:四川种植的蓬莪术药材醇提取物的指纹图谱有良好的相似度,生成的指纹图谱,有14个共有特征峰.通过与对照品的保留时间、紫外光谱及LC-MS所得分子量信息比较,4～6号峰和9号峰分别鉴定为姜黄素、脱甲氧基姜黄素、莪术烯醇和莪术酮.结论:建立的蓬莪术醇提取物的LC-MS指纹图谱,为其质量控制提供科学依据.
关键词： 蓬莪术 指纹图谱 液相色谱-质谱联用法 -
新型抗结核化合物TBI-166在比格犬体内的生物利用度
目的：建立比格犬血浆中TBI-166的LC-MS/MS测定方法，研究比格犬口服TBI-166的血浆药代动力学特征和生物利用度。方法比格犬血浆样品中加入TBI-166和内标普萘洛尔后经乙腈沉淀蛋白。 HPLC分离采用Symmetry C8（2.1 mm×50 mm，3.5μm）柱，流动相为含0.1%甲酸的乙腈-水，梯度洗脱，流速为0.2 ml/min质谱检测采用电喷雾离子源，正离子选择反应监测（SRM）模式检测m/z 590→478（TBI-166）和m/z 260→183（普萘洛尔，内标）。应用上述LC-MS/MS方法测定比格犬口服TBI-166（3 mg/kg）和静脉注射（0.5 mg/kg）后的血浆药物浓度，用WinNonlin软件计算药代动力学参数和绝对生物利用度。结果比格犬血浆中TBI-166在2～1000 ng/ml浓度范围内线性关系良好，日内和日间精密度<10%、回收率>98.6%、无明显基质效应且血浆样品稳定性好。雌雄比格犬口服TBI-166（3mg/kg）后血药浓度分别于（4.4±3.5）和（1.4±0.5）h达峰，血药峰浓度分别为（122.0±34.6）和（65.4±2.3）ng/ml，AUC（0-t）为（2615.1±1524.4）和（897.2±318.6）h·μg/L。雌雄比格犬静注TBI-166（0.5mg/kg）后t1/2z为（112.9±25.3）和（69.6±35.3）h、CL为（0.3±0.1）和（0.2±0.1）L/（h·kg）、AUC（0-t）为（3222.4±1656.2）和（1798.0±729.2）h·μg/L。雌雄比格犬口服TBI-166生物利用度分别为13.5%和8.3%。结论本研究建立了比格犬血浆中TBI-166的LC-MS/MS测定方法，该方法准确、简便、灵敏。比格犬口服TBI-166后体内消除较慢，具有一定性别差异，生物利用度为8.3%～13.5%。
关键词： 抗结核药 TBI-166 液相色谱-质谱联用法 药代动力学 生物利用度 -
利福平与异烟肼单用及合用对小鼠体内异烟肼代谢及其药代动力学的影响
目的 研究利福平与异烟肼合用对异烟肼及其代谢物乙酰肼、肼药代动力学的影响.方法 分别灌胃给予小鼠异烟肼以及利福平+异烟肼10 d后取血,采用液相色谱-质谱联用法测定异烟肼、乙酰肼和肼的血药浓度.结果 与单用异烟肼相比,合用利福平后乙酰肼的消除速率常数(Ke)显著升高,消除半衰期(t1/2)显著缩短,Cmax以及AUC0-12h均显著升高;肼的AUC0-12h显著升高;异烟肼的各药动学参数无显著变化.结论 异烟肼与利福平联合用药后异烟肼的肝毒性产物乙酰肼和肼明显增加,提示利福平与异烟肼合用时增加乙酰肼的血药浓度与肝毒性的增加有关.
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氯沙坦钾胶囊与片在健康人体的生物等效性
目的 评价氯沙坦钾胶囊与片剂(抗高血压药)在健康人体的生物等效性.方法 用随机交叉试验设计,20名健康志愿者分别单剂口服氯沙坦钾受试制剂和参比制剂50 mg,测定其血药浓度并进行生物等效性的检验.结果 受试制剂和参比制剂的Cmax分别为(317.42±217.05),(295.57±132.16)ng·mL-1;tmax分别为(1.17±0.67),(1.27±0.73)h;AUC0-t分别为(637.63±379.83),(591.05±300.77)ng·h·mL-1,2制剂比较无显著性差异.结论 氯沙坦钾胶囊与氯沙坦钾片为生物等效性制剂.
关键词： 氯沙坦钾片与胶囊 液相色谱-质谱联用法 生物等效性 -
液相色谱-质谱联用法测定人参皂苷Re在健康人血浆的浓度
目的建立液相色谱-质谱联用法测定人参皂苷Re在健康人血浆中浓度的方法.方法血浆样品用固相萃取法处理.用电喷雾离子化和正离子多离子反应监测方式检测人参皂苷Re.结果该方法人参皂苷Re线性范围为1.05～1 050 ng·mL-1;定量下限为1.05 ng·mL-1;方法回收率在99.3%～104.3%;日内、日间变异系数(RSD)均＜15%.结论该法准确、灵敏、特异,适用于健康人血浆人参皂苷Re浓度测定.
关键词： 人参皂苷Re 液相色谱-质谱联用法 血药浓度 -
高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中比卡鲁胺的浓度
目的 建立高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS)定量测定人血浆中比卡鲁胺的浓度.方法 用蛋白沉淀处理血浆,以比卡鲁胺-d4为内标,色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18柱(2.1 mm×50.0 mm,3.5 μm),柱温:20℃,流动相:甲醇-0.1％甲酸+2 mmol· L-1甲酸铵水溶液,等度洗脱,流速:0.35mL·min-1.用负离子扫描模式,多反应监测方式测定样品中药物的质量浓度.考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性.结果 血浆样品中比卡鲁胺回归方程为y=6.82×10-3x+ 1.33 ×10-2(r =0.999 1).比卡鲁胺在10～ 1500 ng·mL-1内线性关系良好,定量下限为10ng·mL-1.日内、日间精密度的RSD均＜15％,平均回收率＞95％,稳定性较好.结论 本方法简便快速、特异性强、灵敏准确,适用于人体血浆中比卡鲁胺浓度的测定.
关键词： 比卡鲁胺 液相色谱-质谱联用法 血药浓度 -
高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中阿比朵尔的浓度
目的 建立HPLC-MS/MS方法定量测定人血浆中阿比朵尔浓度.方法 用蛋白沉淀处理血浆,以阿比朵尔-d6为内标,色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18柱(2.1 mm×150 mm,5μm),柱温:30℃,流动相:甲醇-0.1％甲酸水溶液,梯度洗脱,流速:0.25 mL·min-1.用正离子扫描,多反应监测方式(MRM)测定样品中药物的质量浓度.考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性.结果 血浆样品中阿比朵尔回归方程为y=1.52×10-1x-1.38 × 10-3(r =0.999 7),阿比朵尔在10～1000 ng·mL-1内线性关系良好,定量下限为10 ng·mL-1.日内、日间精密度的RSD均＜15％,平均回收率＞95％,稳定性较好.结论 本方法简便快速、特异性强、灵敏准确,适用于人体血浆中阿比朵尔浓度的测定.
关键词： 阿比朵尔 液相色谱-质谱联用法 血药浓度 -
高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中瑞舒伐他汀的浓度
目的 建立HPLC-MS/MS方法定量测定人血浆中瑞舒伐他汀浓度.方法 用液液萃取法处理血浆,以瑞舒伐他汀-1D6为内标,色谱柱:Thermo(R)HypersⅡ GOLD柱(2.1 mm×100 mm,3.0 μm),柱温:40℃,流动相:甲醇-0.1％甲酸+5 mmol· L-1甲酸铵水溶液,等度洗脱,流速:0.35 mL·min-1.用正离子扫描,多反应监测方式(MRM)测定样品中药物的质量浓度.考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与准确度、回收率、基质效应和稳定性.结果 血浆样品中瑞舒伐他汀回归方程为y=3.29×10-1 x-3.46×10-3(r =0.998 8),瑞舒伐他汀在0.05～25.00 ng·mL-内线性关系良好,定量下限为0.05 ng·mL-1.日内、日间精密度的RSD均＜15％,平均回收率＞95％,稳定性较好.结论 本方法简便快速、特异性强、灵敏准确,适用于人体血浆中瑞舒伐他汀浓度的测定.
关键词： 瑞舒伐他汀 液相色谱-质谱联用法 血浆药物浓度 -
液相色谱-质谱联用法测定癫痫患者血浆中丙戊酸及其代谢产物2-丙基-4-戊烯酸浓度
目的 建立液相色谱-质谱联用法同时测定丙戊酸( VPA)及其毒性代谢产物2-丙基-4-戊烯酸(4-ene-VPA)浓度.方法 人血浆样品用乙腈直接沉淀蛋白后,色谱柱:Agilent Eclipse Plus-C18(2.1 mm×10.0 mm, 3.5 μm),流动相:乙腈-10 mmol· L-1醋酸铵水溶液(均含0.1%甲酸),梯度洗脱,用电喷雾离子化源,负离子方式,扫描方式为多反应监测(MRM),用于监测的离子反应分别为m／z 143.2→143.2 (丙戊酸)、m／z 140.8→140.8 (2-丙基-4-戊烯酸)和m／z 373.0→329.1 (内标银杏酸(C17:1)).考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性.结果 VPA和4-ene-VPA分别在0.50～200.00 μg· mL-1和0.05～12.50 μg· mL-1内线性关系良好(r分别为0.998 4和0.997 5),定量下限分别为0.50和0.05 μg· mL-1批内、批间RSD均小于8.59%,提取回收率分别为76.45%～86.78%和78.44%～83.46%,内标归一化基质效应因子分别为93.67% ～97.82%和92.04% ～104.35%.结论 本方法简洁、灵敏、专属性好,适用于人血浆中同时测定VPA和4-ene-VPA浓度,可用于丙戊酸钠的血药浓度监测.
关键词： 丙戊酸 2-丙基-4-戊烯酸 毒性代谢产物 液相色谱-质谱联用法 血药浓度监测 -
液相色谱-串联质谱法测定人血浆中多潘立酮浓度
目的 建立高效液相色谱-串联质谱测定人血浆中多潘立酮(第2代胃动力药)浓度的方法.方法 用TC - C18色谱柱,流动相为甲醇(含0.025％甲酸)-1 mmol·L-1甲酸铵溶液(含0.05％甲酸),用梯度洗脱进行分离,流速为1.0mL· min-1.用正离子化模式,多重反应监测(MRM)扫描方式进行检测定量.结果 多潘立酮的线性范围为0.1～50.0 ng· mL-1,日内、日间精密度均小于15％,提取回收率大于80％.结论 本方法灵敏、准确、快速,可用于人血浆中多潘立酮浓度的测定和药代动力学研究.
关键词： 液相色谱-质谱联用法 多潘立酮 药代动力学 -
液相色谱-质谱法测定替考拉宁在重症感染患者血浆中的浓度
目的 建立液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)测定人血浆中替考拉宁的浓度.方法 人血浆样品用甲醇沉淀蛋白后,选用Agilent EclipsePlus C18(2.1 mm× 100 mm,3.5μm)色谱柱,以甲醇-10 mmol·L-1醋酸铵溶液(均含0.1％甲酸)85∶15为流动相,流速为0.25 mL·min-1,柱温为25℃,用电喷雾离子化源,正离子方式,多反应监测(MRM)扫描方式进行监测,用于定量分析的离子反应分别为m/z1880.1→m/z1563.0(替考拉宁)和m/z748.8→m/z158.1(内标克拉霉素).考察其专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应和稳定性.结果血浆中替考拉宁的标准曲线方程为y=1.63×10-2x-2.95×10-3(r =0.996 3),在0.10 ～20.00μg·mL-1内线性关系良好,定量下限为0.10μg· mL-1;质控样品的准确度在93.56％～105.12％;日内、日间RSD均小于15％;提取回收率80.32％～88.28％.基质效应为91.78％～108.56％.结论 该方法快速、灵敏、准确,专属性强,重复性好,适用于人血浆中替考拉宁浓度的测定,可应用于替考拉宁的血药浓度检测和药物动力学研究.
关键词： 替考拉宁 液相色谱-质谱联用法 血药浓度 药物动力学 -
硫酸氢氯吡格雷片在中国健康人体的药代动力学和相对生物利用度研究
目的 研究硫酸氢氯吡格雷片在中国健康人体的药代动力学和相对生物利用度. 方法 24名健康受试者采用自身对照、随机交叉给药法,单次空腹口服硫酸氢氯吡格雷片参比和受试药物各150 mg. 用液相色谱-质谱联用法( LC-MS/MS)测定血浆中氯吡格雷和氯吡格雷羧酸盐代谢物的血药浓度,计算两种药物的药代动力学参数和相对生物利用度. 结果 血浆中氯吡格雷受试药物和参比药物tmax分别为(1.03 ±0.36),(1.11 ±0.41) h;Cmax分别为(2.90 ± 1.68),(3.05 ±1.63) ng·mL-1;t1/2分别为(3.50 ±1.19),(3.22 ±0.66) h;AUC0-t分别为( 8.75 ±5.10 ) , ( 9.26 ±5.36 ) ng·h·mL-1;AUC0-∞分别为(9.52 ±5.64),(9.97 ±5.88) ng·h·mL-1;平均相对生物利用度为(98.40 ± 24.30)%. 血浆中氯吡格雷羧酸盐代谢物,tmax分别为(0.98 ±0.72),(0.91 ± 0.40) h;Cmax分别为(4799 ±1569),(4697 ±1856)ng·mL-1;t1/2分别为(7.24 ± 1.56),( 7.25 ±1.38 ) h;AUC0-t 分别为( 13043 ±3845 ), ( 13707 ±4007 ) ng·h·mL-1;AUC0-∞分别为(13933 ±4242),(14596 ±4172) ng·h·mL-1;平均相对生物利用度为( 95.90 ±13.50 )%. 结论 两种氯吡格雷和氯吡格雷羧酸盐代谢物具有生物等效性.
关键词： 硫酸氢氯吡格雷片 液相色谱-质谱联用法 药代动力学 生物等效性 -
洛芬葡锌那敏分散片与复方锌布颗粒在健康人体的生物等效性
目的 建立液相色谱-质谱联用法,比较洛芬葡锌那敏分散片和复方锌布颗粒(抗组胺药)的生物等效性.方法 用随机开放双周期自身交叉单剂量给药试验设计,清洗期为2周.20名健康受试者分别单次空腹口服洛芬葡锌那敏分散片(受试制剂)和复方锌布颗粒(参比制剂)(均相当于马来酸氯苯那敏4mg).以引达帕胺为内标,用ESI正离子选择性反应监测(SRM)模式测定马来酸氯苯那敏血药浓度,计算药代动力学参数及评价生物等效性.结果 以2种药物中的氯苯那敏为计,洛芬葡锌那敏分散片(受试制剂)和复方锌布颗粒(参比制剂)的C_(max)分别为(12.27±3.04),(13.47±3.52)ng·mL~(-1);t_(max)分别为(2.43±1.49),(2.10±1.07)h;AUC_(0-t)分别为(303.17±91.39),(315.58±76.78)ng·h·mL~(-1);AUC_(0-∞)分别为(355.19±120.30),(365.71±100.48)ng·h·mL~(-1);t_(1/2)分别为(24.86±5.83),(24.71±5.96)h.受试制剂相对参比制剂的生物利用度F为(99.80±41.20)%.结论 洛芬葡锌那敏分散片(受试制剂)和复方锌布颗粒(参比制剂)中马来酸氯苯那敏生物等效.
关键词： 马来酸氯苯那敏 液相色谱-质谱联用法 生物等效性 -
盐酸司他斯汀糖浆在健康志愿者体内的生物等效性研究
目的:通过测定健康受试者血清中盐酸司他斯汀浓度,研究不同厂家生产的盐酸司他斯汀制剂的生物等效性.方法:20名健康男性受试者采用体重随机、配对交叉给药方案,分别空腹口服20 mL试验制剂盐酸司他斯汀糖浆和2 mg参比制剂盐酸司他斯汀片,用LC-MS/MS法测定血清中司他斯汀药物浓度,采用DAS 2.1软件计算药动学参数.结果:口服盐酸司他斯汀试验或参比制剂后,盐酸司他斯汀的t1/2分别为(13.09±5.25)和(12.96±4.67)h;tmax分别为(2.9±0.31)和(3.05±0.22)h;Cmax分别为(1 759.6±578.6)和(1 707.1±677.4)pg·mL;AUC0～48h分别为(17 928.6±10 964.4)和(17 388.3±11154.5)pg·h·mL-1;AUC0～∞分别为(19 940.9±13 237.7)和(19 528.4±14 164.6)pg·h·mL-1.试验制剂的相对生物利用度为(107.0±23.9)%.结论:可以认定试验制剂和参比制剂生物等效.
关键词： 盐酸司他斯汀 液相色谱-质谱联用法 生物等效性 -
生脉注射液中人参皂苷Rb1在健康人体的药动学
目的:研究健康志愿者单次静脉滴注生脉注射液中人参皂苷Rb1的药动学.方法:15例健康受试者单次静滴60 mL生脉注射液后,采用液相色谱质谱联用法测定给药后不同时间点的血药浓度,采用DAS 2.1软件计算药动学参数.结果:血药浓度.时间曲线符合二房室模型,健康受试者单次静滴生脉注射液后,Cmax=(10.572±8.0952)mg·L-1,t1/2=(47.983±7.256)h,AUC0～144h=(346.668±267.894)mg·h·L-1.结论:生脉注射液单次静滴60 mL剂量是安全的.
关键词： 生脉注射液 人参皂苷Rb1 药动学 液相色谱-质谱联用法 -
液相色谱-质谱联用法检测某些降糖中药制剂中的磺酰脲类化学药
目的:建立液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用法测定纯中药降糖药中非法掺入的格列本脲等酰脲类化学药,包括格列吡嗪、格列本脲、格列美脲、格列喹酮、格列齐特.方法:选用Agilent C18以0.02 mol·L-1醋酸铵溶液(醋酸调节pH值至3.5)-甲醇(30∶70)为流动相.根据所检测到化合物的色谱保留时间及一级、二级质谱信息,并与对照品比较,对中药制剂中非法掺入的酰脲类化学药.结论:该方法选择性强,灵敏度高,可作为分析检测非法中药制剂的有效手段.
关键词： 中药制剂 酰脲类降糖药 液相色谱-质谱联用法 -
液相色谱-质谱联用法测定人血浆氯吡格雷的浓度及其药动学研究
目的 采用液相色谱-质谱联用法对健康受试者体内的人血浆氯吡格雷含量进行分析,并对氯吡格雷在人体内的药动学进行研究.方法 选取鞍山市长大医院2015年6月至2016年6月收治的26例健康受试者为研究对象,对其进行氯吡格雷药物口服,并在口服后对患者的肘静脉血进行药动学分析,主要采用液相色谱-质谱联用法进行检验,对受试者血浆中的氯吡格雷含量及其衍生物含量进行分析,总结氯吡格雷在患者体内的药动学结果 .结果相同添加值情况下,氯吡格雷与活性巯基代谢物的日间、日内精密度检测结果差异无统计学意义(P>0.05),而两组受试者药动力学指标检测结果差异也无统计学意义(P>0.05).结论 通过液相色谱-质谱联用法测定人体内血浆中的氯吡格雷含量及其代谢产物含量的药动学结果准确、操作简单,能够有效指导临床检验.
关键词： 氯吡格雷 液相色谱-质谱联用法 药动学分析 -
LC-MS-MS法测定人血浆中克拉霉素含量及其在药物动力学中的应用
目的建立测定人血浆中克拉霉素的液相色谱-串联质谱法,研究市售片剂在人体的药物动力学特点.方法以罗红霉素为内标,取血浆样品0.2 mL经液-液提取后,以甲醇-水-甲酸(80:20:0.5)为流动相,用C18柱分离,采用电喷雾离子源三重四极杆串联质谱,正离子方式检测,扫描方式为选择反应监测(SRM).结果克拉霉素线性范围为10.0-5 000ng·mL-1,日内、日间精密度(RSD)均小于3.3%,准确度(RE)在±0.7%以内.应用此法研究18名健康受试者单剂量口服250 mg克拉霉素市售片的药动学参数Tmax、Cmax、T1/2和AUC0-24h值分别为3.1±2.7 h、(8 750±4734)ng·mL-1、5.3±2.2 h和(5 932±249)ng·h·mL-1.结论该法用于人体药物动力学的研究专属、快速、灵敏.
关键词： 克拉霉素 液相色谱-质谱联用法 药物动力学 -
LC-MS/MS研究新型酪氨酸酶抑制剂UP302在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学
目的 建立并验证测定大鼠肝微粒体孵育液中UP302含量的高效液相色谱-串联质谱法,研究UP302在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学.方法 经大鼠肝微粒体孵育的UP302样品,经色谱柱分离,电喷雾离子化负离子检测,扫描方式为选择反应监测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 301.1→135.2(UP302)和m/z252.9→132.O(内标大豆苷元).考察不同孵育时间、底物浓度和微粒体浓度对UP302代谢的影响,确定佳反应条件.结果 标准曲线线性范围为0.1～20 μmol·L-1,线性关系良好,日内日间准确度在86.42％～ 112.59％,日内日间精密度均小于9.09％,回收率在100.50％ ～ 109.91％之间.确定了酶动力学参数,大反应速度Vmax为196.08 μmol·L-1·min-1·g-1,米氏常数km为14.98μmol·L-1,内在代谢清除率CLint为13.09 mL-1·min-1·g-1.结论 该检测方法快速、专属、灵敏度高,可满足酶动力学检测要求.
关键词： UP302 肝微粒体 酶动力学 液相色谱-质谱联用法
