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LC-MS/MS研究新型酪氨酸酶抑制剂UP302在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学
目的 建立并验证测定大鼠肝微粒体孵育液中UP302含量的高效液相色谱-串联质谱法,研究UP302在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学.方法 经大鼠肝微粒体孵育的UP302样品,经色谱柱分离,电喷雾离子化负离子检测,扫描方式为选择反应监测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 301.1→135.2(UP302)和m/z252.9→132.O(内标大豆苷元).考察不同孵育时间、底物浓度和微粒体浓度对UP302代谢的影响,确定佳反应条件.结果 标准曲线线性范围为0.1～20 μmol·L-1,线性关系良好,日内日间准确度在86.42％～ 112.59％,日内日间精密度均小于9.09％,回收率在100.50％ ～ 109.91％之间.确定了酶动力学参数,大反应速度Vmax为196.08 μmol·L-1·min-1·g-1,米氏常数km为14.98μmol·L-1,内在代谢清除率CLint为13.09 mL-1·min-1·g-1.结论 该检测方法快速、专属、灵敏度高,可满足酶动力学检测要求.
关键词： UP302 肝微粒体 酶动力学 液相色谱-质谱联用法 -
LC-MS/MS方法研究新型酪氨酸酶抑制剂UP302的大鼠皮肤吸收量和皮肤代谢稳定性
目的 建立大鼠皮肤中UP302定量的LC-MS/MS方法,并应用于研究UP302乳膏在大鼠皮肤局部给药24h后的皮肤吸收量,以及离体大鼠皮肤中UP302的代谢稳定性.方法UP302用甲醇溶解稀释,皮肤样品用2倍体积甲醇沉淀处理,内标法进行定量.采用Hypersil Gold C18色谱柱,柱温30℃；甲醇为流动相A,5mmol·L、1甲酸铵水溶液为流动相B,以0.2mL·min-1梯度洗脱,进行色谱分离,运行时间6min.采用负离子电喷雾离子化电离源和选择反应监测(SRM)模式进行串联质谱分析,用于定量分析的离子反应分别为m/z 301.1→135.2 (UP302)和m/z 252.9→132.0(内标大豆苷元).结果 UP302皮肤标准样品在5～2000ng·mL-1的浓度范围内线性关系良好(r=0.9998).UP302在大鼠皮肤匀浆中的低定量限是5ng·mL-1.本方法日内准确度在100.00％～105.23％,日内精密度小于5.82％.结论 本LC-MS/MS方法专属性强、灵敏度高、重现性好、操作简便、结果准确,可用于UP302在皮肤组织中含量的测定,以及UP302在大鼠皮肤组织中的代谢稳定性研究.
关键词： UP302 高效液相色谱、串联质谱 皮肤吸收量 代谢稳定性 -
HPLC法测定新型酪氨酸酶抑制剂UP302乳膏的含量及皮肤表面残留量
目的:建立测定UP302乳膏中UP302含量的HPLC方法,并应用于研究UP302乳膏在大鼠皮肤局部给药后的皮肤残留百分率.方法:采用Phenomenex Luna 5u C18( 150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温35 ℃ ;流动相为甲醇-水,以1.0 mL·min -1梯度洗脱；检测波长280 nm；检测时间10 min.UP302对照品用甲醇溶解稀释,乳膏和空白乳膏基质中UP302用甲醇提取.结果:UP302在5～100 μg·mL-1的浓度范围内线性关系良好(r =0.9999).本方法日内日间准确度在98.5％～100.6％,日内日间精密度小于2.4％.结论:本方法专属性强,灵敏度高,重现性好,耐用性好,操作简便,结果准确,可用于UP302乳膏的含量测定,以及乳膏皮肤表面残留量的测定和制剂透皮吸收研究.
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UPLC-MS/MS法测定血浆中新型酪氨酸酶抑制剂UP302的含量
目的:建立超高效液相色谱-串联质谱测定血浆中新型酪氨酸酶抑制剂UP302的方法,并用于研究UP302在大鼠、狗、猴和人血浆中的稳定性.方法:血浆中加入内标大豆苷元经2倍体积甲醇沉淀后进行分析.采用Hypersil Gold C18(50mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,流动相为甲醇(A) -5 mmol·L-1甲酸铵水溶液(B),梯度洗脱,梯度流速恒定为0.2 mL·min-1,柱温为30℃,整个分析时间为6min.采用负离子电喷雾离子化电离源和选择反应监测模式进行检测.结果:在5～2000 ng·mL-的浓度范围内,标准曲线线性关系良好(r =0.9998)；血浆中UP302低定量下限为5ng·mL-1;本方法日内日间准确度在99.2％～107.3％,日内日间精密度均小于9.3％.结论:本方法灵敏度高,重现性好,操作简便,可用于血浆中UP302浓度的测定.
