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NIRS与HPLC结合快速测定知母中知母皂苷BⅡ的含量
目的:建立知母中知母皂苷BⅡ含量的快速检测方法,实现知母皂苷BⅡ含量的快速、简便、高效测定.方法:采用中国药典中高效液相色谱法测得知母皂苷B Ⅱ的含量作为实测值,并采集知母样品的近红外光谱图,运用TQ Analyst 8.0数据分析软件中的偏小二乘法(PLS),通过预处理、波段范围及主成分数的选择,将实测值与近红外光谱信息进行关联,建立知母皂苷B Ⅱ的佳定量分析模型.结果:所建立的模型内部交叉验证决定系数(R2)、校正均方差(RMSEC)、验证均方差(RMSEP)、交叉验证均方差(RMSECV)以及性能指数(PI)分别为0.975 15、0.094 2、0.080 0、0.369 20、91.0.结论:运用近红外光谱法结合HPLC建立的定量分析模型能够实现知母中知母皂苷BⅡ含量的快速准确测定.
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LC-MS-MS测定配伍黄柏对知母中4种有效成分含量的影响
目的:建立高效液相色谱串联质谱法(LC-MS-MS)测定知母黄柏药对中芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量,研究不同配伍比例对4种成分含量的影响.方法:采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,3.5 μm),柱温30℃,流动相0.1％甲酸水-乙腈,流速0.25 mL· min-1,梯度洗脱;质谱条件为电喷雾(ESI)离子源,负离子多反应离子监测(MRM)用于定量测定.结果:芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ分别在5.05 ～ 404,5.3 ～ 424,5.05 ～404,20.8～1 664 μg·L-1线性关系良好(r≥0.999);平均回收率分别为100.6％,99.2％,99.1％,98.5％.知母单煎时芒果苷、知母皂苷AⅢ含量高;新芒果苷在知柏配伍比例1∶1时含量高;知母皂苷BⅡ的含量各配伍比例没有明显差异.结论:该方法快速、准确,适用于知母黄柏中4种成分的含量测定.知母与黄柏配伍比例不同,芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ的含量不同,配伍黄柏时对知母成分含量有影响.
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HPLC-UV-ELSD同时测定知母黄柏药对提取物中盐酸小檗碱、黄柏碱、知母皂苷BⅡ
目的:建立知母黄柏药对提取物中盐酸小檗碱、黄柏碱、知母皂苷BⅡ的HPLC-UV-ELSD含量测定方法.方法:采用HPLC-UV-ELSD方法,色谱柱:Dikma C(18)(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙睛-0.2%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0mL·min(-1),柱温30℃,UV检测波长280 nm,燕发光散射检测器检测,漂移管温度46℃,氮气压力1.5 Bar.结果:盐酸小檗碱、黄柏碱及知母皂苷BⅡ的线性范围分别是1.008～3.528 μg(r=0.999 5),0.322～1.127 μg(r=0.999 6),0.702～2.457 μg(r=0.999 8),平均加样回收率分别为100.11%,98.97%,99.56%;其RSD分别为1.08%,0.90%,1.37%.结论:该法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于知母黄柏药对提取物中主要有效成分的含量测定.
关键词： 知母黄柏药对提取物 生物碱 知母皂苷BⅡ 高效液相-紫外-蒸发光散射法 -
二母颗粒中知母水提工艺优化
目的:优选二母颗粒中知母的水提工艺.方法:以HPLC测定知母皂苷BⅡ、芒果苷的含量及干膏收率为指标进行综合评价,采用正交试验法,考察溶媒用量、浸润时间、提取时间及提取次数等水提工艺参数.结果:提取次数对水提工艺有显著性影响,确定较佳提取工艺为A1B1C1D3,即知母饮片加6倍量水,不浸泡,提取3次,每次30 min.结论:该优选水提工艺稳定、合理可行.
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知母皂苷AⅢ酶解工艺优选
目的:优选知母皂苷AⅢ的酶解工艺.方法:采用β-葡萄糖苷酶水解知母皂苷制备知母皂苷AⅢ,以知母皂苷AⅢ转化率为指标,通过单因素和正交试验考察反应温度、反应时间、pH及酶用量对知母皂苷AⅢ酶解工艺的影响.结果:佳酶解工艺条件为温度55℃,pH 5.0乙酸-乙酸钠缓冲液,酶用量600 U·g-1,反应时间3h.结论:优选的酶解工艺简单可靠,反应条件温和,适用于工业化生产.
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HPLC-ELSD法同时测定河北产道地药材不同物候期知母中知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量
目的:建立同时测定知母药材中知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测法.研究不同物候期知母道地药材中2种皂苷类成分的积累动态,为佳采收期的制定、品质评价提供参考.方法:采用Thermo C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),乙腈-水梯度洗脱,流速:1mL/min,柱温:25℃.ELSD检测器雾化器流速:2.8L/min,漂移管温度:100℃.结果:知母皂苷AⅢ在0.6950-4.1700μg范围内(r=0.9993),知母皂苷BⅡ在1.0175-6.1050μg范围内(r=0.9996),进样质量的对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系.知母皂苷AⅢ平均回收率为99.88％,RSD=2.34％;知母皂苷BⅡ平均回收率为103.66％,RSD=0.99％.结论:该方法简便、准确、可靠,可同时测定知母药材中2种皂苷类成分的含量.不同物候期知母道地药材中两种皂苷的含量存在显著差异.
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基于肠道菌群代谢的知母皂苷BⅡ体外代谢转化研究
目的 通过大鼠肠道菌群体外实验,观察大鼠肠道菌群对知母皂苷BⅡ的代谢转化情况.方法 收集大鼠新鲜粪便,将大鼠肠道菌加入厌氧培养液得到肠道菌孵育液,加入知母皂苷BⅡ,在厌氧环境中37℃温孵24 h,经沉淀离心,取上清液,采用高效液相色谱和薄层色谱方法对知母皂苷BⅡ降解情况和代谢成分进行分析.结果 知母皂苷BⅡ在大鼠粪便孵育液中很快发生代谢转化,24 h后孵育液中已检测不到知母皂苷BⅡ,能检测出较高浓度的代谢产物.代谢产物经检测为知母皂苷AⅢ.结论离体培养的大鼠肠道菌可对知母皂苷BⅡ进行代谢,初步确定代谢产物为知母皂苷AⅢ.
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高效液相色谱质谱联用法同时测定金莲清热颗粒中荭草苷、知母皂苷等7种成分的含量
目的 建立HPLC-MS测定金莲清热颗粒中荭草苷、牡荆苷、金丝桃苷、新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BⅡ和知母皂苷A Ⅲ7种成分含量的方法.方法 采用Diamonsil C18柱(4.6mm×150 mm,5μm)；柱温30℃；乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相,以800 μL·min-1梯度洗脱；质谱条件:采用电喷雾离子源正负离子模式同时进行检测,多反应监测模式(MRM)用于定量测定.结果 金莲清热颗粒中7种成分峰面积与浓度呈良好的线性关系,r＞0.9992；加样回收率分别为99.34％,99.28％,101.6％,101.3％,100.5％,101.9％和98.86％ (n =3).RSD值分别为1.12％,1.36％,1.57％,1.74％,1.52％,1.43％和0.92％.结论 该方法简便,准确,重现性好,专属性高,可用于金莲清热颗粒的质量控制.
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超高效液相色谱法同时测定知母中芒果苷等6种成分的含量
目的 建立同时测定知母中新芒果苷,芒果苷,知母皂苷BⅡ,2,6,4 '-三羟基-4-甲氧基苯甲酮,构树宁B,顺-扁柏树脂酚的UPLC方法.方法 采用ACQUITY UPLC,HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),流动相为乙腈-0.03％的磷酸水溶液梯度洗脱,流速为0.5 mL· min-1,检测波长采用210和192 nm.结果 新芒果苷,芒果苷,知母皂苷BⅡ,2,6,4 '-三羟基-4-甲氧基苯甲酮,构树宁B,顺-扁柏树脂酚的质量浓度与峰面积分别在15.00 ～ 299.6 μg·mL-1,8.80～175.6 μg·mL-1,40.00 ～800.0 μg·mL-1,2.300～45.60 μg· mL-1,0.420～8.50 μg·mL-1,0.400 ～9.00 μg·mL-1内呈良好的线性关系.平均加样回收率(n=9)均在97.7％ ～ 100.6％之间,RSD均小于1.2％.结论 该方法快速、准确、简便,可作为同时测定知母中新芒果苷,芒果苷,知母皂苷BⅡ,2,6,4’-三羟基-4-甲氧基苯甲酮,构树宁B,顺-扁柏树脂酚的方法.
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高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定黄连清胃丸中栀子苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量
目的:应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定黄连清胃丸中栀子苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量.方法:采用C18色谱柱(4.6 mn×250 mm,5μm);流速为0.9 ml/min;乙腈-水(30∶ 70)为流动相;ELSD漂移管温度为90℃;载气(N2)流速为2.9 SLPM/min.结果:栀子苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ进样量分别在0.061 8～1.236 0μg(r=0.999 2)、0.047 6～0.952 0 μg(r =0.999 7)和0.184 2～3.684 0 μg(r =0.999 3)时进样量的自然对数值与峰面积的自然对数值呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.67％、98.18％和98.36％,RSD分别为1.09％、1.01％和0.98％(n=6).结论:本方法测定结果准确、灵敏、重复性好.
关键词： 黄连清胃丸 栀子苷 知母皂苷AⅢ 知母皂苷BⅡ 高效液相色谱-蒸发光散射检测器法 -
中药知母质量控制方法研究
目的 建立HPLC-DAD同时测定中药知母中芒果苷、知母皂苷BⅡ的方法.方法 采用HPLC法,色谱柱为Hypersil GOLD色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-0.01%磷酸水梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长191 nm和258 nm,柱温:30℃.结果 芒果苷的线性范围在2.944～6.624 μg,r=0.999 8;平均回收率为101.06%,RSD=1.61%(n=6).知母皂苷BⅡ的线性范围在18.080～40.680μg,r=0.9994;平均回收率为103.43%,RSD=1.43%(n=6).结论 3批样品测定结果表明,该方法简便准确,可用于知母中芒果苷、知母皂苷BⅡ2种成分的含量测定.
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HPLC-MS法测定知母盐炙前后8种成分量变化
目的 建立HPLC-MS法同时测定知母中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷E1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷Ⅰ、知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ 8种化学成分量的方法,分析炮制前后各成分量的变化.方法 色谱柱为Agilent SB-C18柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,柱温30℃,进样量10μL.质谱采用大气压电喷雾离子源,选择性负离子模式监测.结果 所测定的8种成分在各自的线性范围内均具有良好的线性关系(r≥0.999 7);平均回收率在97.55％～103.01％,RSD＜2.80％.不同产地知母8种成分的量差异较大,其中芒果苷、知母皂苷BⅡ、知母皂苷AⅢ的量较高.知母盐炙后新芒果苷、芒果苷、知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ量变化不明显,知母皂苷E1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷Ⅰ量下降,知母皂苷BⅢ量上升.结论 该方法简单、灵敏、准确,知母盐炙前后多种成分量发生变化.
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消渴清颗粒UPLC-PDA-ELSD指纹图谱的建立及5个主要成分的测定
目的 建立消渴清颗粒的UPLC-PDA-ELSD指纹图谱研究方法,并对新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BⅡ、巴马汀和小檗碱进行定量测定,为消渴清颗粒的质量控制提供依据.方法 采用RP-UPLC-PDA-ELSD法,分别以芒果苷和知母皂苷BⅡ为参照峰,确定了23个紫外检测共有指纹峰和10个蒸发光检测共有指纹峰,建立了消渴清颗粒的数字化定量指纹图谱,并以三级系统指纹定量法鉴定28批消渴清样品的质量等级.采用外标法,测定了28批样品中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BⅡ、巴马汀和小檗碱的量.结果 19批消渴清颗粒合格,9批不合格;8批消渴清颗粒中5个主要成分的量有异常,定量测定与指纹图谱结果具有一致性.结论 UPLC指纹图谱和5个成分的定量测定方法准确、稳定、简便,可作为消渴清颗粒的质量控制依据.
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知母皂苷BⅡ对照品的快速制备研究
目的 从知母药材中快速分离制备知母皂苷BⅡ对照品.方法 知母药材粗粉用80%乙醇提取,经大孔树脂D-101柱吸附,以30%乙醇洗脱,得到知母总皂苷.用制备RP-HPLC对总皂苷进行分离纯化,采用柱后分流,ELSD同时检测,收集含高质量分数知母皂苷BⅡ的组分.结果 制备产品经化学方法和"C-NMR鉴定:HPLC-ELSD检测,质量分数大于99%.结论 该制备方法简单,重复性好,效率较高,所得化合物质量分数高,可用于知母皂苷BⅡ对照品的制备.
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HPLC-CAD法测定盐制前后知母中知母皂苷BⅡ和菝葜皂苷元
目的：利用HPLC-电雾式检测器（charged aerosol detector，CAD）联用技术建立知母中知母皂苷BⅡ和菝葜皂苷元的测定方法，并比较知母盐制前后两种成分的变化。方法知母皂苷BⅡ以乙腈-水（25∶75）为流动相，进样量为10μL；菝葜皂苷元以甲醇-水（95∶5）为流动相，进样量为20μL；其他色谱条件均采用Thermo C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），体积流量为1 mL/min，柱温为30℃；Corona参数：氮气压力为241.3 kPa，Filter：High，Range：200 pA。结果知母皂苷BⅡ在0.305～4.880μg线性关系良好，r＝0.9994，平均回收率为99.1%，RSD值为1.2%；菝葜皂苷元在0.490～7.840μg线性关系良好，r＝0.9991，平均回收率为98.0%，RSD值为1.3%。知母中知母皂苷BⅡ为3.16%～5.92%，盐制后为4.15%～7.20%；知母中菝葜皂苷元为0.42%～1.39%，盐制后为0.52%～1.54%。结论 CAD检测器具有较为平稳的基线和较高的灵敏度，更加适用于知母皂苷类及含有较弱或无紫外吸收成分的测定，知母盐制后知母皂苷BⅡ和菝葜皂苷元的量均有所升高。
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HPLC-ELSD法测定知母药材中知母皂苷BⅡ的含量
目的：：建立知母药材中知母皂苷BⅡ的含量测定方法。方法：HPLC-ELSD法；C8柱(4.6×150mm,5μm),流动相：乙腈-水（25：75),流速为1.0 ml/min；检测器：蒸发光散射检测器；漂移管温度：105℃；气体流速为3.0 L/min。结果： HPLC-ELSD法测得知母皂苷BⅡ的平均回收率为96.8%，RSD为1.5%。结论：该法准确可靠，简便快速，可用于知母药材的质量控制。
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知母中知母皂苷BⅡ含量测定方法的研究
目的:建立HPLC-ELSD法检测知母中知母皂苷BⅡ的含量测定方法.方法:采用Agilent TC-C18(4.6 ×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(24∶76)；漂移管温度为105℃,载气流速为3.0 L/min.结果:知母皂苷BⅡ进样量在0.7850～19.625 μg范围内呈良好线性关系,平均回收率为103.1％ (n =6,RSD=1.04％).结论:该方法准确可靠,无干扰,可用于知母药材的质量控制.
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HPLC-ELSD同时测定知母药材中4种主要皂苷的含量
目的 建立同时测定知母药材中4种主要皂苷成分的HPLC-ELSD方法.方法 采用Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以水(冰醋酸调节pH 3.3)(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,0～8 min,12％～23％ B;8～25 min,23％B；25 ～ 35 min,23％ ～45％B；35～ 40 min,45％ ～95％B.蒸发光散射检测器漂移管温度55℃,以氮气为雾化气,压力为4.0 Bar.结果 知母皂苷B、知母皂苷E1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷A Ⅲ浓度分别在42.10～ 252.6 μg/ml(r=0.9993)、48.80～292.8 μg/ml(r=0.999 1)、192.2 ～1 153 μg/ml(r=0.999 7)、8.512 ～85.12μg/ml(r=0.998 5)的范围内呈良好的线性关系.4种成分精密度试验RSD＜ 1％,48 h内稳定性RSD＜1％,加样回收率为96.04％ ～ 102.8％.结论 该含量测定方法简便,分离效果好,能同时测定知母皂苷B、知母皂苷E1、知母皂苷BⅡ和知母皂苷AⅢ 4种有效成分的含量,结果准确可靠.
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知母皂苷BⅡ在模拟人体胃肠道环境及生物样品中的稳定性研究
目的 考察知母皂苷BⅡ在不同生理pH介质和生物样品中的体外稳定性.方法 取知母皂苷BⅡ分别在不同生理pH介质(pH 1.2,6.8,7.4,8.0)的缓冲液、人工胃液、无蛋白酶人工胃液、人工肠液、无蛋白酶人工肠液介质和离体生物介质中进行孵育,利用HPLC测定不同介质中知母皂苷BⅡ的含量变化,考察知母皂苷BⅡ的降解情况及酶稳定性.结果 知母皂苷B Ⅱ在不同生理pH介质溶液中9h内未发生明显降解,在离体大鼠大肠和小肠及其内容物中发生明显降解.结论 知母皂苷B Ⅱ在模拟人体胃肠道环境的溶液中很稳定,不会发生明显降解,在大鼠大肠及其内容物和小肠及其内容物中发生明显降解,不受胃蛋白酶和胰蛋白酶的影响,受肠道茵群作用的影响.
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知母皂苷BⅡ对Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用
目的 研究甾体皂苷类化合物知母皂苷BⅡ对AB,25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用.方法 体外培养原代大鼠神经细胞,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测细胞增殖活性;采用分光光度法测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)漏出率、SOD(超氧化物歧化酶)活力、MDA(丙二醛)含量以及AChE(乙酰胆碱酯酶)活力.结果 知母皂苷BⅡ10-4、10-3mol·L-1能明显增强Aβ25-35(20 μmol·L-1)诱导的神经细胞增殖活性,降低LDH漏出率,并能明显提高其SOD活力、降低MDA含量,同时对AChE活力具有一定的降低作用.结论 知母皂苷BⅡ能明显改善Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤,可能与其提高模型细胞的抗氧化能力,改善胆碱能系统相关.
