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白花前胡甲素和丙素对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成影响的实验研究
目的 探讨白花前胡甲素(Pd-Ia)及白花前胡丙素(Pra-c)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型血管生成作用的影响.方法 将鸡胚随机分为生理盐水组、溶媒对照组、贝复济(bFGF)组、Pd-Ia 0.2mmol·L-1组、Pra-c 0.1mmol·L-1组、Pra-c 1mmmol·L-1组,检测各组CAM的血管增生程度.结果 在血管新生方面,实验所用浓度的Pd-Ia和Pra-c均具有较明显的作用,与生理盐水组和溶媒对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01、P<0.05),而与阳性对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 Pd-Ia和Pra-c可促进CAM血管增生,具有一定的促血管新生作用.
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19种抗鸡胚尿囊膜血管生成中药成分功效比较研究
目的:寻找具有抑制血管生成作用较强的中药成分.方法:种蛋随机分为21组,孵育7d后,将文献中报道的19种具有抗血管生成作用的中药成分及生理盐水溶液分别加于鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)表面的载体上.作用4d后,观察统计CAM上血管生长状况.结果:19种中药成分中,滕黄酸、青蒿琥脂、人参皂苷、苦参碱、斑蝥素抑制CAM血管生成效果较好,抑制血管生成强弱顺序为:滕黄酸＞人参皂苷＞青蒿琥脂＞苦参碱＞斑蝥素,其一级血管抑制率分别为22.78％,22.47％,19.46％,18.51％,18.35％,其二级血管抑制率分别为17.44％,17.17％,16.38％,16.78％,15.32％,与生理盐水组相比均有显著差异(P＜0.05).结论:滕黄酸、青蒿琥脂、人参皂苷、苦参碱、斑蝥素具有较强抑制血管生成的效果.
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当归、黄芪注射液对鸡胚绒毛尿囊膜模型的毒性研究
目的:通过观察当归、黄芪注射液对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型的毒性,探讨当归、黄芪注射液利用CAM模型研究血管生成的可行性.方法:制备CAM模型,观察应用当归、黄芪注射液及不同配比后CAM模型的存活情况.结果:当归、黄芪注射液及不同配比对CAM模型的存活无毒性,与生理盐水对照组相比无显著性差异(P>0.05).结论:可以利用CAM模型研究当归、黄芪注射液的促血管生成作用.
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人胰腺癌鸡胚模型的建立及其肿瘤生物学观察
目的建立人胰腺癌鸡胚移植模型,为临床胰腺癌研究提供一种简便实用的工具.方法将人胰腺癌细胞系SW1990细胞接种到鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上,动态观察移植瘤的形态及肿瘤生物学特性,分析影响移植瘤成活的因素,并对瘤组织行组织学检查.结果成功建立了人胰腺癌鸡胚移植模型,移植瘤组织学结构与人胰腺癌相似;接种癌细胞数量影响接种成瘤率,接种癌细胞数量越大,成瘤率越高;移植瘤可诱发血管生成并向肿瘤呈放射状集中.结论将SW1990细胞接种到鸡胚上建立鸡胚移植胰腺癌是可行的,本模型可动态观察胰腺癌生长,模拟其在体内生长情况,为胰腺癌研究提供一种简便实用的工具.
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参松养心胶囊促血管新生的实验研究
目的 观察参松养心胶囊对鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)血管新生的影响,探讨该药促进血管新生的可能机制.方法 随机各取15只雄性Wistar大鼠分别制作常规血清和参松养心胶囊血清.建立CAM模型,将60枚存活鸡胚随机分为生理盐水组、空白血清组、血管内皮细胞生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)组和参松养心胶囊组,每组15枚.观察血管新生形态,计数各组CAM上载体周围血管数目,体外培养人脐静脉内皮细胞,应用MTT法测定各组吸光度(A)值.结果 与生理盐水组比较,VEGF组和参松养心胶囊组血管以载体为中心呈辐辏状生长,血管总数明显增多,有显著差异[(33.71±3.36)支和(34.51士3.34)支vs (22.11±2.05)支,P＜0.05].与生理盐水组和空白血清组比较,参松养心胶囊组A值明显增加,差异有统计学意义(1.23±0.21 vs 0.91±0.15和0.96±0.14,P＜0.05).结论 参松养心胶囊具有促进CAM血管新生作用,其机制可能与促进内皮细胞增殖有关.
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鸡胚绒毛尿囊膜技术的改进
目的:摸索改进鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)技术,为抗血管形成药物筛选提供良好的体内血管实验模型.方法:对传统的蛋壳上开窗方式的CAM技术进行改进,将孵育3 d的鸡胚脱离蛋壳移入平皿中,继续孵育3 d后将待测药物植入到CAM和卵黄囊膜(yolk sac membrane,YSM)上,24 h后观察药物对CAM和YSM血管的作用.结果:平皿中孵育鸡胚至第6天,鸡胚存活率为46.7%,生长状况良好,CAM直径达到1.2 cn.检测的6种药物出现两种不同的心血管效应,即抑制和吸引趋化血管的效应.结论:平皿中孵育CAM技术在研究药物、生物因子、肿瘤等的血管效应方面有良好的应用价值.
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益气养阴方对CAM移植瘤组织MMP-2表达的影响
目的 研究益气养阴方对肿瘤诱导鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成及对CAM移植瘤细胞细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的效应.方法 将大鼠20只随机分为2组,即药物组和对照组,各10只.药物组予益气养阴方水煎液灌胃,对照组予相同容积的0.9%氯化钠注射液灌胃,制备含药血清和对照血清.制备接种肿瘤细胞的CAM模型,分别予对照血清和含药血清各100 μL,观察肿瘤细胞诱导血管生长情况,于解剖显微镜下观察CAM血管,计数血管数目和血管的面积,观察CAM移植瘤组织生长情况,并取肿瘤组织进行组织学观察,应用免疫组织化学及其组织形态学定量分析方法对MMP-2在CAM移植瘤中的表达进行研究.结果 含药血清组CAM血管数目、血管面积均低于对照血清组,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01);含药血清组MMP-2灰度值高于对照血清组,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 益气养阴方对肿瘤诱导的CAM血管生成有明显抑制作用,降低MMP-2的表达可能是其抑制肿瘤血管生成的主要机制之一.
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通心络促血管生成作用的实验研究
目的探讨中药通心络对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型血管生成作用的影响.方法运用血清药理学的方法制备药物血清,鸡胚随机分为空白血清组、贝复济组及通心络大、小剂量组,检测尿囊膜的血管增生程度.结果通心络大剂量组CAM的血管增生数明显高于空白血清组(P＜0.05),而与贝复济组无明显差异(P＞0.05);通心络小剂量组与空白血清组相比无明显差异(P＞0.05).结论通心络可促进鸡胚绒毛尿囊膜的血管增生,具有一定的促血管新生作用.
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川芎嗪对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成影响的实验研究
目的:观察川芎嗪对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响.方法:将90只8d龄鸡胚随机分成6组(生理盐水组、贝复济组、盐酸川芎嗪A组、B组、C组、D组),建立CAM模型,将NS、bFGF、4种浓度的川芎嗪分别加在CAM表面的载体上,继续孵育3d后制备CAM标本,观察血管生成表现,并进行新生血管计数.结果:川芎嗪各浓度组新生血管数增加,与生理盐水组和贝复济组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:川芎嗪具有促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成作用,川芎嗪促血管生成作用与其浓度有一定依赖关系.
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芪丹通脉片含药血清促血管生成的实验研究
目的:探讨芪丹通脉片含药血清对体内外血管生成的促进作用.方法:采用鸡胚绒毛尿囊膜模型(CAM),现测芪丹通脉片含药血清对CAM新生的促进作用;采用流式细胞术检测芪丹通脉片含药血清对内皮细胞周期的影响;采用免疫组织化学染色法检测内皮细胞VEGF的表达.结果:芪丹通脉片能够明显促进CAM血管新生,但弱于bFGF组;芪丹通脉片促进内皮细胞生长,增加细胞周期中S期细胞的数.芪丹通脉片能够上调VEGF的表达.结论:芪丹通脉片具有促进血管生成作用,其机制与促血管内皮细胞增殖以及上调VEGF的表达有关.
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胃癌细胞鸡胚移植模型中血清基质金属蛋白酶9检测意义
目的:测定胃癌细胞接种至鸡胚绒毛尿囊膜后的成瘤过程中鸡胚血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)含量变化.方法:利用形态学方法观察胃癌细胞接种至鸡胚绒毛尿囊膜后的成瘤过程,并通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测不同时间点鸡胚模型血清中MMP-9含量的变化,并结合胃癌生物学行为进行分析.结果:1×106*ml-1胃癌细胞组于接种72 h后,出现肉眼可见独立结节,随时间推移,结节体积增大,且鸡胚绒毛尿囊膜上较大血管向结节处集中;1×106*ml-1胃癌细胞组,72 h后血清MMP-9含量明显增高,至7 d时达到高值.结论:胃癌细胞的成瘤过程中MMP-9水解酶含量明显增加,此模型用于胃癌特性的研究是可行的.
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黄芪注射液浓缩液微乳促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响
目的 探讨黄芪注射液浓缩液微乳对鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管生成的影响.方法 三黄肉鸡种蛋随机分为4组,孵育5 d后,将黄芪注射液浓缩液微乳、黄芪注射液浓缩液、空白微乳,生理盐水对照品分别加于CAM表面的载体(Ⅰ型胶原)上,作用后制备CAM标本,解剖显微镜下计数新生血管数目.结果 促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成作用强弱的顺序依次为:黄芪注射液浓缩液微乳＞黄芪注射液浓缩液(P＜0.05)>生理盐水(P＜0.01)>空白微乳;生理盐水与空白微乳组无显著差异.结论 黄芪注射液浓缩液微乳具有明显促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用.
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和厚朴酚抗血管生成作用的实验研究
目的:本研究通过检测和厚朴酚在体内对鸡胚尿囊膜(chicken chorilallantoic membranes,CAM)血管生成的抑制作用及体外对肿瘤血管生成的影响,探讨和厚朴酚的抗血管生成作用及其初步机制.方法:(1)用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测和厚朴酚对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)、人成纤维细胞及人结肠癌RKO细胞增殖的抑制作用;(2)采用鸡胚绒毛尿囊膜模型,观测和厚朴酚对CAM新生血管生成的抑制作用;(3)逆转录聚合酶链反应(RT-RCR)方法检测和厚朴酚对RKO细胞血管内皮生长因子A(VEGF-A)mRNA表达及细胞培养上清液VEGF蛋白分泌的影响.结果:和厚朴酚对血管内皮细胞具有优先抑制作用,对HUVEC的半数抑制剂量(inhibitory concentration 50%,IC50)为14.5μmol/L,而对原代培养的人成纤维细胞的IC50高达150 μmol/L,对人结肠癌RKO细胞的IC50为42 μmol/L;和厚朴酚0.1 μg/只和0.2μg/只剂量时显著抑制CAM新生血管形成,抑制率分别为58%和86%;和厚朴酚在10 μmol/L和20 μmol/L剂量时显著抑制RKO细胞的VEGF-A mRNA表达及细胞培养上清液中VEGF蛋白的分泌,具有显著性差异.结论:和厚朴酚在非凋亡剂量时具有抗血管形成作用,其机制与抑制血管内皮细胞增殖以及抑制肿瘤细胞表达VEGF有关.
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血小板反应素1抗血管生成活性片段(TSP-1-2)的纯化与活性初步检测
目的 为研究抗肿瘤基因工程药物的表达奠定基础.方法 将实验中得到的抗血管新生作用的活性片段TSP-1-2多肽在尿素中溶解并复性,通过离子交换柱纯化后得到纯品.采用鸡胚绒毛尿囊膜技术,观察TSP-1-2多肽对鸡胚血管新生的抑制作用.结果 绝大部分TSP-1-2多肽溶解于尿素;经过Q-sepherose阴离子交换柱后,得到TSP-1-2多肽纯品,其浓度为2mg/ml;10μg的TSP-1-2多肽对鸡胚绒毛囊膜血管生成的抑制作用效果非常显著,30μg TSP-1-2多肽几乎完全抑制血管生长,抑制程度超过10μg的TSP-1-2多肽.而PBS对照对鸡胚绒毛囊膜血管生成没有抑制作用.结论 经过Q-sepherose阴离子交换柱后,可以将TSP-1-2多肽纯化;TSP-1-2多肽对鸡胚的血管新生有明显的抑制作用.
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蝎毒多肽对鸡胚血管生长的抑制作用
目的:探讨从东亚钳蝎蝎毒中分离的蝎毒多肽(sTP)对血管形成的抑制作用.方法:采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)的新生微血管模拟肿瘤的新生血管,用玻璃纤维滤纸吸附生理盐水和0.8μg、0.5 μg的STP作为移植片,分别置入各组鸡胚的CAM上,孵化48 h后,观察STP对CAM新生血管形成的影响.结果:0.5μg STP实验组微血管密度及母血管的扩张均明显低于生理盐水组(P＜0.01),表明STP能明显抑制CAM的新生血管的生长.结论:提示小剂量蝎毒多肽是一种有效的天然新生血管形成阻断剂.
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红芪多糖促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究
目的:探讨分子量50 000以下红芪多糖成分对鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)血管生成的影响.方法:通过超滤技术制备分子量50 000以下红芪多糖成分,并将其高(2 mg/mL)、中(1 mg/mL)、低剂量(0.5 mg/mL)水溶液及生理盐水、表皮细胞生长因子(EGF)对照品加于CAM表面的载体上,作用后制备CAM标本,解剖显微镜下计数新生血管数目.结果:分子量50 000以下红芪多糖具有明显的促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用,与NS对照组相比有显著性差异(P<0.05),但药效明显低于EGF对照组(P<0.01).结论:分子量50 000以下红芪多糖成分可促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成.
关键词： 红芪多糖/药效学 分子量50000以下 血管生成/药物作用 绒毛尿囊膜 -
鸡胚尿囊膜法筛选具有抑制血管生成作用的中药
目的 筛选具有抑制新生血管生成作用的药物,为肿瘤治疗提供新的药物.方法 种蛋随机分为16组,孵育8 d后,将熬制的15种单味中药及0.14 mol·L-1NaCl溶液分别加于鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)表面的载体上.作用4 d后,观察统计CAM上血管生长状况.结果 在筛选的15味中药中,牡丹皮和香附子对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成具有明显的抑制作用,与NaCl组相比有显著差异(P<0.05).结论 牡丹皮和香附子能有效抑制新生血管生成.
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丹参酮ⅡA对CAM血管生成影响的实验研究
目的 探讨丹参酮ⅡA(TsⅡA)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型血管生成作用的影响.方法 将鸡胚随机分为生理盐水组、溶媒对照组、bFGF组、 TsⅡA 0.005 mol/L组、TsⅡA 0.010 mmol/L组、TsⅡA 0.015 mmol/L组,检测尿囊膜的血管增生程度.结果 ①各组浓度的TsⅡA均具有较明显的促血管新生作用,与生理盐水组和溶媒对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);TsⅡA 0.010 mol/L组和TsⅡA 0.015 mol/L组与bFGF组相比,差异无统计学意义(P>0.05);②具有一定的剂量依赖关系:TsⅡA 0.010 mol/L组与TsⅡA 0.005 mol/L组相比,差异有统计学意义(P<0.05),但TsⅡA 0.010 mol/L组与TsⅡA 0.015 mol/L组相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 活血化瘀中药单体--TsⅡA可促进CAM的血管增生,具有一定的促血管新生作用.
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超声激活血卟啉声动力作用对鸡胚绒毛尿囊膜VEGF表达的影响
目的:本研究探讨超声激活血卟啉(Hematoporphrin,Hp)声动力作用对鸡胚绒毛尿囊膜(Chorioallantoie membrane,CAM)的血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial cell growth factor,VEGF)表达的影响,为应用声动力疗法(Sonodynamic therapy,SDT)进行抗肿瘤血管新生提供实验基础.方法:种蛋随机分为4组,孵育7d后建CAM模型,随机分为空白组、单纯超声组、单纯Hp组、声动力治疗组.各组药物分别加于CAM表面的载体上,作用后制备标本,用免疫组化检测各组鸡胚CAM VEGF表达情况.结果:与空白组相比,单纯Hp组差异无统计学意义(P>0.05);单纯超声组、声动力治疗组与之差异有统计学意义(p<0.05);单纯超声组与声动力治疗组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:Hp介导的声动力作用显著抑制了鸡胚绒毛尿囊膜VEGF的表达,这可能是其抑制新生血管形成的重要机制.
关键词： 声动力作用 血卟啉 血管生成 绒毛尿囊膜 血管内皮细胞生长因子 -
牡蛎多肽抗血管生成作用研究
背景与目的 血管发生、新血管的形成是肿瘤生长及其转移灶形成的根本原因,因此,抗血管生成治疗已成为目前一种极具潜能的肿瘤治疗策略.本实验利用鸡胚胎模型和人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein en-dothelial cells,HUVECs)对牡蛎多肽(Oyster polypeptide,OPP)在体内及体外的抗血管生成作用及其机制进行了研究.方法 利用鸡胚胎绒毛尿囊膜血管发育研究体内OPP对血管形成作用;MTT、平板划痕、Transwell板、管腔形成及电镜等方法观察OPP对HUVECs的增殖、迁移、侵袭等作用.结果 体内实验表明OPP能明显抑制鸡胚胎绒毛尿囊膜血管的形成.MTT结果表明OPP能明显抑制HUVECs的增殖,IC50为400μg/mL.平板划痕法结果表明,200μg/mL、400μg/mL和800μg/mL OPP作用12 h对HUVECs迁移的抑制率分别为18.75%、37.93%和74.07%;侵蚀实验结果显示200μg/mL、400 μg/mL和800 μg/mL的OPP对HUVECs迁移的抑制率分别为15.5%、37.29%和67.24%(P<0.05).管腔形成结果表明200 μg/mL、400μg/mL和800 μg/mL的OPP对HUVECs(作用10h)小管形成的抑制率分别为52.43%、84.47%和96.12%(P<0.01).此外,电镜结果显示,400μg/mL的OPP对HUVECs作用48 h能诱导细胞明显凋亡.结论 OPP可通过抑制内皮细胞增殖、迁移、管腔形成和促进内皮细胞凋亡,而具有显著抗血管生成作用.
