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地黄低聚糖对大鼠肝损伤造成的血氨升高和认知障碍的影响
目的 观察地黄低聚糖对大鼠肝损伤造成的血氨升高和认知障碍的预防和治疗作用,并初步探讨其作用机制.方法 将雌、雄大鼠各 60 只随机分为空白组、模型组、地黄低聚糖低、中、高剂量组和乳果糖组;1、雄性组:.采用连续口服给药14天后腹腔注射1 %的氨基半乳糖溶液造模.观察急性肝损伤大鼠的肝性脑病(HE)的发生率及地黄低聚糖的预防治疗作用,测定比较各组大鼠的肝功能、血氨、内毒素等水平.2、雌性组:0.1%硫代乙酰胺造模30天后灌胃给药15天,并于给药第12日进行水迷宫试验3天,末次给药1 h后进行测试,并测定肝功及血氨等水平.结果①模型动物在注射氨基半乳糖24 h后血氨显著升高,与空白对照组相比较差异有统计学意义(P ＜0.05);地黄低聚糖大、中、小三个剂量组对氨基半乳糖所致大鼠血氨升高均表现出明显的抑制作用,与模型对照组相比较差异有统计学意义(P ＜0.01).②慢性硫代乙酰胺中毒可导致大鼠肝损害后继发记忆障碍及学习能力下降.通过给大鼠口服地黄低聚糖 2周,上述现象可有明显改善.结论地黄低聚糖对大鼠肝损伤造成的血氨升高和认知障碍有改善作用.
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地黄低聚糖抗过氧化氢诱导的脂肪间充质干细胞凋亡的保护作用
目的 观察地黄低聚糖对H2O2诱导的人脂肪间充质干细胞凋亡的影响.方法 将体外培养的人脂肪间充质干细胞随机分成正常对照组(N组,无特殊处理)、H2O2组(H组)和地黄低聚糖组(R组).H组加入终浓度0.1 mmol/L的H2O2 ;R组加入终浓度0.2 g/L的地黄低聚糖和终浓度0.1 mmol/L的H2O2.三组的干预时间分别为1 h、6 h和24 h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 干预1 h、6 h和24 h 后,H组脂肪间充质干细胞凋亡率明显高于N组和R组( P<0.01);R组脂肪间充质干细胞凋亡率明显低于H组( P<0.01).结论 地黄低聚糖可减轻H2O2诱导的人脂肪间充质干细胞凋亡.
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地黄低聚糖对骨骼肌成肌细胞瞬时外向钾电流的影响
目的 从细胞瞬时外向钾电流(Ito)角度,探讨地黄低聚糖(RGOs)对骨骼肌成肌细胞(SMs)电生理特性的影响.方法 分离成年大鼠心肌细胞和SMs,运用膜片钳技术研究心肌细胞和SMs以及0.625g·L-1RGOs干预后,SMs与心肌细胞Ito的差异.结果 两种细胞Ito均从-40mV时开始激活,RGOs对大鼠SMs Ito有增加作用,从-30mV到30mV,经过0.625g·L-1RGOs预处理的SMs组Ito密度[(7.3±0.7)to(65.3±2.3)pA/pF(n=5)]显著高于心肌组[(0.9±0.1)to(28.8±0.9)pA/pF(n=5)3和SMs组[(4.5±0.5)to(23.7±2.0)pA/pF(n=5)3的电流密度.结论 RGOs能显著提高SMs的Ito密度,影响移植的SMs的电生理特性.这为今后在提高干细胞移植有效性同时,增加其安全性提供了一个新的思路.
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地黄低聚糖诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究
目的 观察地黄低聚糖(RGOs)体外诱导骨髓间充质干细胞(MScs)定向分化为心肌样细胞的作用.方法 采用贴壁培养法分离大鼠MSCs,反复传代及纯化后,取第8代MSCs进行分组诱导:RGOs组(RGOs终浓度100μg/ml)、5-氮胞苷(5-Aza)组(5-Aza终浓度10μmol/L)、RGOs+5-Aza组和空白对照组.诱导后继续培养4周.采用Access化学发光法和干化学法分别检测诱导后MSCs内心肌特异性肌钙蛋白 I(cTnI)和心肌酶CK、CK-MB的表达,免疫荧光法和Western blotting法榆测诱导后MSCs内cTnl、缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达.结果 诱导后各组MSCs均表达cTnI、CK和CK-MB,RGOs+5-Aza组中CK、CK-MB的表达水平较RGOs组、5-Aza组增高,差异有统计学意义(P<0.05).免疫荧光结果显示:在未诱导MSCs的空白对照组中未发现cTnI、Cx43阳性细胞,各诱导组MSCs均可见cTnI阳性细胞和Cx43阳性细胞,且RGOs+5-Aza组cTnI、Cx43荧光强度较RGOs组、5-Aza组增高.Western blotting结果显示空白对照组无阳性条带出现,各诱导组均出现cTnI和Cx43阳性条带,且RGOs+5-Aza组cTnI和Cx43表达量较RGOs组、5-Aza组增高.结论 RGOs可以在体外诱导大鼠MSCs分化为心肌样细胞,与5-Aza联合应用后其诱导MSCs内心肌特异性物质表达的作用较单药更强.
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地黄低聚糖对脂肪间充质干细胞增殖的影响
目的 分离培养人脂肪源性间充质干细胞(human adipose tissue-derived mesenchymal stromal cells,hADMSCs),探讨地黄低聚糖对其体外增殖的影响.方法 腹部外科手术患者术后废弃的脂肪组织用胶原蛋白酶I消化后培养,免疫组织化学方法鉴定其表面分子CD44、CD105、CD45、CD34的表达,鉴定细胞为hADMSCs后,应用不同浓度的地黄低聚糖IMDM(1、10、100、400mg·L-1)体外培养hADMSCs,应用MTT比色法检测RGOs对ADMSCs增殖能力的影响.结果 1、10rag·L-1组与对照组相比无显著性差别,100、400mg·L-1组的地黄低聚糖培养基对hADMSCs的增殖有明显的促进作用,且100rag·L-1RGOs的促hADMSCs增殖作用强(P＜0.01).结论 一定浓度的地黄低聚糖对hADMSCs的增殖能力具有促进作用.
关键词： 脂肪源性间充质干细胞 地黄低聚糖 增殖 -
超滤和纳滤分离技术提取纯化地黄低聚糖的研究
目的 通过不同截留相对分子质量的超滤膜对地黄多糖分离纯化,再利用纳滤膜对超滤液进行浓缩纯化.方法 采用不同截留相对分子质量超滤再纳滤的工艺流程.结果 两次超滤得到低聚糖,佳操作条件为:料液质量浓度为13～132 mg/mL,操作压力为0.25～0.275 Mpa,温度20～40℃.然后采用纳滤膜对超滤液进行浓缩纯化,适宜工艺条件为:料温为20～40℃,操作压力0.59～0.79 Mpa,浓缩倍数可达3倍.应用超滤-纳滤技术,低聚糖得率为46.63%,质量分数达到93.3%,凝胶过滤法验证低聚糖制品的相对分子质量低于6 000.结论 该工艺能有效分离纯化地黄低聚糖,简单可行,操作简便.
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不同浓度地黄低聚糖对离体培养成年大鼠骨骼肌成肌细胞增殖的影响
目的 观察不同浓度地黄低聚糖(RGOs)对离体培养成年大鼠骨骼肌成肌细胞(SMs)增殖的影响.方法 分离成年大鼠SMs,每日观察细胞的生长形态.第3代(培养10 d后)的SMs行α-骨骼肌肌动蛋白免疫组化染色.用无血清培养液[Dulbeceo改良Eagle培养基(DMEM)/F12]孵育原代培养3 d的SMs 24 h使细胞同步化,分别以RGOs终浓度为0(对照)、0.156、0.625、2.500和10.000 g/L含体积分数为15%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养液培养,连续计数6 d.从原代培养到细胞计数,整个过程分别重复3次,取平均值,观察不同浓度RGOs对SMs增殖的影响.结果 本研究方法分离的SMs经锥虫蓝染色显示成活率均在90%以上.原代分离提纯的SMs α-肌动蛋白(α-actin)染色阴性;传代2次后(距原代分离10 d),α-actin染色阳性.RGOs可明显促进原代分离的SMs增殖,这种效应反映在指数增长期提前,细胞分裂数量增加,肌管融合速度增加,较低浓度(0.156～2.500 g/L)时,促增殖效应呈剂量依赖性(P均＜0.05);但给予高浓度(10.000 g/L)时并不能进一步促进SMs增殖.结论 RGOs可以明显改变SMs生长特性,适干预浓度为0.625 g/L.有望为临床上心肌梗死的中西医结合细胞学治疗提供实验依据.
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地黄低聚糖提取液脱色工艺研究
应用正交试验法研究地黄低聚糖提取液活性炭脱色的工艺条件，实验表明：加碳量为药材量的6%，保温80℃，80 r/min搅拌30 min为佳工艺条件，得到水苏糖平均含量为62.97%，光吸收杂质平均清除率为82.33%。
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地黄低聚糖对人脂肪组织源性间充质干细胞分泌血管内皮细胞生长因子的影响
目的 探讨地黄低聚糖(RGO)对分离、培养的人脂肪组织源性间充质干细胞(ADMSCs)分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响.方法 人脂肪组织用2.5 g/L胶原蛋白酶Ⅰ消化、分离ADMSCs.取沉淀的细胞进行培养,用免疫细胞化学染色法鉴定其表面CD44、CD105、CD45和CD34分子的表达.以IMDM培养基作为空白对照,加入RGO配成不同浓度(0、1、10、100及400 mg/L)的IMDM分别培养ADMSCs,用MTT比色法检测ADMSCs的增殖.培养72 h后,用ELISA法测定不同培养基中VEGF的含量.结果 免疫细胞化学染色显示,分离培养的细胞表面CD44+、CD105+、CD34-、CD45-.MTT比色法的结果显示,与空白对照组相比,1和10 mg/L组无明显差别,100及400 mg/L组明显升高(均P<0.01),且100 mg/L组明显高于400 mg/L组(P<0.05).0、1、10、100、400 mg/L5个组VEGF的含量,分别为(627.88±33.86)、(655.50±40.29)、(666.50±43.20)、(843.50±53.05)和(722.88±51.34)ng/L.结论 RGO对ADMSCs的增殖有促进作用,且呈一定的浓度依赖性,并导致其分泌VEGF的作用增强.
关键词： 脂肪组织源性间充质干细胞 血管内皮生长因子 地黄低聚糖
