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LC-MS/MS测定大鼠血浆中香柑内酯及其药代动力学研究
目的:建立测定香柑内酯(berg)血浆药物浓度的液相色谱-电喷雾离子化-质谱(LC-ESI-MS)联用的分析方法,并探讨其在大鼠体内的药动学.方法:采用Hypersil ODS柱(4.6 mm×250 mm,5 mm),流动相甲醇-水(77.5∶2.5),流速0.8mL·min-1,柱温30℃,检测波长300 nm.结果:Berg在8.12 ～162.4 μg·L-1(r =0.999 9)线性关系良好.方法学考察均符合要求.日内、日间变异系数(RSD)均＜10％,精密度和准确度等均符合生物样品分析的要求.结论:该法准确、灵敏、特异,适用于berg的体内定量分析,berg在大鼠体内药动学过程属于一级吸收二室模型.
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口服甘草次酸对大鼠血清中6种金属元素的影响
实验利用LC-MS/MS和火焰原子吸收光谱法方法测定大鼠口服甘草次酸后血浆中甘草次酸浓度和血清中6种金属元素钙(Ca),铜(Cu),铁(Fe),钾(K),镁(Mg),钠(Na)浓度,并分析甘草次酸对血清中6种元素的影响.检测结果表明大鼠口服甘草次酸后血清中Na,Cu元素浓度与甘草次酸血药浓度变化趋势相同.血药浓度在给药后2h达峰值,血清中Na,Cu元素在给药后4h浓度有显著增加(P＜0.05).随着给药剂量的增大,血清中Na,Cu元素浓度升高,当给药剂量为400,200 mg·kg-1时Na,Cu元素与对照组相比有显著性升高(P＜0.05),对其他元素浓度则无显著性影响.本实验研究探讨了口服甘草次酸引起大鼠血清中6种金属元素的变化,为甘草次酸在临床中使用的副作用提供了实验依据.
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夏枯草中胰脂肪酶抑制剂的筛选、鉴定与活性评价
该实验首先采用羧基磁珠固定化胰脂肪酶筛选出夏枯草中可能的胰脂肪酶抑制剂,然后通过LC-MS/MS鉴定,标准品比对确认,后采用对硝基苯酚法测定抑酶活性及抑制类型.结果:从夏枯草中共筛选出4个胰脂肪酶抑制剂,并经过了LC-MS/MS鉴定和混合对照品确认,其IC50和抑制类型分别为咖啡酸[(252.3±3.6) mg·L-1,反竞争性抑制]、芦丁[(91.2±1.6) mg·L-1,竞争性抑制]、橙皮苷[(31.5+4.4) mg·L-1,竞争性抑制]、熊果酸[(41.3±2.2) mg·L-1,竞争性抑制].4抑制剂抑制类型与抑酶活性与其分子空间大小、疏水性和氢键数目,特别是与PL三联体形成氢键数目相关.
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羚羊角与山羊角蛋白质类成分比较研究
应用SDS-PAGE与LC-MS/MS技术对羚羊角与山羊角中蛋白质类成分进行鉴定分析研究.采用胶内酶切制备羚羊角与山羊角酶解肽段,通过nano LC-LTQ/Orbitrap MS鉴定蛋白质类成分,从羚羊角中鉴定了101个蛋白质,山羊角中鉴定了140个蛋白质;羚羊角中共含有43个角蛋白(KRT)及角蛋白相关蛋白(KAP),占总蛋白数量的42.6％,山羊角中KRT与KAP共52个,占总蛋白数量的37.1％.羚羊角与山羊角比较结果表明,两者共性成分是以角蛋白为主的分子结构相关蛋白质,两者在蛋白质种类构成方面具有相似性.该文研究为羚羊角与山羊角系统物质基础研究提供测定方法与实验数据,对角类动物药的功效物质基础研究、质量标准研究等具有指导意义.
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雷公藤药材真伪鉴别及质量评价研究
随着雷公藤药材在临床应用比较广泛,其市场上的伪品较多,传统技术不能有效的鉴别该中药的真伪.该实验拟基于DNA条形码和化学指纹图谱方法对雷公藤属药材进行准确的鉴定及质量评价.采用DNA条形码技术、隐马尔可夫模型的HMMer注释方法和K2P模型进行遗传距离分析,并结合近距离法、相似性搜索法、构建NJ树等方法对雷公藤的DNA序列进行鉴定和评估;采用UPLC-PDA方法建立雷公藤药材指纹图谱,评价不同来源的药材指纹图谱的相似度;采用LC-MS/MS方法检测雷公藤主要成分的含量.结果表明:药材基原物种雷公藤的ITS2序列种内大K2P遗传距离均远小于其与混伪品的种间小K2P遗传距离;应用相似性搜索法分析结果表明ITS2序列初步鉴定雷公藤药材及其混伪品;在NJ聚类树上雷公藤药材及其混伪品聚类较为清晰,初步分析27份样品中有12种为雷公藤正品.化学指纹谱研究表明特征1区可以较为直观的区分雷公藤伪品;LC-MS/MS.HCA-热图分析表明不同产地雷公藤药材6种有效成分的含量差异显著,可评价雷公藤药材的质量.该实验对雷公藤属的药材准确鉴定及质量评价具有指导意义.
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TPGS修饰的青蒿琥酯脂质体及其代谢产物在大鼠体内组织分布研究
青蒿琥酯作为一种抗疟药物被广泛使用,制成脂质体可以改变其生物利用度差的特点,同时其在体内的组织分布可能改变,因此需对TPGS修饰的青蒿琥酯脂质体(ARS-TPGS-Lipo)在大鼠体内的组织分布进行研究.采用薄膜水化法制备ARS-TPGS-Lipo和青蒿琥酯脂质体(ARS-Lipo),同时建立LC-MS/MS检测大鼠组织中青蒿琥酯(ARS)和双氢青蒿素(DHA)含量的方法,并测定大鼠尾静脉注射ARS-TPGS-Lipo,ARS-Lipo和ARS注射液(5 mg·kg-1)后不同时间点的组织药物浓度.实验结果显示该方法适用于分析生物样品中的ARS和DHA的含量.ARS-TPGS-Lipo,ARS-Lipo和ARS组中的ARS及其代谢产物DHA在大鼠的组织中分布差异较大,使用TPGS修饰后的青蒿琥酯脂质体中的药物浓度在肝脏中浓度高,且有显著性差异.ARS经注射给药后1h内快速消除;ARS-Lipo组测得的ARS和DHA在肝、脾中的浓度较高;而ARS-TPGS-Lipo组中测得的ARS和DHA仅在肝脏中的浓度显著提高(P＜0.05).
关键词： TPGS修饰的青蒿琥酯脂质体 组织分布 LC-MS/MS -
银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸的LC-MS/MS含量测定研究
该实验建立了同时测定银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸含量的LC-MS/MS方法.采用Agilent Zorbax Eclipse plus C18色谱柱(3.0 mm ×50 mm,1.8μm);流动相甲醇-0.2％甲酸水(95∶5),等度洗脱;流速0.5 mL· min-1;质谱条件:采用ESI-多反应监测(MRM)模式扫描.结果显示,5种银杏酸在0.2～36.0μg·L-1线性关系均良好(r≥0.999 5);银杏酸C13∶0(白果新酸),C15∶1,C17∶2,C15∶0,C17∶1的低定量限(LOQ)分别为0.18,0.18,0.21,0.10,0.20 μg·L-1;平均回收率在73.28％ ～87.56％;3批样品中所含总银杏酸的质量分数为0.023 ～0.028 μg·g-1,均远低于药品注册标准规定的限度(含总银杏酸以白果新酸计,不得过百万分之二).该方法简便、快捷,灵敏度高,可用于银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸的快速测定.
关键词： 银杏二萜内酯葡胺注射液原料 银杏酸 LC-MS/MS 含量测定 -
LC-MS/MS测定益智渗透泵片中有效成分Beagle犬血药浓度方法学研究
目的 建立利用ILC-MS/MS测定益智渗透泵片中有效成分Beagle犬血药浓度的方法.方法 建立Beagle犬血浆前处理方法；以地高辛为内标,LC-MS/MS同时测定有效成分栀子苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及三七皂苷Rb1分子离子峰及碎片离子峰,并建立各成分的血药浓度方法学.结果 在选定的LC-MS/MS条件下,4种成分的特征碎片离子可较好的分离并定量,在一定浓度范围内各成分线性良好；血浆中4种成分提取回收率均大于75%,方法回收率均大于90%；日内精密度RSD＜ 10%,日间精密度RSD＜ 15%；冻融及室温稳定性良好(RSD＜ 15%).结论 本方法灵敏、稳定、可靠,可用于研究益智方有效成分Beagle犬血药动力学过程.
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LC-MS/MS测定大鼠血浆中莫诺苷血药浓度
莫诺苷是从中药山茱萸Cornus officinalis Sieb.&Zucc.中提取分离获得的环烯醚萜苷类化合物,具有神经保护等多种药理活性.本研究首次采用LC-MS/MS技术建立了大鼠血浆中莫诺苷浓度的测定方法.血浆样品采用蛋白沉淀法,以金丝桃苷作为内标,色谱柱为Inertsil C8-3色谱柱(2.1 mm×50mm,5μm),流动相为水(含1 mmol·L-1甲酸钠)-乙腈梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1.采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应监测(MRM).莫诺苷在2～5 000 μg·L-1(r=0.995 7)线性关系良好,低定量限为2μg·L-1.方法精密度、准确度、回收率和基质效应均符合生物样品测定的要求,适合大鼠血浆中莫诺苷浓度的测定.应用该方法进行莫诺苷在大鼠体内的药代动力学研究,给药剂量为20 mg·kg-1,绘制血药浓度-时间曲线,并采用DAS 2.0计算得主要药代动力学参数:AUC0-∞为(587.6±290.7) μg· min·L-1,Cmax为(334.2±148.0)μg·L-1,Tmax为(0.6±0.3)h,t1/2为(0.7±0.3)h.
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基于PK-PD模型研究雷公藤治疗类风湿关节炎生物靶标
运用PK-PD模型观察血清样本及雷公藤治疗类风湿关节炎(RA)的抗炎作用,并分别对浓度-时间、效应-时间曲线进行相关分析,采用PCR检测各组大鼠的RORγt,IL-17,STAT3,IL-6 mRNA转录水平.甲氨蝶呤、雷公藤红素和高剂量的雷公藤,均可下调AA大鼠淋巴结中RORγt,IL-17,STAT3,IL-6 mRNA转录水平.根据PK-PD模型研究表明炎症因子与雷公藤的血药浓度存在一定的相关性.雷公藤及其主要活性成分雷公藤红素可通过抑制IL-17细胞因子实现抗炎作用来治疗RA.
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脑微透析与自动采血技术联用研究丹参素的药动学特性
通过微透析法联合自动采血技术研究丹参素在大鼠体内的药动学特性.微透析探针植入大鼠侧脑室,连续收集静脉注射丹参素后的透析液样品及血液样品,采用LC-MS/MS测定丹参素浓度,经回收率校正后,用WinNonlin药动学软件计算主要药动学参数.静脉注射丹参素后,丹参素在血液中、脑内的K分别为0.04,0.018 min-1,t1/2为16.64,58.76 min,AUC0-t为812.59,51.19 min·mg·L-1,MRT为15.28,79.97 min.建立的LC-MS/MS方法简便、高效、无干扰,可进行丹参素生物样品的检测;微透析技术与自动采血技术联用,较好的反映了丹参素在血液及大脑中的动力学特征,为药物药动学研究提供一个新视角.
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通脉颗粒在急性心肌缺血模型比格犬体内药动学研究
通脉颗粒(TM)是由丹参、川芎、葛根组方而成,临床上用于对缺血性心脑血管疾病的治疗.为研究TM的药效物质基础,对急性心肌缺血模型比格犬给予TM干预,分析了血清中吸收成分及其药动学特征.以盐酸酸化-乙酸乙酯萃取法提取血清样品,在LS-MS/MS的ESI-检测模式下,采用Merck RP-18e整体反相硅胶色谱柱分离,以乙腈-甲醇1∶1 (0.07％FA)和水(0.01％ FA)为流动相,在优化的梯度洗脱程序下实现了在8.5 min内对犬血清中8种葛根黄酮成分、5种丹参酚酸成分和2种葛根成分的同时定量分析.分析方法的验证结果表明该方法特异、准确、精密,符合生物分析要求.对急性心梗模型比格犬十二指肠注射TM后6h内不同时间点血清样品的分析结果显示,给药后5min药物成分即吸收入血,15种成分均能在血清中检出,分别于给药后0.18～3.83 h达峰.各成分的血药浓度差异很大,其中葛根素、丹参素体内暴露量远高于其他成分,其次为3’-甲氧基葛根素、芹糖基葛根素和3'-羟基葛根素.研究结果表明葛根异黄酮类和丹参素是TM在心肌缺血模型犬体内的主要活性成分.
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塞络通灌胃后人参皂苷在大鼠体内的药代动力学及脑分布研究
塞络通(SLT)是由人参、银杏叶、西红花组方,主治血管性痴呆的现代复方中药.为探讨SLT药效物质基础,并为给药方案提供依据,该文对治疗剂量SLT给与大鼠后,人参皂苷成分的血药浓度、药代特征、以及脑分布进行了研究.实验建立了同时检测生物样品中7种人参皂苷的高灵敏度LC-MS/MS分析方法,经过对线性、专属性、回收率、准确度、精密度的考察,所建立的分析方法符合临床前药代动力学研究要求.灌胃SLT 60 mg·kg-1后,7种目标成分均在大鼠血浆中检出,其中二醇型皂苷比三醇型的皂苷有更高的血药浓度和更长的消除半衰期.血浆中人参皂苷Rg1,Re,Rb1,Rb2/b3,Rc,Rd的平均消除半衰期分别为15.26,2.46,18.41,27.70,21.86,61.58 h;平均峰浓度分别为7.15,2.83,55.32,30.22,21.42,8.81 μg·L-1.SLT给药后人参皂苷成分能够迅速进入脑组织,但是随时间下降很快.人参皂苷Rg1,Re,Rb1,Rc脑组织中含量较高的成分.研究结果显示服用SLT后,人参皂苷成分能够快速吸收入血并进入脑组织.人参皂苷,尤其是Rg1,Re可通过快速进入脑组织直接作用于神经细胞发挥作用;以二醇型为主的人参皂苷在血浆中长时间滞留,连续给药方式时会累计达到较高稳态血药浓度,它们可能是通过对外周的药理作用保护脑组织的主要成分.
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不同配伍对半夏泻心汤皂苷类成分的肠菌代谢影响研究
目的:比较肠道菌群对半夏泻心汤伞方组、甘补组及其单味人参和甘草中皂苷类成分代谢的影响.方法:利用体外肠道菌群厌氧孵育的技术,研究全方组、甘补组及其单味药提取液与大鼠肠道菌群37℃厌氧环境下培养,采集不同孵育时间点样品,利用LC-MS/MS分析方法进行各原型物及代谢产物的快速分离和含量测定,并求其降解速率K,比较不同配伍组的代谢差异和特征.结果:肠道菌群可将皂苷类成分转化为其代谢产物.根据SPSS单因素方差比较得知不同配伍组中皂苷成分代谢存在差异,甘草酸的降解速率甘补组＞全方组＞单方组(P＜0.05)；Rb1在全方中降解慢；Re的降解速率全方组＞单方组＞甘补组(P＜0.05)；Rg1可由Re代谢产生,后降解为Rh1,且降解速率单方组＞甘补组＞全方组(P＜0.05).结论:全方、甘补组对人参皂苷肠菌代谢具有不司的诱导或抑制作用,全方组可以抑制Rb1,Rg1的代谢,促进甘草酸代谢为甘草欠酸,利于吸收发挥药效.复方配伍对Rd,Rg3的肠菌代谢没有影响.
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α-常春藤皂苷钠盐在大鼠体内药代动力学及组织分布研究
研究α-常春藤皂苷钠盐在正常大鼠体内的药代动力学及组织分布特征,大鼠灌胃给予100 mg·kg-1的α-常春藤皂苷钠盐,LC-MS/MS测定α-常春藤皂苷钠盐在大鼠血浆和组织液中的浓度,血浆和组织样品均用甲醇沉淀蛋白法处理.主要药代动力学参数:达峰时间Tmax为(0.97±1.23)h,峰浓度Cmax为(222.53±57.28) μg·L-1,药时曲线下面积AUC0-t为(1 262±788.9)h·μg· L-1,半衰期T1/2为(17.94±9.50)h,心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、脂肪组织中均有分布.结果表明α-常春藤皂苷钠盐口服后在大鼠体内吸收较快,消除较慢,在体内组织分布广泛,不同时间点药物浓度均以肝中高,推测其可能对肝脏有一定的靶向性.
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银杏内酯类化合物在大鼠体内的绝对生物利用度研究
研究银杏内酯A(GA)、银杏内酯B(GB)和白果内酯(BB)在大鼠体内的药动学特征及其绝对生物利用度.该实验建立了检测大鼠血浆中GA,GB,BB的LC-MS/MS分析方法,考察大鼠经口服(ig)和静脉注射(iv)给药后血浆中3种银杏内酯类化合物的血药浓度,采用DAS 2.0药动学处理软件,计算GA,GB,BB的药动学参数及其绝对生物利用度.结果显示,GA,GB,BB经大鼠注射给药后的Cmax分别为(513.9±116.9),(701.3 ±76.0),(5 255.6±476.8) μg·L-1,AUC0-t分别为(960.9±268.5),(779.5±140.6),(7 409.3±1 181.1)μg·h·L-1;灌胃给药后的Cmax分别为(522.9±39.9),(146.8±31.6),(2711.9±588.9) μg.L-1,AUC0-t分别为(1 760.4±300.7),(636.6±180.3),(16 651.4±1 306.5)μg·h·L-1.GA,GB,BB在大鼠体内的的绝对生物利用度分别为(61.1±10.4)％,(27.2±7.7)％,(56.2±4.4)％.该实验所建立的方法专属性好,灵敏度高,可用于GA,GB,BB在大鼠体内的药代动力学和生物利用度研究.
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LC-MS/MS测定6种丹参主要有效成分及其脑靶向分布研究
建立测定大鼠血浆及脑匀浆中原儿茶酸、原儿茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮ⅡA的LC-MS/MS分析方法.实验采用液液萃取的方法对血浆及脑匀浆样品进行处理,采用Agilent Eclipse Plus-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm),以0.1％甲酸乙腈和0.1％甲酸水为流动相进行梯度洗脱.质谱条件为电喷雾电离源(ESI),多反应监测(MRM).正离子模式下检测的离子对(m/z)为297.4/254.3(隐丹参酮),295.5/249.3(丹参酮ⅡA),285.2/154.0(内标地西泮);负离子模式下检测的离子对(m/z)为154.3/153.1(原儿茶酸),137.3/108(原儿茶醛),493.0/295.2(丹酚酸A),718.0/520.0(丹酚酸B),321.4/152.3(内标氯霉素).血浆及脑匀浆中隐丹参酮、丹参酮ⅡA、原儿茶酸、原儿茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B的线性范围分别为:0.15～1 000,0.625 ～1 000,0.625～1 000,0.625～1 000,1.25～1 000,2.5～1 000 μg.L-1;定量下限分别为0.15,0.625,0.625,0.625,1.25,2.5 μg·L-1.建立的方法稳定、灵敏,可用于研究丹参6种成分的脑及血浆药物代谢动力学特性.通过动物实验比较了6种成分之间的血脑分配系数,初步评价其跨越血脑屏障的能力.
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新型乌贝速释片的生物等效性研究
目的:制备一种新型乌贝速释片,并研究该剂型与乌贝散在Beagle犬体内的药代动力学和生物等效性.方法:采取粉末直接压片法制备乌贝速释片,将6只Beagle犬随机分为2组,分别口服给予乌贝速释片和乌贝散,采用LC-MS/MS测定给药后不同时刻血浆中贝母素甲的浓度,采用DAS 2.0软件按非房室模型处理得药动学参数,评价速释片剂与散剂的生物等效性.结果:乌贝速释片中贝母素甲的主要药动学参数为Cmax(7.4±2.3)μg·L-1,AUC0-t(59.13±15.25) μg·L-1·h-1,Tmax(1.5±0.0)h,乌贝散中贝母素甲的主要药动学参数为Cmax(8.0±1.7)μg·L-1,AUCo.t(68.78±16.27) μg·L-1·h-1,Tmax(1.5±0.0)h,乌贝速释片中贝母素甲的lnAUC0-t和lnCmax的90％置信区间分别为乌贝散相应参数的95.4％～104.6％,90.9％ ～ 109.1％.结论:自制的乌贝速释片与乌贝散具有生物等效性,且生产工艺简单,服用方便.
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筋骨草提取物有效成分在beagle犬体内药代动力学研究
乙酰哈巴苷和哈巴苷是筋骨草提取物中含量高的2种有效成分.该文建立了LC-MS/MS法,对beagle犬口服筋骨草提取物后乙酰哈巴苷和哈巴苷的药代动力学进行研究.健康雌性Beagle犬口服不同剂量的筋骨草提取物,对不同时间点的乙酰哈巴苷和哈巴苷血药浓度进行测定,采用winonlin 6.3软件以非房室模型进行拟合.色谱条件:安捷伦ZORBAX XDB-C18柱(2.1 mm×50mm,3.5 μm)；柱温30℃；流动相(A为0.1％甲酸水溶液；B为乙腈)为0～2 min 5％ B;2.1 ～5min 95％ B;5.1～10 min 5％B.流速0.3 mL· min-1.质谱条件:电喷雾离子源；正离子模式；选择离子分别为乙酰哈巴苷(m/z 429.2→369.2)、哈巴苷(m/z 387.2→207.2)和肉桂酸(m/z149.2→103.1).干燥气流速10 L.min-1；干燥气温度300℃；毛细管电压4000V.结果表明Beagle犬口服筋骨草提取物后乙酰哈巴苷和哈巴苷存在剂量依赖性,乙酰哈巴苷和哈巴苷的达峰时间分别为1.7,1.57 h左右,远大于大鼠口服筋骨草提取物后的乙酰哈巴苷和哈巴苷的达峰时间,这可能是由于种属差异造成的.
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基于LC-MS/MS技术研究黄芩苷在脑、血微透析探针体内外回收率
为进一步研究黄芩苷的入脑行为及脑细胞间液药代动力学,对黄芩苷在脑、血微透析探针的体内外回收率及其稳定性进行了研究.采用LC-MS/MS测定脑、血微透析液中黄芩苷的浓度,计算探针回收率;分别采用增量法、减量法考察不同流速(0.50,1.0,1.5,2.0,3.0 μL·min-1)对探针体外回收率的影响;采用增量法考察不同浓度(50.00,200.0,500.0,1 000 μg·L-1)、探针使用次数(0,1,2)对体外回收率的影响;采用减量法考察在大鼠体内探针回收率稳定性及流速对回收率的影响,并与体外结果进行比较.在同一浓度下,黄芩苷的脑、血探针体外回收率均随着流速的增加而降低;在同一流速下,探针回收率与黄芩苷的浓度无关;使用后并经过恢复处理的脑、血探针,在使用2次后,探针的回收率没有明显的变化;增量法和减量法所测得的体外回收率基本相同;减量法测得的体内回收率与体外结果相近,且脑、血探针体内回收率在10 h内的稳定性均良好.研究结果表明减量法能够作为研究黄芩苷体内回收率的测定方法,微透析技术能够用于黄芩苷在脑细胞间液药代动力学、血液药代动力学的同步研究.
