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Cocktail探针药物法评价半夏泻心汤及不同配伍组对CYP450酶活性的影响
目的:采用Cocktail探针药物法研究半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝细胞色素P450酶活性的影响.方法:大鼠连续7d灌胃半夏泻心汤全方组,甘补组,苦降组和辛组的煎煮液(15 mL·kg-1)后尾静脉注射Cocktail探针药物咖啡因(CYP1A2)、甲苯磺丁脲(CYP2C6)、氯唑沙宗(CYP2E1)、咪达唑仑(CYP3A1/2).建立LC-MS/MS法测定大鼠血浆中4种探针药物的浓度,DAS 2.0软件计算其药动学参数.结果:与空白组相比,全方组中甲苯磺丁脲的AUC0-24h值明显增大,CL显著减小,说明全方组对大鼠体内CYP2C6起抑制作用,而氯唑沙宗的AUC明显减少,CL增大,说明对CYP2E1起诱导作用；而对CYP1A2,3A1/2无显著性差异.同理,辛开组仅对CYP2C6起抑制作用,对其他的亚型酶无显著性差异；苦降组对CYP1A2,CYP2C6具有显著抑制作用,对CYP2E1有诱导作用,而对CYP3A1/2无显著性差异；甘补组对CYP1A2,CYP2E1有诱导作用,抑制CYP2C6,而对CYP3A1/2亦无显著性差异.结论:半夏泻心汤及不同配伍组对肝脏CYP450酶的活性影响不同,为阐明半夏泻心汤组方配伍的规律用以推测其在联合用药中可能发生的药物相互作用,指导临床合理用药.
关键词： Cocktail探针药物法 半夏泻心汤 配伍 细胞色素P450 -
酸枣仁、远志和桔梗水提液对大鼠肝CYP450酶活性及mRNA表达的调控作用
研究中药酸枣仁、远志和桔梗水提液对P450同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用.方法 大鼠ig给予酸枣仁、远志和桔梗水提液7d后取肝脏称重并制备肝微粒体,采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素b5( Cytb5),P450的含量及红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性,高效液相色谱法测定非那西汀O-脱乙基酶(PHD)的活性和对硝基苯酚羟化酶(pNPH),采用RT-PCR技术检测大鼠肝中5种P450同工酶CYP1A1,CYP1A2,CYP2E1,CYP3A1及CYP3A2mRNA的表达.结果 与对照组比较,各给药组大鼠肝指数无显著变化;酸枣仁组显著降低Cytb5含量和ERD活性,增加pNPH活性,远志组显著升高pNPH,极显著降低ERD活性,桔梗组显著降低CYP450含量,并明显升高PHD和pNPH活性；在mRNA水平上,各组的CYP1A1基因均未能检出；酸枣仁组诱导CYP2E1,CYP3A1和CYP3A2基因表达,远志组抑制CYP3A1,诱导CYP3A2的mRNA表达,桔梗组诱导CYP1 A2,CYP2E1,CYP3A2的mRNA表达；酸枣仁的CYP2E1、桔梗的CYP1A2和CYP2E1mRNA水平基本与酶活性水平相平行.结论 酸枣仁、远志水提液诱导CYP2E1的活性；桔梗水提液诱导CYP1A2,CYP2E1的活性,酶活性变化可能主要通过影响基因转录来实现.提示若酸枣仁和远志与经CYP2E1和CYP3A代谢的药物同用,桔梗若与经CYP1A2,CYP2E1,CYP3A代谢的药物同服,有可能会影响这些药物的临床疗效,临床用药时应慎重考虑.
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灯盏细辛和赤芍配伍组方对小鼠部分肝细胞色素P450亚型活性的影响及其机制分析
目的:探讨灯盏细辛和赤芍配伍组方(辛芍组方)对小鼠细胞色素P450酶(CYP450s)主要亚型CYP1a2,CYP2d22,CYP2e1和CYP3a11代谢活性的影响以及相关机制.方法:小鼠分为5组,分别为正常组、苯巴比妥组(70 mg·kg-1)和辛芍组方低、中、高剂量组(0.31,0.62,1.25 g·kg-1).给药结束后,取各组小鼠肝脏制备微粒体,考察CYP1a2,CYP2d22,CYP2e1和CYP3a11的代谢活性;并提取肝组织总RNA和蛋白,实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)考察辛芍组方对CYP1a2,CYP2d22,CYP2e1,CYP3a11和孕烷X受体(PXR) mRNA及蛋白表达的影响;利用报告基因法考察辛芍组方对PXR的激活作用.结果:与正常组比较,辛芍组方可诱导CYP3a11酶活性,上调CYP3a11,PXR mRNA和蛋白水平,并具有PXR激活作用(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,辛芍中、高剂量组方能抑制CYP1a2酶活性(P＜0.05),但对CYP1a2的mRNA水平和蛋白水平无明显影响;而辛芍组方对CYP2e1,CYP2d22的酶活性,mRNA水平和蛋白水平无明显影响.结论:辛芍组方具有CYP3a11活性诱导作用,该作用很可能与辛芍组方上调PXR表达并激活PXR从而促进CYP3a11表达有关;而其CYP1a2活性抑制作用机制与CYP1a2的表达调控无关,需要进一步研究.
关键词： 灯盏细辛和赤芍配伍组方 细胞色素P450 孕烷X受体 机制 -
枳棋子乙酸乙酯提取物对大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响
目的:观察枳棋子乙酸乙酯提取物胶囊对大鼠肝微粒体细胞色素P450及其同工酶的影响.方法:大鼠分别灌服给予枳棋子乙酸乙酯提取物胶囊相当于生药量0.14 g/kg,0.17 g/kg和0.2 g/ks,连续10 d,用紫外分光光度法测定细胞色素P450及其同工酶的活性.结果:枳棋子乙酸乙酯提取物胶囊对细胞色素P450及NADPH-细胞色素C(P-450)还原酶含量无显著影响;可抑制苯胺羟化酶活性,抑制率可达31.5%;可增加氨基比林N-脱甲基酶活性,可达42.4%;而对红霉素N-脱甲基酶的活性没有明显影响.结论:枳棋子乙酸乙酯提取物胶囊对大鼠肝细胞色素P450、NADPH-细胞色素C(P-450)还原酶及红霉素N-脱甲基酶无明显作用,但对氨基比林N-脱甲基酶活性及苯胺羟化酶活性有显著影响.
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血府逐瘀汤对大鼠肝组织内CYPs,UGTs和GSTs基因表达的影响
目的:研究血府逐瘀汤对大鼠肝组织内药物代谢酶细胞色素P450(CYPs,cytochrome P450),谷胱甘肽-S-转移酶GSTs,glutathione S transferase)和尿甘二磷酸葡糖醛酸转移酶(UGTs,UDP-glucuronosyl transferase)基因表达的影响.方法:将25只大鼠随机分为5组,每组5只.大鼠按3.51,7.02,14.04 g·kg-1分别ig给予血府逐瘀汤水提物,空白组给等体积纯净水,连续给药15d,苯巴比妥钠于第13天按80 mg· kg-腹腔注射,连续3d.取200 mg左右肝脏,用逆转录-实时荧光定量PCR法检测肝组织内的CYP基因CYP1A1,CYP1A2,CYP2B1,CYP2C11,CYP2E1,CYP3A1,CYP3 A2,CYP4A1,CYP7A1,CYP17A1,CYP27A1,GST基因GSTA2,GSTM1,GSTp1和UGT基因UGT1 A1,UGT2B1的表达情况.结果:与空白组比较,苯巴比妥钠组(阳性组)可明显诱导CYP2B1,CYP3A1,CYP3A2,GSTA2和UGT2B1基因表达(84.57,5.44,5.11,7.76,13.27倍,P＜0.01);血府逐瘀汤3.51,7.02 g·kg-1分别诱导GSTA2和CYP1A1的基因表达(1.54倍,P＜0.05;57.92倍,P＜0.05);14.04 g·kg-1明显抑制CYP2C11的基因表达(55％,P＜0.05);3.51,7.02,14.04 g·kg-13个剂量对GSTM1有明显的抑制作用(53％,55％,51％,P＜0.05);血府逐瘀汤对CYP1 A2,CYP2B1,CYP2E1,CYP3A1,CYP3A2,CYP4A1,CYP7A1,CYP17A1,CYP27A1,GSTp1,UGT1A1和UGT2B1的基因表达无明显影响.结论:血府逐瘀汤可明显诱导CYP1A1,GSTA2基因的表达,对CYP2C11,GSTM1的基因有明显的抑制作用,而对其余的亚型无显著影响.提示临床上与CYP1A1及CYP2C11的底物合用时,要注意药物代谢性相互作用,且其可能参与肝脏对毒物、致癌物以及其他物质的解毒和排泄,对多种恶性肿瘤的发生可能起到一定的作用.
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甘草、芫花合用对大鼠肝脏细胞色素P450酶的影响
目的:为了阐明基于药物代谢酶的中药十八反产生相反作用的机制,选择相反药对甘草、芫花作为研究对象,研究二者合用对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2酶活性的影响.方法:采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性.结果:甘草、芫花合用后CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2的酶活性增加,与对照组比较有显著差异(P＜0.05～0.001).结论:两药合用对药物代谢酶的影响可能会使某些药物毒性成分在体内代谢特征发生改变,对药物的疗效或毒性产生影响,从而产生基于药物代谢酶的中药间相互作用.
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雷公藤TwCYP88A1基因全长cDNA克隆与表达分析
目的:研究雷公藤萜类成分的生物合成相关基因,在雷公藤转录组信息数据的基础上,以雷公藤悬浮细胞为研究材料,克隆TwCYP88A1基因.方法:采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆雷公藤TwCYP88A1基因,实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)分析其组织表达谱.结果:TwCYP88A1 cDNA全长1 594 bp,编码491个氨基酸,等电点9.16,相对分子质量55.957 kDa,具有半胱氨酸铁血红素配体信号活性催化位点.植物组织表达分析表明TwCYP88A1基因在雷公藤叶中的表达量高,根中低.结论:从雷公藤悬浮细胞中克隆得到TwCYP88A1基因全长cDNA,对其进行生物信息学分析,揭示其组织表达谱,为深入分析雷公藤细胞色素P450酶、解析雷公藤萜类化合物的生物合成下游途径奠定基础.
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基于药物代谢酶探讨中药“十八反”配伍致毒/增毒机制
查阅国内外近年来有关中药“十八反”、药物代谢酶方面的文献37篇,对中药十八反配伍药物组合对细胞色素P450的影响研究现状进行分析归纳.提出中药十八反配伍对细胞色素P450影响的体内、体外研究方法与思路及现有研究方法的局限性,如体外实验不能全面反映体内实验和临床试验的结果,通过代谢酶mRNA浓度的测定不能全面反映其活性的变化等,并对今后的研究进行了展望,提出考察十八反药物对代谢酶的影响,应从体内、体外实验两方面来进行,还应结合毒性成分的代谢变化对毒性产生或增强的影响及其关联规律,进而从药物代谢酶的角度探讨十八反可能的致毒/增毒机制,为十八反配伍禁忌机制研究提供思考和借鉴.
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乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的相互作用
目的:阐明基于药物代谢酶的乌头、白及配伍产生相互作用的机制.研究二者合用对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2在酶活性、mRNA水平和蛋白质水平的影响.方法:采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用RT-PCR和WesternBlot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2 mRNA及蛋白水平的影响.结果:乌头、白及合用后CYP3A1/2的酶活性明显下降;Western Blot检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的蛋白质表达水平下降;RT-PCR检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的mRNA水平均上升.结论:乌头、白及合用后抑制CYP3A1/2的酶活性,乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的药物相互作用.
关键词： 细胞色素P450 酶活性 蛋白质免疫印迹 反转录聚合酶链式反应 -
雷公藤复方配伍调控CYP450酶系统减轻肝毒性的研究
目的:从干预CYP450酶系统的角度研究雷公藤配伍不同功效药物对CYP450酶系统的影响,探讨复方配伍减毒的机制.方法:将雷公藤分别与生地黄、三七、僵蚕、青风藤配伍,大鼠灌胃给药1个月,ELISA法检测肝组织CY P450酶含量.制备雷公藤不同配伍含药血清,加入微载体立体培养的肝细胞,ELISA法检测肝细胞CYP450酶含量,Real-time PCR法检测CYP450不同亚型的表达.结果:雷公藤可显著降低大鼠肝组织和肝细胞CYP450酶含量,升高CYP1A2、CYP2E1的表达,降低CYP3A的表达(P＜0.05,P＜0.01).雷公藤配伍生地黄、三七可显著升高大鼠肝组织和肝细胞CYP450酶含量(P＜0.05);配伍三七可降低肝细胞CYP1A2、CYP2E1的表达(P＜0.05,P＜0.01),升高CYP3A的表达(P＜0.05);配伍生地黄可升高CYP3A含量(P＜0.05);配伍僵蚕可显著降低CYP2E1的表达(P＜0.01),升高CYP3A的表达(P＜0.05);配伍青风藤可使CYP1A2的表达进一步升高(P＜0.05).结论:雷公藤复方配伍不同功效药物可调节肝细胞CYP450酶的含量,差异调控CYP450酶不同亚型的表达,从而影响雷公藤的体内代谢过程和体内物质的代谢过程,达到配伍减毒的目的.
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不同中医治法对DEN肝癌大鼠肝脏细胞色素P450超家族的作用
原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球常见也是我国发病率和死亡率很高的恶性肿瘤之一,全世界每年新增病例超过50万,死亡人数高达100万[1、2].尽管肝癌早期诊断技术和治疗手段不断提高,但疗效仍然极差,生存期短且易转移与复发,严重威胁着人类的身心健康.因此,阐明肝癌发生以及临床药物治疗(尤其是中医药预防治疗)的细胞和分子机制,以达到"治未病"的目的,一直是医务工作者关注的重点.细胞色素P450(cvtochrome)
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中药调节细胞色素P450酶活性的方法学研究概述
本文通过检索 PubMed（美国国家医学图书馆信息检索系统）、中国知识资源总库（CNKI）、中国生物医学文献数据库（CBM）及中国学术期刊数据库（万方数据）等中外文数据库十几年来有关中药调节药物代谢细胞色素P450酶（CYP450）的期刊文献，主要从CYP450体内体外研究方法方面进行归纳、整理和分析，为今后中药调节CYP450酶研究提供参考。
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Cocktail探针药物法在中药研究中的应用
早在20世纪80年代末,Breimer和Schellens等[1]就首次提出同时使用多个探针药物(Cocktail法)来评价多个细胞色素P450 (CYP450)亚型酶的活性,并对其可行性和用途作了充分的阐述.目前Cocktail法主要用于西药的药物代谢研究,有关中草药对CYP450的影响作用的报道尚不多见,其在中药的药物代谢研究方面还是一个比较新的研究领域,其应用价值和重要意义不容忽视.笔者现就国内外采用Cocktail法在中药代谢研究中的应用进行综述,为该领域的研究工作提供参考.1 关于Cocktail探针药物法Cocktail法是指同时给予多种相对低剂量的探针药物,测定生物样本中每个探针药的代谢率或其他代谢分型指标,以获取多个代谢酶的表型信息,对于那些有多重代谢途径的剂量设计有极为重要的意义.该方法的优点在于多个代谢途径的信息可在单个试验过程中获得,真实地反映出药物对CYP450不同亚型代谢酶的影响,并将个体间影响降至低,此方法简便、快捷、准确、灵敏,适合进行探针药物血清浓度的测定.
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川芎嗪在大鼠肝微粒体系统中的代谢研究
目的:通过离体和整体实验来研究川芎嗪(TMPz)代谢转化过程,探讨参与TMPz代谢的CYP450亚酶,为临床上合理用药提供科学依据.方法:建立TMPz的UV-HPLC检测方法,测定大鼠血浆和肝微粒体温孵液中TMPz及代谢产物,分析TMPz代谢消除率与各诱导和抑制剂之间的相关性;Nash法测定肝微粒体温孵液中ERY N-脱甲基酶活性,探索其与代谢物生成量之间的相关关系;测定DEX,Ket在体诱导或抑制后,大鼠血中的TMPz药物浓度,计算和比较药动学参数.结果:特异性CYP3A诱导剂DEX组中TMPz代谢物生成速率明显高于对照组,而主要诱导CYP2B的阳,β-NF组与对照组无明显区别;强效的CYP3A抑制剂Ket则显著抑制TMPz的代谢;TMPz的代谢速率与CYP3A的特征性ERY N-脱甲基反应呈现高度的相关性;在体诱导或抑制后TMPz的药动学参数中DEX组的CL(s)大于对照组,t1/2小于对照组;而Ket抑制的CL(s)小于对照组,t1/2大于对照组,差异均具有统计学意义.结论:CYP3A是介导TMPz生物转化的CYP450亚酶,川芎嗪与CYP3A酶抑制或诱导药合用可能存在药物间的相互作用.
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发酵虫草菌粉对细胞色素P450酶的影响研究
目的:研究发酵虫草菌粉对大鼠细胞色素P450酶CYP1A2,CYP3A4,CYP2E1的影响.方法:用Cocktail探针药物法,将Wistar大鼠按体重随机分2组,灌胃给予33 g·L~(-1)的虫草菌粉生理盐水混悬液给药组,生理盐水对照组,灌胃体积为8.5 mL·kg~(-1)诱导10 d后静脉注射给予3种探针药物咖啡因、氨苯砜、氯唑沙宗,股动脉插管取血浆,通过HPLC检测各探针药物的代谢以评价各组CYP1A2,CYP3A4,CYP2E1业邱酶的活性;药动学计算采用DAs 2.0软件完成.结果:给予发酵虫草菌粉组的大鼠,咖啡因、氨苯砜代谢均加快,t_(1/2)分别为(2.90±0.47)h,(4.83±0.60)h;氯唑沙宗t_(1/2)与对照组无显著差异.结论:发酵虫草菌粉对大鼠CYP1A2,CYP3A4有诱导作用,对CYP2E1的作用不明显.
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三七对大鼠肺组织内CYP和GST基因表达的影响
目的:研究三七对大鼠肺组织内细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)和谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-trans-ferase,GST)基因表达的影响.方法:雄性SD大鼠,三七2,4 g·kg~(-1),每日1次连续灌胃14 d,用逆转录-实时定量PCR法检测肺组织内的CYP1A1,CYPlA2,CYP1B1,CYP281,CYP2E1,CYP3A1,CYP4A1基因和谷胱甘肽-S转移酶GST-ml,GST-pi基因的表达情况.结果:与空白组相比,三七不影响肺组织内CYP2E1,CYP1A2和GST-pi基因的表达,但2 g·kg~(-1)的三七可诱导CYP3A1基因的表达(4.00倍,P<0.05),2,4 g·kg~(-1)的三七可分别诱导GST-ml基因的表达(分别是1.64倍,P<0.05和1.53倍,P>0.05)和CYP1A1基因的表达(3.44倍,P>0.05和6.05倍,P<0.05),2,4 g·kg~(-1)的三七对CYP1B1基因(0.81倍,P>0.05和0.38倍,P>0.05)有抑制趋势;2,4 g·kg~(-1)的三七明显抑制CYP2B1基因(0.47倍,P<0.05和0.50倍,P<0.05)和CYP4A1基因(0.54倍,P<0.05和0.72倍,P<0.05)的表达.结论:三七对肺组织不同的CYP基因和不同的GST基因的影响有明显的差异,这对临床合理使用三七和研究三七的作用机制具有重要意义.
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人参、藜芦合用对大鼠肝P450酶活性及mRNA表达的调控作用
目的:研究中药十八反中人参与藜芦合用对P450同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用.方法:采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P450与细胞色素b5含量及氨基比林N-脱甲基酶(APND)、对硝基苯酚羟化酶(pNPH)活性.采用RT-PCR技术检测大鼠肝中5种P450同工酶CYP1A1,CYP2B1/2,CYP2C11,CYP2E1及CYP3A1 mRNA的表达.结果:人参与藜芦合用可明显降低P450蛋白含量,可降低细胞色素b5的含量,单药及其与藜芦配伍都能使APND活性下降.在mRNA水平上,藜芦可诱导GYP2C11的基因表达,与人参合用后却使得CYP2C11的表达下降.藜芦与人参配伍诱导了CYP1A1的表达.人参可抑制CYP2B1/2的基因表达,与藜芦合用后却明显诱导了CYP2B1/2的表达,人参与藜芦合用后也明显诱导了CYP3A1的表达.结论:人参与藜芦配伍前后对一些CYP亚型调控作用发生明显变化,可能存在基于药物代谢酶机理的相反作用,需进一步结合代谢研究加以综合分析,阐明相反作用的机理.
关键词： 十八反 细胞色素P450 逆转录聚合酶链式反应 药物相互作用 -
三七对大鼠肝组织内CYP和GST基因表达的影响
目的:研究三七对大鼠肝组织内细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)和谷胱甘肽转移酶(glutathione s-transferase,GST)基因表达的影响.方法:雄性SD大鼠,三七2,4 g·kg~(-1),每日1次连续灌胃14 d,用逆转录-实时定量PCR法检测肝组织内的CYP1A1,CYP1A2,CYP2B1,CYP2E1,CYP3A1,CYP4A1基因和GST-ml,GST-pi基因的表达情况.结果:三七不影响肝组织内CYP1A1,CYP1A2,CYP2E1,CYP3A1,GSTml和GST-pi基因的表达,2,4 g·kg~(-1)的三七可明显抑制CYP2B1基因(0.48倍,P<0.05和0.61倍,P<0.05)和CYP4A1基因(0.69倍和0.51倍)的表达.结论:三七可选择性地抑制大鼠肝组织内CYP2B1和CYP4A1的基因表达,这可能是三七的作用机制之一.三七对CYP1A1,CYP1A2,CYP2E1和CYP3A1的基因表达没有影响,提示三七与以上主要药物代谢酶代谢的药物合用时在肝内不会产生代谢性药物相互作用.
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枳椇子醋酸乙酯提取物对大鼠肝P450同工酶的影响
目的:观察枳椇子醋酸乙酯提取物对大鼠肝P450同工酶的影响.方法:大鼠分别灌胃给予枳椇子醋酸乙酯提取物相当于生药量0.14,0.17,0.2 g·kg-1,连续10 d,采用紫外分光光度法测定细胞色素P450与NADPH-细胞色素C(P-450)还原酶含量及苯胺羟化酶(ANH)、氨基比林N-脱甲基酶(ADM)、红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性.采用RT-PCR技术检测大鼠肝脏CYP1A1,CYP2C11,CYP2E1,CYP3A1基因的水平.结果:枳椇子醋酸乙酯提取物对细胞色素P450及NADPH-细胞色素C(P-450)还原酶含量无显著影响;可抑制苯胺羟化酶(ANH)活性,抑制率可达31.5%;可增加氨基比林N-脱甲基酶(ADM)活性,可达42.4%;而对红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性没有明显变化.在mRNA水平上,CYP2E1基因的表达水平没有变化;CYP1A1,CYP2C11和CYP3A1基因表达水平则明显增加.结论:枳椇子醋酸乙酯提取物对大鼠肝P450同工酶的影响表现出特异性,对不同的P450同工酶作用不同.
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HPLC-MS/MS测定葛根芩连汤对大鼠肝脏细胞色素P450酶的影响
研究葛根芩连汤及其主要药效成分对大鼠肝微粒体CYP450酶5种同工酶活性的影响.采用体外肝微粒体孵育技术将葛根芩连汤及其主要药效成分与各个探针底物共同孵育,利用LC-MS/MS建立CYP450 5种亚型探针底物的代谢产物的分析方法,考察微粒体蛋白浓度和孵育时间与代谢产物生成量之间的关系来确定蛋白浓度和孵育时间.运用HPLC-MS/MS检测CYP450酶5种同工酶特异性探针底物(非那西汀、甲苯磺丁脲、右美沙芬、氯唑沙宗、睾丸酮)相应代谢产物(对乙酰氨基酚、4-羟基氯唑沙宗、右菲烷、6-羟基氯唑沙宗、6β-羟基睾酮)的生成速率(V)来确定CYP450的各亚酶活性.结果表明,对乙酰氨基酚、4-羟基甲苯磺丁脲、右菲烷、6-羟基氯唑沙宗及6β-羟基睾酮线性关系良好,精密度、稳定性、平均回收率符合要求,所建方法可行;优化的肝微粒体体外孵育条件,符合药物相互作用指导原则的要求;葛根芩连汤对CYP450 5个亚型(CYP1A2,CYP2C11,CYP2D2,CYP2E1,CYP3A1/2)酶均有不同程度的抑制,其主要药效成分中小檗碱在高浓度下可对各亚型酶有一定的抑制(CYP1A2,CYP3A1/2除外).
