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水痘-带状疱疹病毒糖蛋白I基因在昆虫细胞中的表达及纯化
目的将北京水痘-带状疱疹病毒(VZV)84-7株克隆糖蛋白I(gpI)基因在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中表达,并对其表达产物进行纯化.方法采用PCR方法从VZV DNA中扩增gpI全基因序列,并将其插入杆状病毒转移质粒pBacPAK9中,获得重组转移质粒pBacVZVgpI,对pBacVZVgpI中的插入基因进行测序.重组转移质粒与线性杆状病毒BacPAK6 DNA(Bsu36I digested)共转染Sf 9昆虫细胞,获得重组病毒BacPAK-gpI.通过亲和层析纯化重组蛋白,并检测其抗原性.结果 PCR扩增得到gpI基因,测序结果表明克隆的外源基因正确.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(western-blot)方法证明gpI基因在昆虫细胞中获得表达,表达产物在培养72 h达到高峰,重组蛋白的相对分子质量约为58 000和70 000,与理论值相符,蛋白质加工与天然蛋白类似.动物实验结果表明,重组蛋白具有较好的免疫原性,可刺激小鼠产生中和抗体.SDS-PAGE检测纯化的重组蛋白,纯度达80%.纯化蛋白经western-blot和ELISA检测后显示,具有特异的抗体结合活性.结论应用昆虫细胞表达水痘-带状疱疹病毒gpI基因,可为水痘-带状疱疹病毒抗原定量分析、糖蛋白ELISA的研制和制备亚单位疫苗提供基础.
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两种ELISA试剂盒对我国单采血浆中水痘-带状疱疹病毒中和抗体滴度的测定和比较
目的 采用两种不同的检测抗水痘-带状疱疹病毒(VZV)中和抗体间接ELISA法试剂盒,对我国单采血浆中VZV特异性免疫球蛋白(VZIG)的效价进行测定,比较两种试剂盒测定结果的相关性和血浆筛查的适用性,并分析利用国内单采血浆研发生产VZIG的可行性.方法 随机选取182份单采血浆样品,100倍稀释后,使用Virion/Serion和VaccZyme/Binding Site两种商品试剂盒同时对样品进行测定,根据评估系统公式或曲线方程计算每份样品中VZIG的效价;采用Pearson乘积矩相关性方法对两种试剂盒的线性关系进行统计学分析.结果 ①VZIG高于10 IU/ml的血浆样品数量为13份(7％,Virion)和16份(9％,VaccZyme):②两种试剂盒检测结果之间的直线线性关系数R2为0.62 (P＜ 0.0001),变异系数为4％;③Virion与VaccZyme的工作范围有不同,前者对于低效价(0.2 ～ 0.4 IU/ml)样本的测定具有很好的灵敏度,而VaccZyme适用于高效价血浆样本(＞150 IU/ml)的检测.结论 Virion与VaccZyme结果具有一致性和相关性;两种试剂盒的工作范围略有差异,VaccZyme较Virion更适用于高效价VZIG原料血浆的检测,可用于普通献浆员单采血浆中VZV中和抗体的筛查.
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异基因造血干细胞移植后带状疱疹的临床分析
目的 探讨异体基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后带状疱疹的发病情况、临床特点、诊治及预后.方法 对河南省肿瘤医院血液科allo-HSCT受者带状疱疹的发生时间、临床表现、治疗及预后进行回顾性分析.结果 可评估的191例接受allo-HSCT患者中有18例并发带状疱疹,发病率为9.42%,其中14例发生在干细胞移植治疗后3～12个月内.10例合并慢性移植物抗宿主病(GVHD),1例合并急性GVHD.临床表现主要为区域性皮肤疱疹.3例出现严重疱疹后神经痛,需强效止痛.无泛发性疱疹及内脏受累病例.所有患者接受抗病毒药物阿昔洛韦和阿糖腺苷静脉输注治疗,全部治愈,无疱疹相关死亡患者,平均治疗时间为15.5 d.结论 带状疱疹是allo-HSCT后常见的病毒感染性疾病,主要发生在干细胞移植治疗后3～12个月,GVHD是其发生的高危因素.阿昔洛韦和阿糖腺苷的疗效较好.
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水痘病毒感染伴肾小球肾炎和脑炎1例报告
患者15岁,男性,因水痘、肾炎和肾病综合征、肾功能损伤、补体C3下降2个月而入北京中日友好医院肾内科治疗,肾活检证实为毛细血管内增生性肾小球肾炎伴足细胞增生和肾小管损伤,直接免疫荧光显示IgG、IgA、IgM、C3、C1q和纤维蛋白原沿肾小球毛细血管壁和系膜区颗粒状和团块状沉积,透射电子显微镜检查显示电子致密物在肾小球多部位沉积,血清中抗水痘病毒抗体(IgM)阳性,免疫组织化学和原位杂交显示水痘病毒抗原和mRNA存在于肾小球和肾小管上皮细胞,特殊染色和透射电子显微镜显示病毒颗粒和病毒包涵体存在于肾小球和肾小管上皮细胞内.患者住院期间尚有癫痫发作,脑电图及核磁共振证实为病毒性脑炎导致的癫痫,故确诊为水痘病毒感染伴发肾小球肾炎和脑炎.这是1例通过分子病理学方法证实水痘病毒在肾内感染导致的肾小球肾炎.
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金丝桃素和盐酸赖氨酸抗疱疹病毒作用体外试验研究
目的:通过评价金丝桃素、盐酸赖氨酸体外抗疱疹病毒活性,为进一步研究疱疹后遗神经痛(PHN)以及继发抑郁的治疗提供更多理论支持方法:采用对病毒所致细胞病变(CPE)抑制法,观察金丝桃素和盐酸赖氨酸对Vero细胞和2BS细胞的细胞毒性,以及对单纯疱疹病毒I型(HSV-I)和水痘-带状疱疹病毒(VZV)的抗病毒活性.结果:金丝桃素对HSV-1和VZV抑制的小有效浓度和治疗指数相同,分别为0.39 mg/L和32;盐酸赖氨酸对HSV-1和VZV抑制的小有效浓度都是19.5 mg/L,治疗指数分别为64和129.结论:金丝桃素和盐酸赖氨酸在体外具有抗HSV-1和VZV作用.
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新生儿水痘1例
水痘是由水痘-带状疱疹病毒引起的急性呼吸道传染性疾病,主要发生于幼儿和学龄前儿童,6个月以内的婴儿因从母体获得抗体而很少发病,故新生儿水痘罕见.延边大学附属医院于2008年8月诊断并治疗1例新生儿水痘.
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水痘-带状疱疹病毒Oka株与临床分离株可变区基因的序列分析
目的 对水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV) Oka株(V-Oka株)与分离于临床水痘患者的野毒株进行可变区基因序列比对分析.方法 提取V-Oka株和VZV临床分离株的基因组DNA,对其串联重复序列区(R区)进行PCR扩增和测序；将R3基因的纯化产物与pMD18-T载体连接,转化感受态大肠杆菌JM109,提取质粒,经双酶切鉴定及测序；将测序结果与GenBank中登录的V-Oka株基因序列进行比对分析.结果 R1～R5基因扩增产物及R3基因重组质粒的双酶切产物片段大小均与预期相符；V-Oka株较稳定,测序结果与GenBank中登录的V-Oka株R1 ～ R5基因序列一致,野毒株R区序列呈现多态性,与V-Oka株有差异,R4区序列区别明显.结论 水痘患者的致病毒株为野毒株；R4的重复单位拷贝数可为临床快速鉴别V-Oka株与野毒株提供科学的手段.
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水痘-带状疱疹病毒基因型的研究进展
水痘-带状疱疹病毒(VZV)属疱疹病毒α亚科,为双链DNA病毒,原发感染引起具有高度传染性的世界流行性疾病--水痘,潜伏感染再激活可导致带状疱疹.水痘-带状疱疹病毒虽然是人类疱疹病毒中具遗传稳定性的一种病毒,但其基因组内仍存在多个单一核苷酸的变异,其中有些已成为VZV基因组内单核苷酸多态性(SNP)标记.目前已有几个研究组依据不同的SNP组合,将世界各地流行的VZV株划分为3～4个基因型.本文就VZV基因分型的研究状况进行综述.
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水痘-带状疱疹疫苗接种预防带状疱疹
带状疱疹是由以前的水痘-带状疱疹病毒(varicella zoster virus,VZV)感染再度激活而引起,主要发生于老年人和免疫系统功能障碍者,可能是VZV特异性细胞介导免疫力减弱或丧失所致.目前治疗带状疱疹和疱疹后神经痛的方法包括抗病毒剂和止痛药,随之带来较高的经济费用.一些临床试验已证实0ka/Merck株VZV减毒活疫苗(ZostavaxTM)是安全的,能增强VZV特异性细胞介导免疫力,并能在60岁以上人群中显著降低带状疱疹和疱疹后神经痛的发生率.该疫苗近已通过审批,一旦使用,可望明显减少带状疱疹发病和与之相关的费用.
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正在研发的病毒疫苗(续)
疫苗接种是预防人类病毒性传染病的有效措施.病毒疫苗可以预防或缓解个体的疾病严重性,也可以阻断和减少病毒传播给其他易感人群.在过去的50年中,预防天花、脊髓灰质炎、麻疹、乙型肝炎的疫苗已经为人类健康作出了重要贡献.对病毒学和免疫学基础研究的发展为人类在21世纪征服病毒性疾病提供了美好前景.目前对于HIV、呼吸道合胞病毒(RSV)、HCV等严重威胁人类健康的病毒还需要更多的基础研究.本文介绍即将用于临床或即将上市的病毒疫苗.这些疫苗包括抗RNA病毒减毒活疫苗--轮状病毒疫苗和流感疫苗;人乳头瘤病毒(HPV)和水痘带状疱疹病毒(VZV)疫苗,这些DNA病毒可以建立持续感染,导致较高的发病率和死亡率.尽管在美国仅流感疫苗得到批准,但在随后几年里必将有一些新型疫苗问世.因此,有必要对这些病毒疫苗的研究进展作一总结.
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正在研发的病毒疫苗
疫苗接种是预防人类病毒性传染病的有效措施.病毒疫苗可以预防或缓解个体的疾病严重性,也可以阻断和减少病毒传播给其他易感人群.在过去的50年中,预防天花、脊髓灰质炎、麻疹、乙型肝炎的疫苗已经为人类健康作出了重要贡献.对病毒学和免疫学基础研究的发展为人类在21世纪征服病毒性疾病提供了美好前景.目前对于HIV、呼吸道合胞病毒、HCV等严重威胁人类健康的病毒还需要更多的基础研究.本文介绍即将用于临床或即将上市的病毒疫苗.这些疫苗包括抗RNA病毒减毒活疫苗--轮状病毒疫苗和流感疫苗;人乳头瘤病毒和水痘-带状疱疹病毒疫苗,这些DNA病毒可以建立持续感染,导致较高的发病率和死亡率.尽管在美国仅流感疫苗得到批准,但在随后几年里必将有一些新型疫苗问世.因此,有必要对这些病毒疫苗的研究进展作一总结.
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水痘减毒活疫苗病毒的单核苷酸多态性分析
水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)是引起水痘和带状疱疹的主要病原体,Oka株水痘减毒活疫苗(V-Oka)能有效预防水痘发生.V-Oka株与Oka亲本株之间存在至少42个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点差异,部分位点与V-Oka株的减毒特性有关.目前已知有6个SNP位点为疫苗型位点,可用于区分V-Oka病毒与野生型病毒.近期研究发现某些SNP位点与疫苗相关皮疹有关.此文对水痘减毒活疫苗的重要SNP位点做一综述.
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水痘带状疱疹病毒Oka株的培养特性和温度敏感性研究
目的 研究水痘带状疱疹病毒(varicella-herpes zoster virus,VZV)Oka株的培养特性及对温度的敏感性.方法 对VZV Oka株感染的2BS细胞进行培养,当2BS细胞的致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)达到10％ 时,开始收集0、3、6、9、12、18、24、36 h的病毒悬液并检测病毒滴度,观察病毒生长曲线.从VZV培养的第1天起,每天检测病毒蛋白浓度,连续检测7 d,观察病毒蛋白浓度变化.将3、12、24、36 h收集的病毒悬液分别于4℃和25℃放置0、3、6、9、12、24 h,并检测病毒滴度.结果 在2BS细胞的CPE达到10％ 后0～12 h和12～24 h,病毒生长分别进入对数期和平台期,随后进入衰亡期.在VZV培养过程中,病毒蛋白在经历2 d的初始期后,于2～6 d进入对数期,随后进入平台期.不同生长时期的病毒置于4℃的滴度下降幅度和速度都小于置于25℃.结论 VZV Oka株具有一般病毒的培养特性,并受温度影响较大.
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水痘-带状疱疹病毒膜抗原荧光抗体试验的建立与评价
目的 建立用于检测血清中水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster viruS,VZV)特异性抗体的膜抗原荧光抗体(fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA)试验并对其进行验证和评价.方法 用VZV感染细胞作为抗原制备抗原载玻片,以异硫氰酸荧光素标记的羊抗人IgG为二抗建立 FAMA试验.对试验的灵敏度、特异性和重复性进行验证.用FAMA试验和市售ELISA试剂盒对200份血浆样品中的抗VZV抗体进行检测.采用Spearman秩相关检验对两种方法的检测结果进行比较.结果 FAMA试验的灵敏度为0.04 IU/ml,与常见的人疱疹病毒(单纯疱疹病毒1和2型、人巨细胞病毒)没有交叉反应且重复性良好.经FAMA试验检测,200份血浆样品的抗体阳性率为93.5％,抗体几何平均效价为1 : 18.1,检测结果与市售ELISA试剂盒的符合率为90. 0％.两种方法的检测结果具有相关性,Spearman秩相关系数为0.49,P <0.000 1.结论 建立的方法具有良好的灵敏度、特异性和重复性,可用于血清中抗VZV抗体的检测.
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水痘疫苗生产工艺变更前后Oka株病毒基因序列及疫苗质量分析
目的 通过对采用细胞工厂工艺进行细胞培养前后的Oka株病毒基因序列和水痘疫苗质量进行分析比较,评价生产工艺变更对水痘疫苗质量的影响.方法 从水痘疫苗原液提取病毒DNA,采用PCR法扩增片段,通过对PCR产物测序或克隆质粒测序并拼接,获得Oka株的病毒全基因序列,并与GenBank中相关序列比对.对工艺变更前后生产的疫苗进行病毒滴度、牛血清白蛋白残留量和抗生素残留量比较.结果 工艺变更前后的疫苗病毒基因序列一致;检测到33个单核苷酸多态性位点为亲本型和减毒型碱基共存,具有典型的Oka株特征;没有发现GenBank未登录或文献未报道的新突变.工艺变更前后生产疫苗平均病毒滴度分别为5.00和5.02 lg蚀斑形成单位/ml,两者间的差异无统计学意义(t=1.1,P=0.26),且各项关键指标均符合企业标准和药典要求.结论 将细胞工厂引入生产工艺后,水痘疫苗具有与原工艺生产的制品相似的安全性和质量一致性.
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水痘-带状疱疹病毒Oka疫苗株与野毒株序列比对
目的 观察水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka疫苗株(V-Oka株)的传代稳定性,并与分离于水痘患者的野毒株进行序列比对.方法 将V-Oka株在人二倍体细胞MRC-5中连续传代培养至50代,提取32、34、38、42、46和50代V-Oka株及野毒株的DNA,对主要基因(ORF31、ORF62、ORF68、R区)进行PCR扩增和测序,并进行序列比对.结果 与GenBank中的V-Oka株序列相比,32代至50代V-Oka株的ORF31、ORF62、ORF68、R区序列稳定,并趋于减毒.未发现野毒株序列发生如同V-Oka株的独特变异.结论 连续传代培养至50代,V-Oka株的分子遗传学特性保持稳定.序列比对显示,水痘患者的致病毒株为野毒株,而非V-Oka株.
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水痘减毒活疫苗的研制及免疫效果观察
目的观察由日本大阪大学微生物病研究会(BIKEN)提供的Oka株水痘病毒研制的水痘减毒活疫苗的稳定性、安全性和免疫原性.方法按WHO规程要求建立主种子批和工作种子批,检测病毒的生物学特性和疫苗稳定性.在上海市、江苏省进行临床试验,5批疫苗共接种468名2～6岁易感儿童,观察接种者的不良反应,测定抗体阳转率及抗体几何平均滴度.结果Oka株水痘病毒在MRC-5细胞上传10代,其生物学特性相似,疫苗在2～8℃保存2年,病毒滴度下降0.3～0.5 lg PFU/剂.易感儿童接种后皮疹发生率为0.21%;低、中、高发热反应率分别为21.79%、10.68%、0.64%.抗体阳转率平均为92.03%.结论研制的水痘减毒活疫苗的质量与国外同类产品相似,在易感儿童中的安全性与免疫原性良好,宜推广应用.
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水痘－带状疱疹病毒感染与卒中
水痘－带状疱疹病毒（varicela-zostervirus,VZV）感染可引起中枢性血管病变，进而导致卒中发病。文章就VZV感染与卒中发病的相关性进行了综述，以便对VZV感染患者进行全面评估，从而降低VZV感染后的卒中风险。
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水痘-带状疱疹病毒的免疫逃逸机制
水痘-带状疱疹病毒初次感染人体后,易引起水痘,感染控制后,病毒潜伏在感觉神经节内,当机体免疫力降低时,病毒被再次激活,在神经元内大量复制并经神经元突起传播至皮肤后引起带状疱疹.机体拥有强大的免疫监视系统,能及时清除突变或病毒感染的细胞.水痘-带状疱疹病毒要成功地在体内复制、扩散和引起皮损,或者长期潜伏于神经节,必需具备能够编码逃避免疫防御的功能.对水痘-带状疱疹病毒限制机体免疫识别,影响相关免疫分子表达下调,干扰抗原提呈等多种机制进行概述.
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武汉地区水痘带状疱疹病毒基因型分析
目的 探讨武汉地区水痘带状疱疹病毒流行的主要基因型.方法 收集96例水痘、带状疱疹患者皮损标本.采用煮沸、冻融方法提取标本中的DNA.多重PCR扩增水痘带状疱疹病毒ORF22、38、54,并测序.用ClustalW软件比对和Primer premier 5软件酶切位点分析核酸序列.结果 多重PER检测水痘、带状疱疹患者皮损标本阳性率为81.3%(78/96).与Dumas序列进行对比,78份阳性标本ORF22在37902、38055、38081、38177存在点突变,符合基因型J型特点.ORF38和ORF54分别存在PstI和BglI酶切位点.结论 武汉地区水痘带状疱疹病毒流行的主要基因型为J型、ORF38(PstI+)和ORF54(BglI+).
