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三种增塑剂对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响
目的观察对-壬基酚(NP)、双酚A(BisA)和邻苯二甲酸酯二丁酯(DBP)对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响.方法将MCF-7细胞在达尔克(DMEM)培养液(含10%小牛血清)中采用开放式单层贴壁培养,开始实验前将培养细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后改在无酚红DMEM(含5%胎牛血清)中培养继续4 d以耗尽其内源性雌激素.实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及3种受试物各4个剂量组,采用噻唑蓝(MTT)法、3H-TdR掺入法及流式细胞术对MCF-7细胞的增殖情况进行分析.结果与对照组相比,NP、BisA和DBP对细胞处理24 h,分别在96×10-7mol/L、96×10-7mol/L、96×10-6mol/L可促进MCF-7细胞增殖和细胞DNA合成,并推进G0/G1期细胞进入S期,提高细胞增殖指数;随着培养时间延长至96 h,3种化合物在较低浓度条件下也表现促进细胞增殖的效果.结论对-壬基酚、双酚A和邻苯二甲酸酯二丁酯可促进雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7的增殖,可能具有雌激素样作用.
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邻苯二甲酸二丁酯对大鼠睾丸支持细胞的影响
目的探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对睾丸支持细胞超微结构和功能的影响.方法将6周龄雄性SD大鼠随机分成0、250、500和1 000 mg/kg组,每组16只.给予DBP灌胃,分别于染毒2周和4周后各处死8只动物.采用放射免疫法测定血清卵泡刺激素,逆转录聚合酶链反应测定雄激素结合蛋白mRNA和抑制素α mRNA的相对表达量,用透射电镜观察支持细胞的超微结构.结果 DBP染毒4周后,卵泡刺激素表现出明显的上升趋势,250和1 000 mg/kg组与对照组比较差异有统计学意义;精子头计数和每日精子生成量呈现出单一的下降趋势,500和1 000 mg/kg组与对照组比较差异有统计学意义.雄激素结合蛋白mRNA和抑制素α mRNA表达水平随着DBP染毒剂量的增加呈现出明显的下降趋势,无论是染毒2周还是4周,500和1 000 mg/kg组与对照组比较差异均有统计学意义.0、250、500和1 000 mg/kg组的雄激素结合蛋白mRNA相对表达量在染毒2周后分别为0.89±0.15、0.85±0.23、0.54±0.17和0.52±0.16,染毒4周后分别为0.76±0.16、0.73±0.17、0.47±0.14和0.38±0.14;抑制素α mRNA的相对表达量在染毒2周后分别为0.88±0.16、0.61±0.12、0.48±0.15和0.47±0.11,染毒4周后分别为0.75±0.19、0.56±0.16、0.53±0.08和0.45±0.10.电镜观察结果显示,1 000 mg/kg组支持细胞胞浆中初级溶酶体增多,核高度畸形,内质网增生并高度扩张.结论支持细胞是DBP的主要靶细胞之一,DBP通过诱导雄激素结合蛋白mRNA和抑制素α mRNA表达水平下调,使雄激素结合蛋白和抑制素α合成量减少,干扰精子发生的过程.
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邻苯二甲酸二丁酯对子代大鼠海马神经细胞发育的影响
目的 研究邻苯二甲酸二丁酯(Di-n-butyl phthalate,DBP)染毒对子代Wistar大鼠海马神经细胞线粒体N8+-K+-ATPase活力、海马CA1区膜电位和血清中性激素水平的影响.方法 成年Wistar雌性大鼠80只,随机分为对照组和3个染毒剂量组,每组20只,于雌鼠交配成功后第6天持续到产后第14天予DBP灌胃染毒,染毒剂量为100(低剂量染毒组)、500(中剂量染毒组)、1000mg·kg-1·d-1(高剂量染毒组),对照组给予同剂量玉米油.用膜片钳测定各组仔鼠生后14 d海马CA1区神经细胞膜电位;分光光度法测定海马神经细胞线粒体Na+-K+-ATPase活力;化学发光酶免疫测定法检测血清中性激素水平.结果 中剂量染毒组雌性和雄性仔鼠Na+-K+-ATPase活力分别为(60.63±5.67)、(61.70±6.65)U/mg pro,均明显低于相应的对照组[(72.99±9.06),(69.79±4.69)U/mg pro],且中剂量染毒组雌性仔鼠Na+-K+-ATPase活力明显低于同性别低剂量染毒组[(67.81±5.57)U/mg pro],差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).中剂量染毒组仔鼠海马细胞膜电位[雌:(-47.56±5.47)μV,雄:(-46.96±8.72)μV]和高剂量染毒组仔鼠海马细胞膜电位[雌:(-49.95±5.46)μV.雄:(-46.88±5.85)μV]均明显低于相应同性别对照组[雌:(-59.76±6.02)μV,雄:(-56.96±6.47)μV]和低剂量染毒组[雌:(-58.12±6.38)μV,雄:(-55.10±5.03)μV].差异均有统计学意义(P<0.01).中剂量染毒组雌性和雄性仔鼠的雌二醇水平分别为(123.18±98.06)、(118.57±22.41)pmol/L均明显低于对照组[(232.88±40.16)、(170.66±62.14)pmol/L],差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05),中剂量染毒组雌性仔鼠的雌二醇水平与低剂量染毒组[(187.14±18.15)pmol/L]比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 胚胎期和哺乳期持续予500 mg·kg-1·d-1 DBP灌胃染毒后,可能通过能量代谢和性激素途径明显影响代大鼠海马神经细胞的发育.
关键词： 邻苯甲二酸二丁酯 膜电位 Na(+)K(+)交换酶 雌二醇 -
邻苯二甲酸二丁酯致雄性大鼠肛门直肠畸形和发育异常的研究
目的 研究邻苯二甲酸二丁酯(DBP)在大鼠孕晚期染毒诱导子代雄性大鼠发生肛门直肠畸形(ARMs),并探讨DBP对子代雄性大鼠生长发育的影响.方法 孕鼠20只,随机分为两组,怀孕第12～18天,每天分别予大豆油及DBP 850 mg/kg灌胃.出生后(PND) 1d统计肛门闭锁发生率,测量雄性仔鼠体重和肛门生殖器距离(AGD).PND 7 d观察肛门闭锁雄性仔鼠末端直肠及肛周组织的病理学改变.PND 35 d统计雄性仔鼠体重、体长(除尾)和腹围,解剖后对实质脏器(脑、心、肝、脾、肺、肾)以及生殖器官(睾丸、附睾)称重,计算脏器系数,评估发育情况.结果 雄性仔鼠肛门闭锁发生率为39.5％.PND 1d肛门闭锁雄性仔鼠体重及AGD分别为(4.876±0.067)g、(2.401±0.341)mm,对照组分别为(6.365±0.085)g、(2.993±0.403)mm,与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).PND 7 d末端直肠及肛周组织病理显示典型的ARMs.PND 35 d肛门闭锁雄性仔鼠腹围及体长分别为(20.021±0.416) mm、(12.925±0.158)mm,对照组分别为(11.993±0.339)g、(14.943±0.171)mm,与对照组相比,腹围增加且体长缩短,差异有统计学意义(P＜0.05).解剖后发现,肛门闭锁雄性仔鼠均发生巨结肠改变,实质脏器(脑、心、肝、脾、肺、左肾、右肾)以及生殖器官(左睾丸、右睾丸、左附睾、右附睾)脏器系数分别为(9.312±0.233)mg/g、(3.541±0.079) mg/g、(46.382±1.309)mg/g、(3.653±0.098) mg/g、(8.872±0.323)mg/g、(5.261±0.108) mg/g、(5.093±0.096)mg/g、(1.725±0.049) mg/g、(1.513±0.041) mg/g、(0.169±0.009) mg/g、(0.182±0.008) mg/g,对照组分别为(12.452±0.213)mg/g、(4.582±0.128)mg/g、(52.853±1.256) mg/g、(4.012±0.145)mg/g、(10.079±0.292)mg/g、(5.843±0.132)mg/g、(5.618±0.125)mg/g、(3.293±0.046) mg/g、(3.285±0.049)mg/g、(0.583±0.021)mg/g、(0.565±0.023)mg/g,与对照组相比均明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DBP 850mg·kg-1·d-1在大鼠孕晚期染毒能高效诱导子代雄性大鼠发生ARMs,并对其生长发育产生明显不良影响.
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波形蛋白在邻苯二甲酸二丁酯诱导大鼠尿道下裂中的表达研究
目的 利用邻苯二甲酸二丁酯(DBP)胚胎晚期暴露导致子代SD胎鼠发生尿道下裂的动物模型,检测波形蛋白(Vimentin)在尿道下裂与正常雄性胎鼠阴茎组织中的差异表达,以进一步探讨DBP诱导尿道下裂发生的作用机制.方法 妊娠14～18d SD大鼠20只,随机分为两组,实验组和对照组分别给予DBP和大豆油800mg/(kgod)灌胃,在妊娠19d (GD19),提取雄性胎鼠阴茎组织,用免疫印迹法检测Vimentin 蛋白的表达,用免疫组织化学方法分析其定位及染色情况.结果 Vimentin蛋白在尿道下裂雄性胎鼠中的相对表达量为0.583±0.031 (n =10),在对照组的相对表达量为0.702±0.054 (n =10),差异有统计学意义(P＜0.05).Vimentin蛋白主要定位于尿道上皮细胞,尿道下裂胎鼠染色强度较对照组明显减弱.结论 孕晚期大鼠暴露于DBP后改变了雄性胎鼠尿道组织中Vimentin的表达,影响了尿道上皮细胞的迁移和尿生殖褶的融合,这可能是尿道下裂发生的原因之一.
