首页 > 文献资料
-
二价金属离子转运体DMT1的研究进展
1997年，两个研究组分别用表达克隆和定位克隆方法单独地克隆到同一个功能基因：二价金属离子转运体(divalent metal transporter 1，DMT1)。DMT1是具有12个跨膜域的糖蛋白，在机体各组织广泛分布，特别在肠、肝、肾、脑等处有特征分布，肠中DMT1定位于十二指肠刷状缘膜表面，在其它组织细胞中定位于细胞膜和／或胞浆内内吞小体(endosome)和溶酶体(lysosome)的膜上。相关研究已基本证实，分布于十二指肠吸收细胞的DMT1可将肠道非血红素铁转运入细胞；组织细胞内吞小体膜的DMT1可将内吞小体中已解离铁转入胞浆，供细胞利用。DMT1表达主要受膳食铁水平调节。除遗传性血色素沉着症等疾病与DMT1表达过量有关外，亦已证实脑铁代谢紊乱相关的一些神经元变性病变与DMT1异常表达有密切联系。深入研究DMT1将为了解金属离子代谢机制提供重要的研究资料。
-
低锌浓度培养基对Caco2细胞二价金属离子转运体mRNA表达的影响
锌是人体必需的微量营养素之一,锌缺乏或过量与多种机能紊乱相关.二价金属离子转运体(divalent metal transporter 1,DMT1)是近期发现的哺乳动物金属离子转运体,在机体所有组织几乎均有表达,具有对铁、锌等多种二价金属离子的转运功能[1].我们既往的实验结果显示膳食高锌可以导致断乳小鼠睾丸DMT1 mRNA表达显著降低,约为适锌时表达量的1/3～1/4,提示可能为哺乳期后幼鼠维持锌内稳态的一种反馈保护机制,但是脑组织中的DMT1 mRNA表达未见变化,提示在脑组织锌转运中DMT1可能不作为主要的转运体[2].小肠是锌吸收的重要场所,DMT1是否参与小肠锌吸收过程?我们以不同锌浓度培养的Caco2细胞为模型,观察其对DMT1 mRNA表达的影响及其规律,探讨DMT1在小肠锌吸收中的可能作用.
-
脂多糖对巨噬细胞铁代谢的影响
目的：检测二价金属离子转运体（DMT1）和金属转运蛋白（FPN1）在原代培养巨噬细胞中的分布及脂多糖（ LPS）对巨噬细胞铁代谢的影响。方法采用原代细胞培养、MTT显色、细胞化学染色和细胞免疫荧光等方法检测LPS对原代培养的巨噬细胞活性的作用及对DMT1和FPN1分布的影响。结果不带铁反应元件的二价金属离子转运体（ DMT1-IRE）主要在细胞核中表达，在细胞质中分布较少。带铁反应元件的二价金属离子转运体（ DMT1＋IRE）主要分布于细胞质中，可以将吞噬小体中的铁向细胞质中转运。 FPN1在巨噬细胞的细胞质和细胞膜均有表达，但主要分布于细胞质。结论巨噬细胞吞噬衰老的红细胞以后，其中的亚铁血红素在细胞质中分解， FPN1可能介导了亚铁血红素分解释放出来的铁在巨噬细胞质中的转运过程。 LPS在低浓度时有促进巨噬细胞生长的作用，LPS浓度为10-5μg／L时达到高峰，随着浓度的增加，又开始抑制细胞生长。
-
肥胖对小鼠十二指肠 DMT1和 FPN1表达的影响
目的：观察肥胖对小鼠十二指肠二价金属离子转运体（divalent metal transporter 1，DMT1）mRNA、膜铁转运蛋白（ferroportin1，FPN1）mRNA及蛋白表达的变化，探讨肥胖影响铁吸收的机制。方法 C57BL／6J小鼠随机分为正常对照组和肥胖模型组，每组6只，通过喂养高脂饲料喂养建立肥胖模型，对照组采用普通饲料饲养，实验干预期14周。建模完成后，采用实时荧光定量PCR方法检测小鼠十二指肠DMT1、FPN1 mRNA 的表达，用Western blot检测小鼠十二指肠FPN1蛋白表达。结果与对照组小鼠相比，肥胖模型组小鼠十二指肠DMT1、FPN1 mRNA表达以及FPN1蛋白表达水平降低，差异具有统计学意义（ P ＜0.05）。结论肥胖会下调机体十二指肠DMT1、FPN1的表达，导致铁吸收不良，为进一步研究肥胖引起铁缺乏机制提供理论和实验依据。
-
锰中毒性帕金森综合征大鼠脑中DMT1、FP1的研究
目的 研究锰中毒性帕金森综合征大鼠脑黑质二价金属离子转运体(DMT1)、铁转运蛋白(FP1)的表达变化.方法 将80只SD大鼠随机分成4组,对照组腹腔注射生理盐水,低、中、高剂量组分别腹腔注射5、15、20 mg/kg的MnCl2溶液,连续16周.第16周进行3项行为学测试.电感耦合等离子原子发射光谱法(ICP-AES)测试中脑黑质锰含量,免疫组织化学染色法观察黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性表达量,判定锰中毒性帕金森综合征大鼠模型是否成功;采用免疫组化及荧光定量PCR的方法测定大鼠脑黑质中DMT1、FP1的表达量.结果 该实验方法成功制备锰中毒性帕金森综合征大鼠模型.5、15、20 mg/kg染锰组大鼠中脑黑质锰含量分别为(1.72±0.33)、(2.92±0.77)、(5.65± 1.60) μg/g,均高于对照组[(0.56±0.20) μ/g],差异有统计学意义(P＜0.01).5、15、20 mg/kg染锰组中脑黑质TH阳性细胞平均吸光度值(0.054±0.008、0.016±0.004、0.003±0.001),均低于对照组(0.109±0.019),差异有统计学意义(P＜0.01).15、20 mg/kg染锰组中脑黑质DMT1阳性细胞平均吸光度值(0.062±0.004、0.116±0.064)均高于对照组(0.015±0.007),差异有统计学意义(P＜0.01).5、15、20 mg/kg染锰组中脑黑质FP1阳性细胞平均吸光度值(0.092±0.011、0.048±0.008、0.008±0.002)均低于对照组(0.306±0.081),差异有统计学意义(P＜0.01) 15、20 mg/kg染锰组大鼠黑质DMTl mRNA表达量(0.052±0.0126、0.124±0.0299)均高于对照组(0.001±0.000 4),差异有统计学意义(P＜0.05);5、15、20 mg/kg染锰组中脑黑质FP1 mRNA表达量(0.059±0.007 6,0.033±0.009 4,0.002±0.000 7)均低于对照组(0.162±0.046 3),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 锰中毒性帕金森综合征大鼠模型中,DMT1表达增加及FP1表达降低,可能参与脑黑质锰积聚及多巴胺能神经元缺失的发生发展过程.
-
锌对断乳小鼠金属离子转运体mRNA表达的影响
目的观察哺乳期后幼鼠在不同膳食锌水平条件下的生长情况;探索膳食锌对幼鼠2价金属离子转运体(DMT1)mRNA表达所产生的影响.方法20只肿瘤研究所(ICR)幼鼠(P21)随机分为膳食缺锌(ZD,Zn 1 m/gkg)、适锌(ZA,Zn 30 m/kg)、高锌(ZS,Zn 180 mg/kg)、对喂(PF,Zn 180 mg/kg)4组.以相应饲料饲喂3周(P21～P42),观察小鼠P21～P42期间的摄食量及体重变化.饲喂3周后,处死小鼠取血清及相关组织,原子吸收分光光度法测定小鼠血清锌含量.半定量(RT-PCR法)检测不同膳食锌水平幼鼠P42时DMT1 mRNA的表达状况.结果断乳幼鼠饲喂不同水平膳食锌3周后,缺锌幼鼠摄食量及体重显著低于其余各组,血清锌与其余各组存在显著性差异.膳食高锌可致睾丸DMT1 mRNA表达显著降低,约为适锌时表达量的1/3～1/4,脑中DMT1 mRNA表达未见变化.结论哺乳期后保证膳食足量锌对幼鼠的生长发育十分重要;小鼠睾丸DMT1 mRNA在高锌时表达量下降可能是哺乳期后幼鼠维持锌内稳态的一种反馈保护机制.
-
ebselen通过降低细胞内铁离子转运抑制铁诱导的Aβ产生
目的 探讨DMT1抑制剂ebselen是否通过抑制细胞内铁离子内流, 发挥抑制Aβ产生的作用.方法 培养APPsw细胞, MTT法检测ebselen对细胞活力的影响, 分别给予FeSO4或ebselen处理细胞, ELISA检测Aβ1-42水平, 免疫荧光检测DMT1和BACE1的表达, 以及荧光分光光度计检测ebselen对二价铁离子转运的影响.结果 ebselen作为DMT1抑制剂, 能抑制二价铁离子的细胞内转运, 降低DMT1和BACE1的表达水平, 抑制铁诱导的APPsw细胞内Aβ1-42水平.结论 ebselen抑制铁诱导的APPsw细胞内Aβ1-42水平, 从而抑制Aβ的产生.
-
二价金属离子转运体在锰转运过程中的作用
锰是机体必需的金属元素，对维持大脑正常功能起到重要作用。锰过多或缺乏会对机体产生有害的影响。二价金属离子转运体（ divalent metal-ion transporter-1，DMT1）参与机体内锰的转运。作者对近年有关这两方面的研究作一综述。
-
依布硒林减轻DMT1诱导的铁死亡在实验性大鼠蛛网膜下腔出血中的研究
目的 观察大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后二价金属离子转运体(divalent metal transportor 1,DMT1)的表达变化及铁死亡情况,探讨依布硒林可能通过抑制DMT1的表达减轻铁死亡,从而对SAH后早期脑损伤起保护作用.方法 血管内穿刺法构建SD大鼠SAH模型,免疫荧光检测脑皮质中DMT1、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)表达定位,Western blot检测脑皮质中SAH后72 h内各时间点及侧脑室注射依布硒林后DMT1、GPX4的表达变化,检测细胞内铁沉积情况、铁含量、脂质过氧化物产物丙二醛(malonaldehyde,MDA)等铁死亡指标,以及大鼠脑水肿和神经功能学评分变化.结果 免疫荧光检测结果显示DMT1、GPX4表达于大鼠脑皮质神经元胞质内.Western blot检测结果显示,与假手术组相比,DMT1表达先升高,24 h降低后再次升高,48、72 h仍增高(P＜0.01);而SAH后GPX4的表达降低,24 h显著降低(P＜0.01),随后48、72 h继续降低(P＜0.01).与SAH组、溶剂组相比,依布硒林2 mg/kg组中DMT1降低(P＜0.01);依布硒林4 mg/kg干预后DMT1表达降低显著(P＜0.01),GPX4表达增高显著(P＜0.01).与SAH组、溶剂组相比,依布硒林4 mg/kg组中细胞内铁沉积减少,铁含量、MDA减少(P＜0.01);GSH含量、GPX4活性增加(P＜0.01).神经功能学评分、脑水肿得到改善(P＜0.01).结论 依布硒林可能通过抑制DMT1的表达减少铁向胞内转运继而减轻铁死亡,从而对SAH后早期脑损伤起保护作用.
