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084 马达加斯加恶性疟原虫甲氟喹抗性株对旅游者和公共卫生的影响
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090 冈比亚成人体内的恶性疟原虫配子体
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013咯萘啶和DNA拓朴异构酶Ⅱ抑制剂在体外对多药物抗性恶性疟原虫配子体的杀伤活性
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017用基因枪和肌肉注射法接种恶性疟原虫丝氨酸重复抗原DNA疫苗诱导的免疫反应
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009抗恶性疟原虫再感染的影响因素
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012用放射性同位素法测定巴西恶性疟原虫对抗疟药的敏感性
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016法属圭亚那恶性疟原虫有限的遗传多样性和较高的自交率
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015恶性疟原虫:氨基葡聚糖和硫酸化糖结合物破坏株特异性玫瑰花结的分子基础
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051 自然感染恶性疟原虫母婴体内抗裂殖子表面蛋白-1 19 kDa IgG:随年龄增长的亚类分析、无性期原虫血症及保护作用
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042 恶性疟原虫:通过氨基多糖受体上硫酸的特性调节胎盘分离株的粘附性
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055 巴西中部地区恶性疟原虫现场分离株DBL-1可变序列分析
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056 恶性疟原虫的一种过氧化物氧化还原酶的分子克隆和鉴定
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057 应用分子流行病学方法分析喀麦隆Yaounde地区恶性疟原虫CG2基因omega重复区和氯喹耐药的关系
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050 恶性疟原虫氯喹抗性基因CG2及其多态性分析
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044 乌干达低度流行区母亲孕期感染恶性疟原虫和贫血对其新生儿体重的影响
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052 恶性疟原虫对肠外给药的蒿甲醚可能发生的耐药性:印度孟买的病例报告
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恶性疟原虫的祖先
关于疟疾的起源和传播的讨论一直很流行.对恶性疟原虫基因组多态性的近期研究会给我们多少解释,仍然是局限的猜测还是有更新的内容,对疟原虫的理解对未来到底有多重要的影响等问题,本文提醒人们换个角度思考.
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瑞香素类抗疟化合物的筛选及其靶分子研究
目的 通过体外试验和鼠疟动物模型筛选瑞香素结构衍生物的抗疟作用,确定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫抗疟作用的靶分子.主要研究内容及方法 (1)在瑞香素基本结构的基础上设计并合成瑞香素的结构衍生物;(2)通过光学显微镜镜检和微量荧光法两种体外筛选系统筛检瑞香素类衍生物对恶性疟原虫的体外抗疟作用;(3)对体外筛检抗疟活性高的化合物,采用WHO推荐的四天抑制试验测定其对鼠伯氏疟原虫(ANKA株)的抗疟作用;(4)以电子自旋共振法测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫核糖核酸还原酶(ribonucleotide reductase,RNR)活性的影响;(5)采用紫外分光光度法测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫细胞色素C氧化酶(cytochrome c oxidase,COX)活性的影响;(6)对体外同步培养的恶性疟原虫经瑞香素、DA78与DA79作用后,抽提总RNA,并合成相应的特异性引物,运用实时荧光PCR法测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫的重要生物功能酶,如RNR、超氧化物歧化酶(superoxidase dismutase,SOD)及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,L,DH)等基因表达的影响.结果 (1)在瑞香素结构的基础上,通过对7、8位羟基或相邻位点的修饰,共合成32种瑞香素结构衍生物.(2)通过体外筛选系统筛选出DA78与DA79两种新型的瑞香素类抗疟化合物,两者的IC50分别为7.6μmol/L、1.4μmoL/L,其体外抗疟活性与瑞香素的差别无统计学意义(P>0.05);体内试验按D4减虫率评价,瑞香素、DA78与DA79灌胃给药在鼠伯氏疟原虫ANKA株感染小鼠中,DA79在1、10、50、75 ms/(kg·d)×4 d组与对照组1%西黄蓍胶相比较差异有统计学意义(P<0.01),而DA78在50或75 mg/(kg·d)×4 d的抗疟作用与对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05);另外DA79在10或75 mg/(kg·d)×4 d的抗疟效果要优于同剂量的瑞香素(P>0.05).(3)体外同步培养的恶性疟原虫经100μmol/L瑞香素2、4、8和12 h作用后,COX活性依次下降了0、6%、、73%和80%,在瑞香素浓度为100 nmoi/L、lμmoL/L、100 μmol/L与l mmol/L作用6 h后,COX活性依次下降了3%、31%、53%和84%(n=3),其活性随着瑞香素浓度的增高基本成线性降低,而当瑞香素的铁鳌合能力饱和后对COX活性的影响几乎消失;100 μmol/L DA78与DA79作用2、4、8和12 h后,COX的活性依次下降了0、2%、11%、9%与7%、13%、17%、32%,在DA78、DA79浓度为100 nmol/L、1 μmol/L、100 μmol/L与1 mmol/L作用6 h后,COX活性依次下降了0、0、4%、13%与1%、4%、15%、29%,其活性随着DA78或DA79浓度的增高基本成线性降低,其中DA79对COX的抑制作用高于DA78,但两者均低于瑞香素对COX的作用(n=3,P<0.01).(4)体外同步培养的恶性疟原虫经瑞香素、DA78与DA79作用后.以电子自旋共振法测定不同时间恶性疟原虫酪氨酸的量以反映RNR的活性,经100 μmol/L瑞香素作用1、2、3和4 h后,相对于对照组的值RNR的活性依次为其值的93%、49%、31%和25%,在瑞香素浓度为100 nmol/L、1 μmol/L、100 Vanol/L与1 mmoL/L作用6 h后,相对于对照组的值RNR的活性依次为其值的97%、69%、42%和7%;RNR的活性随着瑞香素浓度的增高而降低,但并非呈线性相关.当瑞香索铁鳌合能力饱和后,恶性疟原虫RNR活性几乎未受影响(n=3,P>0.05).经100μmot/L DA78与DA79作用1、2、3和4 h后,相对于对照组的值恶性疟原虫RNR的活性依次为其值的98%、96%、87%、71%与93%、44%、41%、23%,DA79对RNR活性的抑制作用高于同剂量相同作用时间DA78的作用(n=3,P>0.01),DA79与瑞香素在体外对恶性疟原虫RNR抑制作用的差别无统计学意义(n=3,P>0.05);在DA78与DA79浓度为100 nmol/L、1μmol/L、100μmol/L与1 mmol/L.,作用6 h后,相对于对照组的值RNR的活性依次为其值的100%、92%、64%、61%与97%、48%、25%、4%,DA79对RNR活性的抑制作用高于同剂量DA78的作用(n=3,P<0.01),并且高于同剂量瑞香素对RNR活性的抑制作用(n=3,P<0.05).(5)恶性疟原虫体外经瑞香素、DA78与DA79作用后,LDH、SOD与RNR 3种基因扩增的标准曲线,在105~109 copies/ml范围内标准曲线呈良好的线性关系,其基因扩增产物的标准曲线的r2依次为0.9907、0.9983、0.9975.根据标准曲线计算各组样品3种基因的原始拷贝数来比较各组3种基因表达量的差异,不同处理组对恶性疟原虫LDH基因的表达无显著性抑制作用(n=3,P>0.05),而且各组间差异无统计学意义(n=3,P>0.05);瑞香素、DA78与DA79对恶性疟原虫RNR基因的表达均有抑制作用;只有瑞香素对恶性疟原虫SOD基因表达产生抑制作用,其他各组无显著性抑制作用;但瑞香素的铁螯合能力饱和后,对上述3种基因的表达均未产生显著性抑制作用(n=3,P>0.05).结论以DA78与DA79为代表的瑞香素类衍生物作为一类新型的抗疟化合物,在体外和体内试验中均显示出一定的抗疟活性;RNR很可能作为瑞香素类抗疟化合物抗疟作用的靶分子.本研究首次发现两种瑞香素结构衍生物DA78与DA79具有与瑞香素同一水平的抗疟活性,为寻求更有效的抗疟化合物提供了方向,并利用分子生物学方法对瑞香素抗疟化合物抗疟作用的靶分子进行了筛选与研究,初步确定了RNR作为瑞香素类抗疟化合物抗疟作用的靶标,为今后瑞香素类抗疟药物的进一步开发提供了理论依据.
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不同感染来源恶性疟原虫裂殖子表面蛋白3基因多态性分析及抗原表位预测
目的 分析云南省不同感染来源恶性疟原虫裂殖子表面蛋白3(PfMSP-3)基因和抗原表位多态性. 方法 收集2012年8月-2016年12月寄生虫病防治信息管理系统登记报告的云南省本地和输入恶性疟病例的血样和流行病学史等信息.提取血样的疟原虫DNA,半巢式PCR扩增PfMSP-3基因并测序,与GenBank中的恶性疟原虫Pf3D7、PfK1分离株的参比序列LN999944.1、U08851.1进行比对.用MEGA 5.04、Arlequin 3.5.2.2分析PfMSP-3基因的单倍型、期望杂合度(He)、群体间遗传分化指数(Fst).用Network 4.6.0构建单倍型网络进化图.用DnaSP 5.10计算核苷酸的非同义(Ka)、同义置换率(Ks).用IEDB在线预测软件预测PfMSP-3肽链T细胞、B细胞抗原表位. 结果 共收集190份恶性疟病例血样,其中181份扩增出长1 100 bp的PfMSP-3片段,测序成功167份(缅甸121份、非洲37份、云南本地感染9份).序列比对结果显示,167条DNA序列存在36种单倍型,He为0.409±0.183,Ka/Ks为0.98.各单倍型沿Pf3D7型(Ⅰ)、过渡型(Ⅱ)及PfK1型(Ⅲ)等3种方向进化:H_1、H_9等7种单倍型为Pf3D7型,H7、H_8等6种单倍型为过渡型,H_2、H_3等23种单倍型为PfK1型.Pf3D7型、过渡型和PfK1型序列的占比分别为49.7% (83/167)、12.6% (21/167)和37.7% (63/167).PfMSP-3基因在非洲与缅甸恶性疟原虫群体间的分化程度高,Fst=0.049;在非洲与云南本地感染恶性疟原虫群体间小,Fst=0.032.抗原表位分析结果显示,36种单倍型的PfMSP-3肽链亲水性高于疏水性,指数分别为1.050~2.535和-2.583~-3.544.T细胞抗原表位活性为-1.1;B细胞抗原表位活性平均>0.5,且表现为Pf3D7型>过渡型>PfK1型. 结论 云南省不同感染来源恶性疟原虫的PfMSP-3基因存在3类基因型,不同基因型PfMSP-3蛋白B细胞抗原表位活性的预测值较T细胞高.
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河南省输入性恶性疟原虫多药抗性基因1和K13基因的突变分析
目的 对河南省2013-2015年输入性恶性疟原虫多药抗性基因1(Pfmdr1)和K13基因进行检测,分析其基因突变情况.方法 采集河南省2013-2015年自非洲返乡的被确诊为输入性恶性疟患者的血样,并收集病例的相关信息.提取患者血样中疟原虫基因组DNA,巢式PCR扩增Pfmdr1和K13基因,对扩增序列进行测序、比对,分析基因的突变情况.结果 386例输入性恶性疟患者以男性青壮年为主,自26个非洲国家返乡,其中病例数居前3位的输入来源国为安哥拉、赤道几内亚和尼日利亚,其病例数分别占总病例数的22.5% (87/386)、13.7% (53/386)和13.2% (51/386).386份血样均成功扩增出Pfmdr1和K13基因.测序结果显示,Pfmdr1的86和1246位点的突变率分别为23.6% (91/386)和3.1% (12/386),K13基因的突变率为5.4% (21/386).21份K13基因突变的血样来自于安哥拉、赤道几内亚和尼日利亚等10个国家,未发现C580Y突变.在来自安哥拉和赤道几内亚的血样中检测到2个与青蒿素抗性相关的突变,分别为R539T和P574L,突变率均为0.3% (1/386).2013-2015年,Pfmdr1的86位点的突变率分别为28.8% (36/125)、23.4% (32/137)和18.6%(23/124),各年份突变率的差异有统计学意义(x2=6.438,P<0.05);1246位点突变率分别为4.0%(5/125)、3.7% (5/137)和1.6%(2/124),各年份突变率的差异无统计学意义(x2=1.384,P>0.05);K13基因的突变率分别为3.2% (4/125)、8.8% (12/137)和4.0% (5/124),各年份突变率的差异无统计学意义(x2=4.631,P>0.05).结论 Pfmdr1的86和1246位点的突变率分别为23.6% (91/386)和3.1% (12/386),K13基因的突变率为5.4% (21/386),发现了与青蒿素抗性相关的R539T和P574L位点突变.
关键词: 输入性疟疾 恶性疟原虫 恶性疟原虫多药抗性基因1 K13基因 突变