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天津市手足口病患儿危险因素的病例对照研究
手足口病是由数种肠道病毒为病原感染的一种传染病,常见的病毒型别是柯萨奇病毒(CoxA16)和肠道病毒71型(EV71).2008年全国大部分省份报告手足口病,且出现EV71引起的死亡病例.监测表明天津市报告的手足口病例主要病原体为EV71和CoxA16,其中81%为EV71感染.尽管EV71引起的临床症状、病原学、诊断等比较明确,但是EV71感染的传播模式、危险因素等仍然不十分明确,且少有研究[1].为此我们开展了1:2病例对照研究.
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许昌市2010年手足口病流行病学分析
手足口病自2008年5月被列入我国法定报告管理的丙类传染病以来，全国疫情呈高发态势。本研究分析2010年许昌市手足口病疫情的流行病学特征。病例诊断按卫生部《手足口病诊疗技术指南(2010年版)》要求，运用描述流行病学方法进行分析，数据来源于中国疾病预防控制信息系统，检索条件为“按发病日期”，人口资料来自许昌市统计局统计年鉴。
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济南市2009-2011年手足口病病原学及基因特征分析
手足口病(HFMD)是由多种肠道病毒(EV)引起的一种急性传染病.2008年5月我国将其纳入法定报告丙类传染病管理.2009年卫生部进一步要求提高其病原学检测比例.2010年山东省开始进行全年监测.本研究采用RT-PCR对2009-2011年济南地区发生的2066例HFMD患者标本进行分析,阐明重症病例其病原及基因特征.
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浙江省宁波市2008-2011年手足口病流行病学及病原学特征分析
目的 分析2008-2011年宁波市手足口病流行特征.方法 从疾病监测信息报告管理系统获取宁波市2008-2011年手足口病资料,运用描述流行病学方法进行分析.对粪便标本采用RT-PCR扩增基因序列测定,并利用生物学软件分析.结果 2008-2011年宁波市共报告手足口病病例37 524例,其中重症196例,死亡12例,年均发病率为145.26/10万,病死率为0.03％.＜5岁儿童占报告病例的95.89％,散居儿童占64.10％；各地区发病均处于较高水平,其中宁海、象山县为发病率高的地区,发病高峰在4-7月,男性多于女性.实验室确诊2394例,肠道病毒(EV)71型是主要的病毒株,进化树分析表明宁波市手足口病EV71分离株属于C4a进化分支,其流行和传播存在多个传播链.Cox A16株同时包含Bla和Bib两条进化分支共同流行.健康儿童EV71中和抗体阳性率为53.48％,GMT为11.23(8.33 ～ 14.98)；Cox A16中和抗体阳性率为63.18％,GMT为12.61(6.70 ～ 16.52).结论 宁波市手足口病疫情处于高流行态势,＜5岁散居儿童是主要发病人群,EV71为优势株；EV71毒株为C4a亚群,CoxA16毒株为B1基因亚型,与中国大陆优势株流行趋势一致.
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北京市2010年手足口重症病例EV71检出情况及病原学分析
目的 了解2010年北京市手足 (口)重症病例肠道病毒(EV)检出情况及EV71病原学特征.方法 荧光定量RT-PCR检测EV71和柯萨奇病毒A组16型(CoxA16).采用RD细胞对检测阳性的咽拭子进行病毒分离培养和鉴定,对EV71分离株的VP1基因序列进行种系发生分析.结果2010年北京市手足口重症病例442例荧光定量RT-PCR检测阳性253例,阳性检出率为57.24％,其中EV71为54.55％ (138/253),CoxA16为5.93％(15/253),其他肠道病毒为39.53％( 100/253).VP1基因序列分析表明2010年北京市手足口重症病例的12株EV71分离株均属于C4a基因型,核苷酸同源性为97.2％ ～ 100.0％；与2007-2010年北京EV71分离株、2007年山东手足重症病例、2008年安徽阜阳及2008年广东手足口重症及死亡病例EV71分离株VP1基因序列核苷酸同源性为94.0％ ～ 99.9％.结论 北京市2010年手足口重症病例由C4a基因型EV71引起,其中至少有4个病毒链在重症病例发病中起作用.分离的12株EV71与安徽阜阳地区2008年手足口重症病例分离株亲缘关系较近.
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北京市2006-2008年急性弛缓性麻痹与手足口病关联分析
目的 探讨北京市手足口病流行对急件弛缓性麻痹(AFP)发病的影响及其流行病学联系.方法 分析2006-2008年北京市AFP发病情况.对AFP病例利用RD、L20B细胞分离及鉴定病毒,并对非脊髓灰质炎肠道病毒(NPEV)阳性标本进行肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxA16)检测.通过国家法定传染病报告系统收集2008年北京市手足口病发病数据,并对北京市2008年AFP发病情况与手足口病流行特点进行比较和分析.结果 2006-2008年北京市AFP报告病例数从108例增加到177例,NPEV分离率从11.11%上升到20.34%,EV71和CoxA16两种病毒总检出率从0.93%上升到10.17%.结论 EV71和CoxA16可能是AFP发病增加的重要原因.这部分病例并不表现出疹等手足口病的典型症状,而是以AFP为惟一表现,尤其是在手足口病流行期,这部分病例所占比例更高.
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北京地区2006-2008年肠道病毒71型VP1区基因特征分析
目的 了解2006-2008年北京地区分离的不同来源肠道病毒71型(EV71)VP1区基因特征.方法 从手足口病例、急性弛缓性麻痹病例和健康儿童的粪便、咽拭子和疱疹液标本中分离EV71病毒株,选取其中9株EV71分离株,采用RT-PCR扩增VPl区全长基因片段并进行序列测定、系统发生树构建、核苷酸同源性及组内和组间进化距离分析.结果 9株EV71在系统发生树上与C基因型中的C4亚型代表株属同一分支;在核苷酸同源性分析中,9株分离株与C4亚型代表株的同源性达到92.1%～93.9%,明显高于与C1、C2、C3亚型代表株的同源性(分别为88.8%～89.5%、89.4%～90.0%和88.4%～89.3%);三种不同来源的分离株病毒之间具有较高的同源性(95.9%～100.0%),但与1998年分离的C4亚型代表株的同源性却较低(分别为93.3%～93.9%和92.1%～92.9%).在进化距离的分析上,C4亚型内各组间距离较大,尤其是亚型代表株与分离株之间距离大(D=0.052～0.071).结论 2006-2008年北京地区流行的EV71仍然是C4亚型,在同一时间不同地区、不同来源、不同疾病状态卞分离的EV71在VP1区全长基因序列上无明显差别;但是随着时间推移,核苷酸变异的不断积累,出现新亚型的概率也在不断增加,因此有必要加强分离株的监测以掌握EV71的变异趋势.
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肠道病毒71型北京分离株全基因组序列分析
目的 了解2008年北京地区肠道病毒71型(EV71)分离株的全基因序列特点.方法 收集北京地区手足口病患儿的咽拭子样本12份,对其中1份样品08YM-3,经Vero细胞分离培养,提取病毒RNA.利用RT-PCR和5'、3'RACE扩增EV71全长基因.对PCR产物克隆和测序.利用DNAStar软件包的MegAlign进行核苷酸序列分析,构建系统进化树.结果 分离的EV71病毒株经过扩增后克隆得到3个涵盖EV71全基因组的阳性质粒,测序后拼接为EV71全基因组,命名为BJ08株.BJ08的5'非编码区(UTR)、P1、P2、P3、3'非编码区(UTR)和全基因组的核苷酸与C4亚型的参考序列同源性均高,分别为95.6%～96.7%、88.3%～96.1%、78.1%～94.0%、90.8%～94.6%、85.9%～94.1%和90.9%～93.9%.BJ08株与其他亚型各区段的核酸同源性均低于90%.在全基因序列与VP1区构建的系统进化树中,BJ08株均与C4亚型在同一分支.BJ08株与C4亚型参考株VP1区的6个亚型相关氨基酸序列一致,VP1抗原性表位(92～107aa)无变异.结论 北京BJ08 EV71病毒分离株为C4业型.
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北京市入托体检健康儿童肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型感染状况及就诊行为调查
目的：了解北京市入托儿童肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）感染状况及其相关的就诊率，为估算手足口病疾病负担参考。方法2013年8月20－31日对北京市东城区、朝阳区和怀柔区进行入托体检的健康儿童开展血清学调查，采用ELISA方法检测血清中EV71和Cox A16的IgG和IgM抗体。结果共调查813名儿童，平均年龄为（3.5±1.0）岁。Cox A16 IgG阳性率为61.9%，IgM阳性率为4.4%；EV71 IgG阳性率为9.3%，IgM阳性率为1.1%；各种抗体阳性率在不同性别中的分布差异无统计学意义（P＞0.05），在不同年龄组中的分布差异有统计学意义（P＜0.05）。Cox A16抗体阳性者中7.8%有皮疹，EV71抗体阳性者中10.7%有皮疹。Cox A16或EV71抗体阳性者中，仅7.1%在父母陪伴下到医院就诊，而有皮疹的抗体阳性病例中，80.5%去医院就诊。结论北京市健康入托儿童中，既往感染Cox A16的比例较大，EV71抗体阳性率明显低于Cox A16，提示托幼儿童对EV71普遍易感，应是手足口病防控重点人群。
关键词： 手足口病 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A组16型 -
河南省2014年手足口病重症病例病原学分析
目的 分析2014年河南省手足口病(HFMD)重症病例病原学特征.方法 整群抽取郑州市某儿童医院2014年4-6月244例HFMD住院病例作为研究对象,采集粪便标本,病原学检测采用荧光定量RT-PCR、病毒分离、VP1测序比对等方法.病原学特征统计分析采用SPSS17.0软件.结果 244例手足口病病例中,重症组109例,轻症组135例,肠道病毒(EV)通用引物RT-PCR阳性229例,阳性率为93.85％.肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)和CoxA10的感染构成比分别为83.84％、5.68％和8.30％.EV71感染致8例心肺功能衰竭,2例死亡;CoxA10感染致1例心肺功能衰竭、死亡.重症组与轻症组之间肠道病毒感染率差异有统计学意义(x2=5.312,P=0.021).采用Fisher精确概率法对重症组和轻症组EV71、Cox A16和其他EV感染构成比进行统计学比较,P=0.048.EV71和CoxA10感染致心肺功能衰竭发生率和致死率的差异无统计学意义(分别为x2=0.051,P=0.821和x2=2.198,P=0.138).2014年河南省CoxA10分离株属于基因6型,VP1区段核苷酸和氨基酸同源性分别为94.3％ ～ 99.7％和96.3％～100.0％.结论 EV71仍然是河南省HFMD的主要病原.Cox A10在感染病原谱中所占比加大,且感染后可致心肺功能衰竭,应加强对其他EV的监测.
关键词： 手足口病 重症病例 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A组16型 -
宁夏地区2008年肠道病毒71型分离株基因特征分析
目的 研究宁夏地区手足口病患者中肠道病毒71型(EV71)分离株的基因特征.方法 采集手足口病患者标本进行病毒分离培养,阳性标本进行RT-PCR鉴定后,选取29株EV71分离毒株,对其VP1区进行核苷酸序列测定,并参考A、B、C各基因型的参考毒株和以往中国EV71的分离毒株进行同源性分析并构建系统发生树.结果 从439份标本中分离肠道病毒215株,经RT-PCR鉴定,93株为EV71.选取其中29株进行VP1基因全序列测定,根据VP1全基因序列构建系统发生树,29株毒株均在C基因型中,与C4亚型属同一分支,与C4亚型代表株核苷酸同源性为91.7%～99.4%,氩基酸同源性为96.6%～100.0%.结论 宁夏地区手足口病患者中分离的EV71毒株属C基因型的C4亚型.
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河南省手足口病例肠道病毒71型分离株的全基因组序列分析
A16疏远.结论 HENAN08属EV71病毒的C4亚型,与AnhuiFY08、Zhejiang08和SHZH03进化途径类同.
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北京市儿童手足口病与肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型感染有关
目的 了解2007年5-6月北京市儿童中流行的手足口病的病原.方法 于2007年5、6月间采集来首都儿科研究所附属儿童医院门诊就诊的手足口病患儿咽拭子标本6份和1份病情危重的手足口病并发神经系统症状而急诊收住院患儿(编号F4243,年龄9岁8个月,女性)的经气管插管呼吸道抽吸液、脑脊液及血清标本.将咽拭子和气管插管抽吸液标本接种Hep-2、MDCK和Vero细胞进行病毒分离.同时设计位于肠道病毒5'非编码区(UTR)的通用引物2对(巢式PCR)、肠道病毒71型(EV71)VP1基因不同位置的特异性引物2对半(PCR和半巢式PCR)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)的特异性引物1对检测标本中的病毒核酸.首先用随机引物将标本中的RNA逆转录成cDNA,然后分别用上述引物进行PCR扩增肠道病毒5'UTR和EV71/CA16的VP1基因片段;对EV71阳性的标本还扩增了VP1全基因,扩增产物直接进行序列测定和分析.结果 6例门诊就诊的普通手足口病患儿和F4243的呼吸道标本中均扩增到肠道病毒5'UTR基因片段,有2例门诊患儿和F4243的标本中还扩增到EV71的VP1基因片段,提示该组手足口病患儿均为肠道病毒感染,其中3例为EV71感染.序列测定和分析表明有1例普通手足口病患儿(F4211)和F4243标本确定为EV71.所有标本接种Hep-2和MDCK细胞均未出现病变,说明常见的呼吸道病毒为阴性.除1份咽拭子标本(F4283)外,其余6份接种Vero细胞的标本均出现细胞病变.用肠道病毒通用引物和EV71特异性引物对分离到的病毒株核酸的扩增结果显示这6株病毒均为肠道病毒,其中F4211和F4243为EV71,与直接从呼吸道标本中扩增的结果相符;其余4株为CA16.结论 北京市儿童中流行的手足口病与肠道病毒EV71和CA16感染有关;EV71可以在5岁以上儿童中引起严重的神经系统并发症,应引起注意.
关键词： 手足口病 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A组16型 -
浙江省肠道病毒71型的分离与VP1区域序列分析
目的研究浙江省手足口病患者中肠道病毒(EV)71型分离株的病毒基因特征.方法采集手足口病患者粪便、疱疹液和咽拭子标本,进行病毒分离和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)特异性扩增进行鉴定,同时选取其中6株EV71分离毒株,对其抗原决定簇部位VP1区进行核苷酸序列测定并参考EV71 A、B、C各基因型的参考毒株和以往中国EV71的分离毒株进行同源性分析和构建系统发生树.结果从14份标本中分离出EV 9株,经中和试验和RT-PCR特异性扩增,均证实为EV71.其中6株EV71分离毒株与A、B基因型参考毒株的核苷酸和氨基酸同源性分别为82.9%～85.5%和94.9%～98.0%;与C基因型比较,同源性分别为89.2%～94.1%和97.0%～99.0%.而与C基因型的C1、C2、C3、C4亚型代表株的核苷酸同源性分别为91.0%～92.2%、90.2%～90.3%、89.2%～89.5%、96.7%～96.9%,其中与国内以往分离到的C4亚型毒株的核苷酸同源性可达93.8%～97.1%.在系统发生树上,这6株毒株均在C基因型中,与属C4亚型的11株毒株属同一分支.结论浙江省手足口病患者中分离的EV71毒株属C基因型的C4亚型.
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深圳市一起肠道病毒71型引发手足口病流行的基因型别分析
目的 对2004年深圳市一起肠道病毒71型(EV71)引发手足口病流行的基因型别分析.方法 用EV71型特异性引物进行RT-PCR,并对EV71的VPl和VP4基因进行克隆,所得的序列与EV71型A、B、C基因型代表株的核苷酸序列用TreeView和PHYLIP软件(3.6b)进行系统进化分析.结果 4株病毒与C基因型代表株比较接近,VP1区核苷酸同源性在87.8%～92.0%之间,VP4区核苷酸同源性在85.9%～87.4%之间;与A、B基因型代表株比较差异较大,VPI区核苷酸同源性为81.9%～84.2%,VP4区为80.6%～85.0%;4株病毒VP1核苷酸同源性为94.1%～99.8%,VP4同源性为100%,组成一个独立的小分支.结论 对EV71的VPI和VP4区进行基因进化分析,可得出类似的结果 ,4株EV71深圳流行株可命名为C4亚型.
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2011-2015年广东省基于主动监测的肠道病毒71型感染手足口病流行特征
目的 了解广东省2011-2015年肠道病毒71型(EV-A71)感染手足口病流行特征.方法 通过"广东省急性传染病监测信息平台系统"收集2011年1月至2015年12月广东省8个哨点医院上报的感染EV-A71的手足口病普通病例监测数据,包括病例的年龄、发病日期和病原学数据等.通过"中国疾病预防控制信息系统"收集手足口病报告病例数及实验室确诊病例数资料,包括手足口病普通病例疫情数据、重症和死亡病例疫情数据,以及病例的年龄、发病日期和病原学数据等.结合两种来源的数据估算感染EV-A71手足口病发病率,描述其分布特征;采用χ2检验分别比较不同年龄组和不同月份间EV-A71感染手足口病阳性率及估算发病率的差异.结果 2011-2015年8个哨点医院共报告感染EV-A71的普通病例1 855例,其中,2014年高(31.6%,605/1 916),2015年低(6.8%,134/1 971)(χ2=521.85,P＜0.001).而通过疾病监测系统报告的2011-2015年广东省手足口病普通病例为1 772 516例,感染EV-A71的重症及死亡病例为1 902例;2011-2015年广东省手足口病重症及死亡病例中,感染EV-A71的构成比分别达72.6%(1 775/2 444)和97.0%(127/131).各年龄组EV-A71感染手足口病年均估算发病率随年龄升高呈下降趋势(趋势χ2=990 273.20,P＜0.001),1岁组高,为1 697.67/10万,4岁组低,为705.46/10万.各月份EV-A71感染手足口病年均估算发病率的差异有统计学意义(χ2=401.23,P＜0.001),5月份高,为15.51/10万,7月份低,为9.42/10万.结论广东省EV-A71感染手足口病在各年度流行水平不同,手足口病重症及死亡病例以EV-A71感染为主,1岁儿童是EV-A71感染手足口病高危人群,5月为EV-A71感染手足口病的高峰时间.
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Toll样受体7在肠道病毒71型感染人Jurkat T细胞诱导炎症因子中的作用
目的：研究Toll样受体(TLRs)在肠道病毒71型(EV-A71)感染人T细胞中的表达情况，阐明其在EV-A71致炎症反应机制中的作用。方法 EV-A71毒株由深圳市CDC于2014年从手足口病患儿粪便中分离，接种200μl病毒滴度为103细胞培养半数感染量（CCID50）/ml的病毒液于人Jurkat T细胞，不同感染时间后，采用RT-PCR方法检测TLR1~TLR10 mRNA表达情况；采用Real-time PCR分析TLR7 mRNA变化水平；采用Western blot分析TLR7相关接头分子髓样分化因子(MyD88)表达水平；采用ELISA检测培养上清细胞因子白细胞介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的分泌水平。结果 Real-time PCR检测结果显示，感染6、12、24和48 h ，感染组TLR7 mRNA的相对表达水平分别为1.26±0.15、1.75±0.20、2.26±0.23和3.74±0.62,与对照组差异有统计学意义（t值分别为-2.96、-6.38、-9.57、-7.71，P值均<0.05）；Western blot结果显示，感染24 h和48 h时，感染组MyD88蛋白表达水平与对照组相比分别增加1.34和2.17倍；细胞因子检测结果显示，感染24 h和48 h时，IL-6的分泌水平分别为（302.86±38.11）、（179.70±14.50）pg/ml，高于对照组24 h和48 h的分泌水平[（176.42±9.60）、（179.70±14.50）pg/ml]，差异有统计学意义（t值分别为-5.57、-18.54，P值均<0.05）。48 h感染组TNF-α分泌水平为（100.81±9.81）pg/ml ，高于对照组[（56.19±6.94）pg/ml]，差异有统计学意义（t=-6.43，P=0.003）。结论EV-A71主要通过TLR7被免疫活性细胞识别，进而激活TLR7相关信号通路，诱导产生大量促炎因子来参与感染致炎症反应的病理过程。
关键词： 肠道病毒71型 Toll样受体 人Jurkat T细胞 细胞因子 -
肠道病毒A71型灭活疫苗(人二倍体细胞)上市后安全性观察
目的 评价肠道病毒A71型(EV-A71)灭活疫苗(EV-A71疫苗)(人二倍体细胞)上市后接种的安全性.方法 以2016年9月至2017年12月在浙江省预防接种门诊接种EV-A71疫苗的6～59月龄健康儿童作为研究对象,共20191名.在每剂EV-A71疫苗接种后第4或5天对儿童监护人进行电话随访,记录儿童接种后3d内局部、全身和其他不良反应发生情况,描述不同特征儿童不良反应发生情况.结果 共接种疫苗32230剂次,第1和2剂分别为20191和12039剂次,3 d内不良反应发生率分别为2.045％(413剂次)和1.611％(194剂次).第1和2剂全身不良反应剂次均较多,分别为371和175剂次,发生率分别为1.837％和1.454％;局部不良反应剂次均较低,分别为14和2剂次,发生率分别为0.069％和0.017％.接种后发生的局部不良反应一般症状轻微,出现3级不良反应病例仅2例;全身不良反应中,3级及以上发热病例为39例,占总发热例数的8.2％.局部不良反应中,仅有3例接种部位皮疹和2例瘙痒病例需自购药或门诊治疗,其余无需治疗;全身不良反应中,除5例发热病例外,其余症状均未住院治疗.结论 儿童接种EV-A71疫苗后3 d内不良反应发生率较低,主要为全身不良反应,且预后良好.
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羊栖菜提取物的体外抗病毒作用
目的:探讨羊栖菜提取物的体外抗病毒作用.方法:对羊栖菜的提取物进行了常见的第三类病原体病毒呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16、柯萨奇病毒B2、柯萨奇病毒B3、柯萨奇病毒B5(CVA16、CVB2、CVB3、CVB5)等7种病毒的抗病毒效应研究,显微镜下观察细胞存活率.结果:羊栖菜提取物对上述7种病毒的抑制能力远远优于广谱抗病毒药物利巴韦林,尤以对EV71的抑制效果为明显,抑毒指数极高.结论:羊栖菜提取物对这7种病毒均具有良好的抑制作用,为进一步研究羊栖菜提取物对第三类病原体病毒的广谱抗病毒作用奠定基础.
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甘露消毒丹抗肠道病毒71型作用的体外实验研究
目的：探讨甘露消毒丹体外抗肠道病毒71型(EV71)的作用。方法以病毒唑为对照药，运用细胞培养技术，通过直接抑毒实验、治疗性抑毒实验、预防性抑毒实验、预防＋治疗性抑毒实验4组实验观察甘露消毒丹体外抗EV71的病毒抑制率。结果在直接抑毒实验、治疗性抑毒实验、预防＋治疗性抑毒实验中，甘露消毒丹的EV71病毒抑制率高于病毒唑；在预防性抑毒实验中，甘露消毒丹与病毒唑的EV71病毒抑制率几乎为零。结论甘露消毒丹抗EV71作用强于病毒唑，且其抗EV71效应体现在影响EV71复制的多个环节。
