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小细胞肺癌血清外泌体的分离鉴定及其内RNA表达谱分析
目的 分离、鉴定小细胞肺癌(SCLC)患者血清中外泌体,探讨外泌体内信使RNA(mRNA)和长链非编码RNA(lncRNA)表达谱.方法 利用ExoRNeasy试剂盒分离5例SCLC患者血清外泌体,采用电镜、粒径分析、CD63和CD68两个表面标志物检测鉴定外泌体,提取RNA后,应用二代测序技术进行1例样本的转录组测序,分析mRNA和lncRNA表达谱,并在4例SCLC中采用实时荧光定量PCR验证测序结果.结果 电镜下可见大小均一,形态呈杯口状颗粒,粒径在40～130 nm间,CD63和CD81表达均呈阳性,与外泌体特征吻合.转录组测序共检测出1 822个mRNA和890个lncRNA分子,其中表达丰度高的mRNA依次为血红蛋白β 链、血红蛋白A2和多角体蛋白促进因子结合蛋白,lncRNA依次为ARHGEF26-AS1、WARS2-IT1和DARS-AS1.进一步在其余样本中检测上述lncRNAs,发现其阳性表达率分别为75％、100％ 和50％,表明RNA-seq结果基本可靠.结论 经过形态、粒径大小及特征蛋白分析证实SCLC血清外泌体的存在,其内可检测到大量的mRNA和lncRNA分子,为深入探讨SCLC外泌体内RNA分子的临床应用提供基础数据.
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外泌体对A549细胞增殖、凋亡及迁移功能的影响
目的 观察肺癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响.方法 采用多步超速离心法从肺癌A549细胞的培养液上清中分离出肺癌细胞来源的外泌体,并通过透射电子显微镜观察外泌体形态,利用Western blot 检测其表面跨膜蛋白的表达.采用 MTT 法、ELISA法分别检测外泌体对A549细胞增殖和凋亡的影响;采用Transwell法了解外泌体对A549细胞迁移能力的影响.结果 观察所提取的外泌体大小均匀,形态规则,多为圆形及椭圆形膜性囊泡盘状结构,直径30~100 nm,其外周包被被膜,表面具有丰富的四次跨膜蛋白CD9、CD63等.MTT法提示外泌体对A549细胞具有促增殖作用,且其影响具有时间和剂量依赖特征(P<0.05),ELISA法检测用外泌体共培育后的A549细胞的凋亡情况,结果显示外泌体在一定程度上抑制肿瘤细胞凋亡(F=365.496,P=0.000).Transwell法观察显示,外泌体具有促进A549细胞迁移运动的作用(F=252.005,P=0.000).结论 肺癌细胞来源的外泌体能促进A549细胞增殖、减少其凋亡、增强其迁移运动的能力.
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鼻咽癌细胞来源外泌体的提取和鉴定
目的：从鼻咽癌细胞系CNE－1、CNE－2及SUNE－1中分离外泌体，并对CNE－2所得外泌体进行鉴定。方法使用ExoQuick－TC（ SBI）试剂盒法从鼻咽癌细胞系CNE－1、CNE－2及SUNE－1培养上清液分离出外泌体，使用透射电镜观察其形态特征，BCA法进行蛋白定量，Western blot进行外泌体特异性抗原分子CD63及筏蛋白－1鉴定。结果3种鼻咽癌细胞系培养上清液中均分离出大量泡状物，透射电镜下观察呈圆形的囊泡，直径为40～130 nm，具有完整胞膜。且CNE－2来源的此种泡状物表达外泌体特异性膜筏蛋白－1、CD63。10 mL对数生长期CNE－2培养上清液得到487μg／mL（以蛋白计）的外泌体200μL。结论本实验室保存的3种鼻咽癌细胞系很可能均能产生外泌体，ExoQuick－TC（ SBI）法能够简便快速地从鼻咽癌细胞系中提取到外泌体，不需要超速离心，为鼻咽癌的防治研究提供了新的研究方法和靶点。
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外泌体在心肌缺血中的作用研究新进展
心肌缺血的发病率仍在逐年上升,需要进一步探索新的治疗方案和预警机制.外泌体是细胞内吞泡膜内陷形成的微膜囊泡,富含多种细胞特异性蛋白、核酸及磷脂,作为一种细胞间通信的媒介,通过介导细胞之间的通信以及促进诸如抗原呈递、邻近细胞的反向信号传导等方式产生作用,广泛参与多种疾病的发生、发展过程中.外泌体在心肌缺血的防治方面具有较大的潜力.本文对外泌体在心肌缺血疾病中防治作用的相关研究进展进行综合分析,以期为心肌缺血疾病的防治提供新思路.
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血清外泌体miR-21在肺癌中的表达水平及其诊断效能
目的 探索外泌体miR-21在肺癌患者血清中的表达水平及诊断效能.方法 收集南方医院肺癌患者94例,肺结核患者29例,健康对照26例.纯化鉴定血清外泌体,提取miRNA,进行RT-PCR,比较各组间miR-21表达水平.利用ROC曲线评价外泌体miR-21诊断效能.结果 纯化样品具备已有报道的外泌体的典型特征.外泌体miR-21表达水平在肺癌、肺结核、健康对照3组间存在显著性差异;外泌体miR-21在肺癌组中显著升高,肺结核组显著降低.肺癌组中,早、晚期肺癌患者外泌体miR-21与健康对照间均存在显著性差异.外泌体miR-21的ROC曲线的曲线下面积为0.702,且具有较好的特异性.结论 血清外泌体miR-21具有较高的诊断效能,有望作为诊断标志物,辅助肺癌临床诊断.
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ExoQuick 提取人血清外泌体方法改良及比较
目的:优化经ExoQuick 提取人血清中外泌体(exosome)的方法以获得高质量 exosome,并与超速离心法进行比较.方法:分别采用ExoQuick试剂盒及其改良方法、超速离心法提取人血清exosome.利用透射电镜进行形态学观察;2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)法进行蛋白定量;Western blot检测exosome 表面标志物CD63;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达差异.结果:3种方法均可提取到血清exosome ,电镜下观察到圆形或椭圆形膜性囊泡结构;ExoQuick试剂盒法及其改进方法提取所得样本浓度显著高于传统超速离心法(P < 0.05);SDS-PAGE显示3种方法提取样本蛋白表达强度及丰度存在差异;Western blot表明3种方法提取exosome 均表达其表面特异性标志物CD63, 且含同浓度蛋白的情况下, ExoQuick 试剂盒法及改良法其 CD63 含量明显高于传统超速离心法. 结论:3 种方法均能提取血清中exosome,ExoQuick试剂盒法及改良方法提取exosome 效率更高, 同时改进方法能够有效地去除提取样品中的杂蛋白.
关键词： 外泌体 超速离心法 ExoQuick试剂盒法 方法改良 -
外泌体与胰腺癌化疗耐药的研究进展
外泌体作为肿瘤学目前研究的热点,其参与了胰腺癌的发生、发展,同时促进了肿瘤的侵袭、转移,诱导免疫耐受及化疗耐药形成.外泌体在胰腺癌化疗耐药中的研究对胰腺癌的治疗及预后判断具有重要价值,然而目前针对外泌体与胰腺癌化疗耐药的相关研究较少.本文对外泌体与肿瘤微环境、肿瘤化疗耐药机制,以及其与胰腺癌化疗耐药的新研究进展进行综述.
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干细胞源性外泌体在心血管疾病中的研究进展
近年来,干细胞源性外泌体的心脏保护机制已成为研究热点.越来越多的证据表明干细胞能够释放外泌体,其触发分泌依赖于细胞外刺激,如今外泌体的活性成分正在被广泛地研究.既往研究证实,干细胞源性外泌体具有与干细胞相似的心脏保护功能,能促进血管生成,减少细胞凋亡,减少应激带来的损伤.与干细胞相比,外泌体更稳定,较少引起受体细胞的突变以及免疫排斥反应,有望成为治疗心血管疾病的有效方法.本文对干细胞源性外泌体的生物学功能和分子机制进行了综述.
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外泌体与肺癌关系的研究进展
外泌体是由多种活细胞分泌的具有脂质双分子层和丰富内容物的纳米级囊性小泡.研究表明,肺癌细胞来源的外泌体和体内其他细胞分泌的外泌体对肺癌发生发展过程中细胞的生长、迁移和免疫应答等发挥着重要作用.此外,多项研究提示外泌体具有成为肺癌肿瘤标志物的潜力.因此,基于外泌体与肺癌关系的研究,将为肺癌的诊断和治疗提供新思路.
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间充质干细胞的旁分泌作用在组织损伤修复中的研究进展
间充质干细胞(MSCs)是一种具有多向分化潜能的成体干细胞,在组织损伤修复中发挥免疫调节、细胞保护及抗纤维化的作用.其中MSCs发挥作用的重要机制可能是其旁分泌的各种可溶性细胞因子的参与.本文总结了近几年的研究进展,就MSCs的旁分泌作用在组织损伤修复中的应用及机制作一综述.
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脐带间充质干细胞治疗心肌梗死的研究进展
心肌梗死是全球范围内死亡的主要原因之一,尽管早期的血管重建可以挽救部分缺血心肌,但是坏死的心肌不可再生,需要干细胞的治疗以减少病死率并改善患者预后.脐带间充质干细胞作为有前景的干细胞类型,有较高的分化潜能,具有增殖能力强、免疫源性低等优势.先前研究认为其是通过移植细胞至梗死心肌处,分化为心肌细胞,从而改善心功能.然而近几年的实验表明其可能通过旁分泌机制起作用,其中分离出的外泌体可能是主要的作用因子.本文针对脐带间充质干细胞治疗心肌梗死的机制及临床试验的研究进展进行综述.
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血清外泌体miRNA-193b诊断阿尔茨海默病的价值
目的 探讨血清外泌体miR-193b在阿尔茨海默病(AD)早期诊断的应用价值.方法 以2015年9月至2016年8月就诊于首都医科大学宣武医院的患者为研究对象,使用荧光定量PCR法检测主观认知障碍(SCD)、轻度认知障碍(MCI)、痴呆期(DAT)患者及正常对照组血清外泌体miR-193b水平并进行组间比较,用ROC曲线来评价分析miR-193b对SCD的诊断能力.结果 SCD、MCI和DAT患者血清外泌体内miR-193b水平均低于对照组,且DAT组低于MCI组,MCI组低于SCD组,差异有统计学意义(P<0.05).诊断SCD时,AUC为0.947(95％CI:0.886～0.981),当诊断临界值为1.83时,特异度为94.7％,灵敏度为83.3％.结论 血清外泌体miR-193b有望成为AD早期诊断的生物标志物.
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外泌体lncRNA在肿瘤中的研究进展
外泌体(exosome)是由细胞内多泡体与细胞膜融合后释放到细胞外基质中的一种直径为30～100 nm的膜性囊泡,广泛分布于各种体液中.其含有蛋白质、核酸(mRNA、miRNA、lncRNA、DNA等)和脂质等物质,是细胞间通讯的重要介质.大量研究表明,外泌体lncRNA在肿瘤的发生、发展、侵袭和转移过程中扮演重要角色.本文就外泌体lncRNA在肿瘤发生发展、诊断、治疗及预后中的研究进展进行综述.
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外泌体与多发性骨髓瘤关系的研究进展
外泌体是多种活细胞分泌的囊泡样小体,在血液、唾液等体液中浓度较高,是细胞间传递信息的信使.多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种B细胞来源恶性肿瘤,骨髓中克隆集聚大量恶性浆细胞,可远处转移并形成转移灶.外泌体对MM的疾病进程有较大的影响,且对MM的预后判断具有较好的预示作用.本文就外泌体与MM关系的研究进展作一综述.
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肿瘤来源的外泌体在肿瘤微环境调控作用的研究进展
肿瘤微环境是在肿瘤生长过程中,由肿瘤细胞、基质细胞(包括成肿瘤相关纤维细胞、肿瘤相关巨噬细胞、周细胞、血管内皮细胞及免疫细胞等)和细胞外基质等共同构成的局部动态环境[1].肿瘤微环境在肿瘤发生、发展中的关键作用,是肿瘤的显著特征之一,与肿瘤细胞染色体不稳定性不同,肿瘤微环境中的基质细胞一般都比较稳定,因此成为肿瘤治疗的理想靶点.然而,限于对肿瘤微环境的了解,目前靶向肿瘤微环境成功治疗肿瘤的例子并不多.外泌体(Exosomes)细胞间信息交流功能的发现,使人们对肿瘤微环境的调控认识取得了重大突破,肿瘤来源的外泌体(TDEs)也成了靶向肿瘤微环境治疗肿瘤研究的热点.笔者综述近年来TDEs在肿瘤-基质细胞相互作用的研究进展,为靶向肿瘤微环境治疗肿瘤提供新的依据.
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外泌体在体外对胃癌耐药信息传递作用的研究
目的 探讨外泌体(EXOs)在胃癌细胞间耐药信息传递的作用.方法 选用胃癌敏感细胞株(SGC-7901)及其阿霉素耐药株(SGC-7901/VCR)为模型,用CCK-8绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间;用超速离心法提取SGC-7901/VCR外泌体(VCR/EXO);用透射电子显微镜观察鉴定细胞外泌体形态;运用CCK-8法检测VCR/EXO与SGC-7901细胞共培养后对长春新碱(VCR)的IC50的影响.结果 SGC-7901、SGC-7901/VCR和SGC-7901/VCR/EXO细胞倍增时间分别是(31.54±1.37)h、(47.21±1.65)h和(42.89±1.73)h;透射电子显微镜下,外泌体呈现典型的圆形或椭圆形杯口状结构,直径为40～100hm;与VCR/EXO共培养后敏感细胞株SGC-7901对长春新碱的IC50耐药性升高2.29倍,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胃癌外泌体可能具有传递耐药信息的作用,耐药细胞外泌体能够使敏感细胞获得一定的耐药性.虽然外泌体通过细胞间通讯的具体机制仍不清楚,但抑制外泌体的形成和释放,可能会为胃癌的治疗提供新的策略.
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寄生虫来源的外泌体及其功能研究进展
外泌体(exosomes)是由多种活细胞主动向外分泌的大小均一的囊泡样小体,可携带蛋白质、脂质、核酸等生物活性成分,参与细胞通讯、细胞迁移、免疫反应和血管新生等诸多过程.寄生虫来源的外泌体不仅可以在虫体间传递毒力因子、抗药基因和分化因子,而且可以调控宿主的基因表达和免疫反应,参与寄生虫致病过程.关于寄生虫外泌体的研究已成为一个新兴领域,这为寄生虫病的诊断和治疗带来新的契机.
关键词： 外泌体 寄生虫 宿主 宿主与寄生虫相互作用 -
外泌体在高血压中的研究进展
细胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)是细胞释放到细胞外微环境的膜性囊泡,可携带母细胞来源相关生物分子,介导细胞间信号转导,具有强大的生物学功能.外泌体是小的EVs.大量研究显示,外泌体在动脉粥样硬化 、心肌缺血 、急性冠脉综合征 、心衰等心血管疾病发生发展中具有重要作用.但是,外泌体在高血压病变进展中的作用报道相对较少.本文通过对相关文献进行总结发现,不同来源的外泌体通过影响肾小管上皮细胞钠 、水转运及细胞间信号转导 、心血管重构及血管钙化等,在高血压病变进展中也发挥重要作用.
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脐带间质干细胞来源外泌体的安全性评估
目的 评估脐带间质干细胞(huc-M SC)来源的外泌体作为一种临床应用生物制品的自身安全性.方法 超速离心法分离外泌体,利用蛋白质印迹法(WB)检测外泌体表面标记CD9、CD63,利用纳米颗粒跟踪分析技术(NT A)检测外泌体的大小及浓度.溶血试验、全身过敏性试验和血常规检测验证外泌体的自身安全性.结果 外泌体表达外泌体特异性分子CD9、CD63,外泌体不会引起溶血、全身过敏反应及血常规异常.结论 脐带间质干细胞来源的外泌体具有外泌体的一般特征,且具有一定的安全性,为外泌体今后在临床上的应用提供了实验依据.
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外泌体在肿瘤发生发展中的研究进展
外泌体初被发现时,人们一直认为它是一种细胞的废弃物.直到近几年,人们发现这种纳米级膜泡中含有大量与其来源密切相关的蛋白质、脂质和RNA分子,可以在细胞之间传递,发挥对受体细胞的调节作用.这些发现引起了人们的极大兴趣,使外泌体逐渐成为研究热点之一.随着相关技术的不断改善,越来越多的研究将目光投向了外泌体在肿瘤的发生发展中的作用及机制.肿瘤来源及肿瘤相关外泌体有望代替组织活检,辅助肿瘤的早期诊断、疗效评价和预后分析.此外,外泌体还具有免疫激活、直接诱导肿瘤细胞凋亡等作用.尽管不断有报道发现肿瘤外泌体潜在的抗肿瘤作用,但也有证据表明外泌体抑制抗肿瘤的免疫应答,参与肿瘤侵袭和转移,从而促进肿瘤进展.
