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常见遗传性肾小球疾病的研究进展
遗传性肾小球疾病是肾病领域的重要组成部分。近年来，遗传性肾小球疾病发病率高，预后较差，因此对于遗传性肾小球疾病的研究具有重要的意义。遗传性肾小球疾病包括Alport综合征（ alport syndrome ， AS）、遗传性肾病综合征、薄基膜肾病等。文中主要就AS和遗传性肾病综合征的发病机制、临床特点、诊断及治疗作一综述。
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薄基膜肾病的研究现状
薄基膜肾病(TBMN)是常见的肾病,人群中至少有1%受累.是成人肾小球基膜Ⅳ型胶原α3∶α4∶α5三聚体异常引起的.基因学证据提示,COL4A3或COL4A4基因突变杂合子引起常染色体遗传TBMN,这些突变基因也是导致Alport综合征的原因.作者对TBMN的流行病学、遗传学、病理临床特点、发病机制及诊断治疗作一综述.
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Alport 综合征家系的基因突变及临床表型分析
目的： Alport综合征（ Alport syndrome，AS）是常见的遗传性肾小球疾病，且目前认为有3种遗传方式，文中分析AS家系的基因突变特征，总结临床表型特点。方法应用二代测序外显子序列捕获技术对30例确诊或疑似AS患儿的COL4A3、COL4A4、COL4A5基因进行测序，对其家系成员针对突变位点进行Sanger测序验证；并经Provean对基因突变进行蛋白功能预测。收集临床资料，并结合基因突变结果进行分析。结果30例患儿经基因测序后均可明确诊断为AS。其中常染色体隐性遗传4例，均为男性患儿；X连锁显性遗传26例，男性患儿16例，女性患儿10例。二代测序结果共检测出不同的COL4A3、COL4A4、COL4A5基因突变35个，其中包括错义突变19个、同义突变2个、剪切位点突变4个、无义突变3个、插入突变2个、缺失突变4个、复杂突变1个。通过Sanger测序对家系成员进行验证，结果发现20个突变来源于母亲、8个突变来源于父亲、8个为新生突变、1个先证者纯合基因突变分别来自父母双方、1个突变来源不详。30例患儿均以血尿和（或）蛋白尿起病，17例患儿合并阳性家族史，1例合并高频神经性耳聋，无患儿出现眼部病变及肾功能不全。23例患儿行肾穿刺活检，光镜可见肾小球微小病变为13例，系膜增生性病变10例。电镜下，仅9例表现为肾小球基膜致密层分层撕裂等AS典型改变。结论 AS以X连锁显性遗传多见，致病性突变以错义突变为主。 AS患儿病理多表现为肾小球轻微病变，电镜表现常不典型，肾外表现少见。
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新 X 连锁缺失突变致 Alport 综合征的研究
目的：儿童Alport综合征是导致儿童终末期肾病的主要疾病之一，其诊断及治疗均有局限性。文中旨在对表现为家族性血尿并伴性遗传的肾炎的家系进行临床及基因研究，以发现其可能的致病基因及致病位点。方法对家系中7位患者进行肾穿刺明确病理类型，肾组织及皮肤Ⅳ型胶原染色，外显子测序方法进行基因测序及验证，同时对血及尿液进行分析。结果先证者肾脏病理表现为系膜增生性病变，光镜结果IgM＋，电镜下基膜无增厚或变薄，免疫荧光Ⅳ型胶原免疫荧光无缺失。先证者COL4A521号外显子发生缺失突变（c．1365＿1373del TCCAGGCCC），较之野生型蛋白的1685个氨基酸，突变型蛋白仅有1682个氨基酸。此突变为已知基因新突变。结论首次报道了一个致Alport 综合征新的缺失突变，对指导家族中女性患者再生育时，通过产前基因诊断或胚胎植入前遗传学诊断技术阻断该疾病有重要意义。
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Alport综合征1例
Alport综合征又名眼-耳-肾综合征,其特征表现为遗传性出血性肾炎、神经性耳聋及眼部病变,多于小儿时发病,逐渐发展至青壮年时期.本病临床较少见,现报告1例.
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19例电子显微镜下薄基底膜肾病诊断分析
目的应用电子显微镜对肾脏病理组织肾小球基底膜(GBM)弥漫变薄、厚度＜250nm,进行诊断分析.方法对19例进行肾穿活检术,光镜检查病变轻微、免疫荧光阴性的患儿,进行透射电镜检查,GBM均弥漫变薄,厚度＜250nm,对其中7例有母亲镜下血尿病史者进行皮肤活检,用间接免疫荧光检测皮肤GBM中α1(.Ⅳ)和a5(Ⅳ)链的表达.结果 (1)19例中2例皮肤活检结果阴性证实为Alport综合征(AS);(2)1例因标本脱片先行电镜检查后行免疫组化发现为薄基底膜肾病(TBMN)合并IgA肾病;(3)6例系膜区有电子致密物沉积,结合临床考虑为TBMN合并肾小球肾炎;(4)17例TBMN者GBM均无颗粒状物,而2例AS均有.结论在应用电镜诊断TBMN的同时要注意排除AS,以及同时有合并IgA肾病或肾小球肾炎的可能,以及GBM有颗粒状物时对AS提示作用.
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Alport综合征一家系2例
Alport综合征是常见的遗传性肾病，又称遗传性肾炎或眼-耳-肾综合征，是一种主要表现为血尿、肾功能进行性减退、感音神经性耳聋和眼部异常的遗传性肾小球基底膜疾病。本病多见于儿童及青年，男性发病率高于女性，且病情更为严重［1］，并以反复镜下血尿或肉眼血尿为常见，85％患者伴有蛋白尿，50％患者听力障碍，通常为双侧感音神经性耳聋，也有单侧耳聋者，眼部病变多出现在肾功能损伤之后［2］。随着肾活检的普及和电镜技术的发展，对于本病的早期诊断具有重要意义。笔者遇到2例，报告如下。
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3例家族性Alport综合征遗传咨询和产前诊断的临床病例分析
目的:利用高通量测序(NGS)技术分析家族性Alport综合征(AS)的致病性突变及遗传方式,为咨询者提供准确的遗传咨询并给予产前诊断.方法:对3例家族性AS先证者进行致病性突变分析及家系验证,对遗传咨询者进行产前诊断.结果:3例先证者均发现AS致病基因COL4 A5点突变,突变位点分别位于c2633 G→A、c1769 A→C、c1352G→A,经家系验证均为致病性突变.对3例咨询者胎儿DNA进行Sanger验证(第一代DNA测序技术),提示1例胎儿携带AS致病基因COL4 A5的错义突变,2例未检测出致病性突变.结论:认识AS遗传方式的多样性和遗传特征,强调重视先证者的基因诊断及家系验证,确定遗传方式,建议行遗传咨询并给予生育指导.
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Alport综合征iPSCs差异性表达新小核糖核苷酸的分析
目的 构建Alport综合征(AS)与正常对照者(NC)诱导多能干细胞(iPSCs)新核糖核苷酸(novel microRNA)差异性表达谱,分析其靶基因功能.方法 采用前期工作成功从尿肾状杆细胞诱导成的iPSCs,运用高通量测序平台获得AS与NC的差异性表达谱,使用靶基因预测软件TargetScan进行靶基因预测,靶基因与参考基因比较后,在候选靶基因找到显著富集的GO条目及KEGG通路.结果 在AS与NC中发现49个有意义的差异性表达novel microRNAs,其中33个表达上调,16个表达下调.在GO靶基因富集分析中,靶基因主要富集于生物调节、生物新陈代谢、细胞组成、细胞信号传导、酶催化反应、分子转运等过程.在KEGG通路分析中,靶基因主要参与代谢通路、嘌呤代谢、癌症转录调节等过程.结论 来源于AS与NC的iPSCs存在较大的差异性表达novel microRNA,其靶基因在分子功能、细胞组成、生物过程起着重要作用.这些差异性表达的novel mciroRNAs与靶基因可能是AS发病机制的潜在位点.
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Ⅳ型胶原间接免疫荧光检测在诊断不同遗传型Alport综合征中的应用
目的 探讨Ⅳ型胶原间接免疫荧光检测在诊断不同遗传型Alport综合征中(AS)的应用.方法 通过间接免疫荧光检测皮肤、肾脏基底膜Ⅳ型胶原α3、α5链表达,协助诊断2例AS患儿,并明确其遗传型.结果 例1,男童,肉眼血尿,阳性家族史(其母4岁时出现血尿、蛋白尿持续至今),皮肤基底膜α5链染色阴性,其母皮肤基底膜α5链染色间断阳性,确诊X连锁显性遗传型AS.例2,女童,肉眼血尿,家族史阴性,肾活检病理电镜下基底膜厚薄不均,致密层分层、网状改变.皮肤基底膜α5链染色阳性,肾脏基底膜上α3链呈阴性,α5链在肾小球基底膜呈阴性,包氏囊和肾小管基底膜阳性,确诊常染色体隐性遗传型AS.结论 Ⅳ型胶原间接免疫荧光检测对于诊断AS及确定遗传型具有重要价值,但对染色结果要正确理解.
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血管紧张素转换酶抑制剂治疗Alport综合征的临床分析
目的 探讨血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)及血管紧张素受体阻滞剂(ARB)治疗儿童Alport综合征(AS)的临床疗效及安全性.方法 选取2013年1月至2017年12月在广州市第一人民医院儿科和深圳市人民医院儿科门诊或住院部确诊为AS的患儿共22例,其中4例未规律服药,不纳入本研究,共18例纳入本研究.18例患儿开始均接受ACEI治疗,观察时间为1～5年,若症状未有效控制,则改为ACEI联合ARB治疗,观察时间为1～3年.收集其临床资料和实验室检查结果[包括24h尿蛋白定量(mg/24 h)、尿红细胞计数、血浆清蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、总胆固醇(TC)].结果 18例患儿开始治疗均使用ACEI类药物(福辛普利),治疗2年内,患儿尿蛋白和尿红细胞分别较前下降至47.7％和41.3％,治疗前后差异均有统计学意义(均P ＜0.05),肾功能稳定在正常范围;2年后7例患儿先后出现尿蛋白及尿红细胞上升,肾功能下降,予ACEI联合ARB药物(氯沙坦)治疗,其余患儿在第3、4、5年尿蛋白及尿红细胞无明显变化,肾功能稳定.单独使用ACEI治疗5年,患儿尿蛋白下降至治疗前的47.8％,治疗前后差异有统计学意义(P＜0.05);尿红细胞下降至治疗前的32.0％,治疗前后差异有统计学意义(P＜0.05).7例患儿单用ACEI疗效不佳,改用ACEI联合ARB药物治疗后,第1年患儿尿蛋白及尿红细胞较前下降,肾功能好转,在第2、3年尿蛋白及尿红细胞无明显变化,肾功能稳定.ACEI联合ARB治疗3年,患儿尿蛋白下降至治疗前的42.3％,治疗前后差异有统计学意义(P＜0.05);尿红细胞下降至治疗前的46.9％,治疗前后差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ACEI治疗儿童AS可减轻尿蛋白,有助于延缓肾衰竭,对ACEI治疗效果不佳的患儿,采用ACEI联合ARB治疗,具有一定疗效,ARB可作为单用ACEI疗效不佳的AS的一种辅助手段.
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二代测序诊断散发性Alport综合征1例及文献复习
目的 探讨应用靶序列捕获和二代测序检测COL4A3、COL4A4和COL4A5基因诊断散发性Alport综合征的可行性.方法 收集1例无家族性血尿和慢性肾衰竭家族史、拟诊Alport综合征的9岁男童的临床资料,采集患儿及其父母外周静脉血3 mL,提取基因组DNA,应用靶序列捕获和二代测序检测COL4A3、COL4A4和COL4A5基因及Sanger测序验证,并进行基因突变分析和文献复习.结果 患儿1岁起病,表现为血尿、蛋白尿,间歇性肉眼血尿,逐渐进展至肾病水平蛋白尿;8岁7个月发现双耳感音神经性聋,临床拟诊为Alpoa综合征.在患儿COL4A4基因上发现3578-1G＞A及3967 C ＞T(Q1323X)复合杂合致病突变,3578-1G＞A突变来自父亲,3967 C＞T突变来自母亲.该患儿确诊为常染色体隐性遗传型Alport综合征.结论 对于临床拟诊的散发性Alport综合征,可应用靶序列捕获和二代测序检测COL4A3、COL4A4和COL4A5基因进行明确诊断.
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同一家系男性X连锁Alport综合征患者临床表型异质性分析
目的 分析同一家系男性X连锁Alport综合征患者临床表型的差异,结合文献探讨相同COL4A5基因突变的男性X连锁Alport综合征患者临床表型可能的影响因素.方法 收集同一家系2例男性(Ⅲ1和Ⅱ4)X连锁Alport综合征患者就诊及随访5年的临床资料.应用间接免疫荧光学方法检测皮肤基底膜α5(Ⅳ)链表达.应用反转录-聚合酶链反应直接测序和PCR直接测序方法分别从皮肤成纤维细胞mRNA和外周血基因组DNA水平检测COL4A5基因突变.结果 患者Ⅲ1就诊年龄为14岁,临床表现为镜下血尿,尿蛋白阴性;皮肤基底膜α5(Ⅳ)链染色阴性.随访5年期间,临床表现为持续性镜下血尿,尿蛋白阴性,尿微量白蛋白19.2～ 31.8 mg/L,未治疗.目前该患者19岁,尿检潜血+++,蛋白-;尿微量白蛋白19.20 mg/L;肾功能正常.患者Ⅱ4就诊年龄为29岁,于22岁发现血尿、蛋白尿,曾口服雷公藤治疗1年余,24岁出现“尿毒症”,行血液透析治疗,29岁(就诊前2个月)接受肾移植手术治疗,肾功能等指标良好.随访5年期间,尿常规及肾功能检查均正常.患者Ⅲ1和患者Ⅱ4均检测到COL4A5基因41外显子c.3650G＞ A(p.G1217D)突变.结论 同一家系具有相同COL4A5基因突变的男性X连锁Alport综合征患者在相似年龄段临床表型可截然不同,提示在判断疾病进展和预后时需注意,推测其机制可能是存在体细胞嵌合现象.
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Alport综合征一家系基因分析及胚胎植入前遗传学诊断
目的 分析一个Alport综合征家系的基因突变,并对先证者的体外受精胚胎进行胚胎植入前遗传学诊断.方法 采用高通量测序技术对家系成员的COL4A3、COL4A4和COL4A5基因进行检测.应用比较基因组杂交技术进行胚胎植入前遗传学诊断.结果 测序结果显示家系先证者及其他患者的COL4A5基因存在c.2605G＞A(p.G869R)点突变,COL4A3和COL4A4基因均未检测到突变.经查阅数据库,COL4A5基因的c.2605G＞A错义突变与X连锁显性遗传Alport综合征相关.在先证者的3个体外受精胚胎中,有2个胚胎为男性,1个胚胎为女性.其中1个男性胚胎(C1)染色体拷贝数发生了变异,为45,XY,-16.另1个男性胚胎(C2)染色体拷贝数正常.选择该健康男性胚胎植入,移植后于孕20周羊膜腔穿刺术产前诊断证实为健康胎儿.结论 明确COL4A5基因的c.2605G＞A错义突变为该Alport综合征家系的致病原因.高通量测序技术可作为诊断Alport综合征的一种快速有效的基因检测方法.在先证者明确的前提下可用比较基因组杂交技术进行胚胎植入前遗传学诊断.
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肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法诊断Alport综合征
目的 探讨肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色方法 在Alport综合征(AS)患者诊断中的应用,从而为AS的诊断提供新的技术手段.方法 将对照组及已确诊的X连锁型、常染色体隐性遗传型AS及血尿息儿各2例肾组织分别进行石蜡切片Ⅳ型胶原α3和α5链免疫组织化学染色和冰冻切片的间接免疫荧光染色,比较分析染色结果 .具体方法 根据PV-9000试剂盒提供的实验方法 ,进行染色.采用高压锅加热、胃蛋白酶消化和蛋白酶消化3种抗原修复方法 分别对正常肾组织切片进行抗原修复,并比较其修复效果.免疫荧光染色采用间接免疫荧光染色法.结果 肾小球基底膜Ⅳ型胶原α3、α5链免疫组织化学染色在对照和血尿组为连续的线状阳性;在x连锁显性遗传型女性患儿为间断线状阳性,在男性患儿为阴性;在常染色体隐性遗传患者均为阴性,在肾小囊及部分肾小管基底膜上Ⅳ型胶原α5链为阳性.结果 均与免疫荧光染色法结果 一致.结论 肾脏组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法可用于诊断As,为诊断As提供了新的手段.
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小儿Alport综合征6例临床病理分析
Alport综合征(AIport syndmme,AS)是由Ⅳ型胶原基因突变引起的进行性遗传性肾病,常伴有眼、耳等异常.在持续性血尿患者,尤其是儿童患者中,AS较常见,占11％-27％[1].AS占儿童慢性肾功能衰竭的1.8％-3.0％[2].作者收集6例AS患者,对其临床表现、组织病理形态、常规免疫荧光标记、超微结构观察及IV型胶原表达情况进行分析.旨在提高I临床和病理医生对AS的认识.
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尿常规联合显微镜尿红细胞形态检查在Alport综合征早期诊断中的应用
目的 探讨尿常规联合普通光学显微镜尿红细胞形态检查在早期发现和诊断Alport综合征(AS)家系中的应用.方法 对门诊和住院患儿尿常规检查发现红细胞尿者,在1周内进行1～2次复查,若复查仍为红细胞尿者,取其晨起新鲜尿液10 mL,1 500 r·min-1离心10 min,弃上清液,光学显微镜下观察尿沉渣红细胞形态.如红细胞为严重变形红细胞,诊断为肾性血尿,对其父母行尿自动分析检查及尿红细胞形态检查,有异常者进行家系调查.结果 通过尿常规检查联合普通光学显微镜尿红细胞形态检查,发现7个肾性血尿患儿,经过家系调查初步诊断为X连锁显性遗传AS家系.结论 尿常规联合普通光学显微镜尿红细胞形态检查能够早期发现和诊断AS家系,值得在基层医院应用.
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亲属活体供肾移植治疗Alport综合征(附1例报道并文献复习)
目的:探讨亲属活体供肾移植治疗Alport综合征(AS)的安全性和治疗特点.方法:2004年7月为1例Alport综合征患者施行亲属活体供肾移植手术,术后对供、受者均随访1年7个月,分析亲属供肾移植治疗AS的特点以及评价活体供肾的安全性.结果:供者各项生命指标良好,肝肾功能无明显变化;受者术后肾功能恢复理想,随访期间未见AS复发及其他脏器功能的继续损害.结论:Alport综合征是一种临床上较少见的遗传性疾病.亲属活体供肾移植治疗AS是一种可供移植医生考虑的治疗手段,对于是否存在术后的AS复发尚有待更长期的临床观察.
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Alport综合征肾移植11例报告
目的 评估Alport综合征患者肾移植术后的预后情况.方法 2009年3月至2016年2月间11例Alport综合征患者施行肾移植术,其中男性10例(91％),女性1例(9％),年龄为(23.5±5.1)岁(13～29岁).供者中男性7例(64％),女性4例(36％),年龄为(38.9±12.3)岁(23～54岁).供肾来源亲属为6例(55％).在免疫诱导方案中,使用巴利昔单抗(商品名:舒莱)诱导6例(55％),使用抗胸腺细胞球蛋白(ATG)者2例(18％),未诱导者3例(27％).术后采用他克莫司+吗替麦考酚酯+皮质激素预防排斥反应.移植肾排斥反应的诊断依据移植肾肾穿活检证实.移植肾功能恢复延迟(DGF)定义为术后第1周内需要透析治疗.随访时间中位数为44个月.同时,根据肾移植受者基本信息及供者情况,以1∶2匹配设立非Alport综合征患者对照组(n=22例),比较两组间移植肾恢复及预后情况.结果 Alport综合征患者肾移植后移植肾存活率及人存活率均为100％,移植肾排斥反应发生率为18.2％(2例受者中1例为急性T淋巴细胞介导的排斥反应,1例为慢性体液性排斥反应),DGF发生率为9.1％(1例).有1例患者(9.1％)发生了移植肾多瘤病毒相关性肾病.肾移植术后监测抗肾小球基底膜(GBM)抗体均为阴性(7例),本研究Alport综合征患者肾移植术后均未发生抗GBM肾炎.截止末次随访,平均血肌酐水平为(115.7±32.4)μmol/L.对照组中,移植肾存活率及人存活率均为100％,急性排斥反应发生率为18.2％,DGF发生率为4.5％,与Alport综合征组比较,未见显著性差异.对照组末次随访血肌酐水平为(134.1±76.2)μmol/L.结论 肾移植是Alport综合征尿毒症患者行之有效的治疗手段.肾移植术后发生抗GBM肾炎少见,但仍需密切监测随访.
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X连锁Alport综合征女性患者的临床听力学特征及与基因型的关系
目的:分析国人X连锁Alport综合征女性患者的临床听力学特点, 并探讨其听力表型与基因型之间的关系.方法:总结64例X连锁Alport综合征女性患者的临床资料, 对主要临床听力学表现进行回顾性分析, 并采用检测皮肤成纤维细胞mRNA的方法或外周血DNA扩增直接测序的方法对患者进行IV型胶原α5链基因的检测.按照突变类型分为轻型突变和重型突变, 并进行临床表型和基因型关系分析.结果:64例女性患者均有血尿或蛋白尿, 均行纯音测听、声导抗检查, 其中听力正常者51例, 听力下降者13例, 均表现为轻度或中度双侧对称性感音神经性聋, 均以中频听力下降为主, 听力曲线为槽型.64例患者中52例检测出COL4A5基因突变, 共检出42种突变.听力损失患者中, 除1例12岁外, 其余均≥35岁.25例≥35岁患者中, 轻型突变13例 (10例听力正常, 3例听力轻度下降), 重型突变12例 (6例听力正常, 6例听力轻中度下降).随访≥2年者26例, 其中7例听力呈下降趋势, 均为随访2年者, 每年下降约5dB, 余听力无明显变化.结论:国人X连锁Alport综合征女性患者, 早年出现血尿或蛋白尿, 多于中年后开始出现迟发进展性听力损失, 多为轻中度, 曲线为槽型;听力损失发生时间较男性患者晚, 并且听力损失严重程度较男性轻;听力表型与基因型之间未发现明显相关性.
