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发根DNA检测Alport综合征COL4A5基因突变
目的:通过发根DNA提取分析Alport综合征(Alport syndrome,AS)一家系中COL4A5基因突变,试图通过该方法简化AS家系的收集工作和推广COL4A5基因检测. 方法:通过PCR和直接测序的方法,对先证者外周血DNA COL4A5基因所有51个外显子及其相邻内含子的DNA序列进行检测.发现突变位点后,提取6份该家系成员发根部DNA进行该突变位点检测. 结果:①成功地从发根部提取DNA,进行了PCR和直接测序.②在COL4A5基因第50号外显子4 944位点发现一错义突变,碱基G被T取代,导致其编码1648位氨基酸由色氨酸变为半胱氨酸(4 944G>T W1648C),男性患者为纯合突变,女性患者为杂合突变,正常家系成员和92例对照中均未发现此位点异常,说明W1648C为引起该家系临床病变的突变位点,并非多态性位点.在性连锁Alport综合征中, COL4A5基因此突变位点为首次报道. 结论:通过毛发收集、DNA提取,可使家系收集工作更为简便易行,可帮助未开展基因检测的地区进行基因诊断.本研究通过发根DNA提取检测Alport综合征一家系中新的COL4A5基因突变,遗传方式符合性连锁显性遗传.
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肾小球基膜Ⅳ型胶原亚链定量分析在Alport综合征诊断中的意义
目的:通过对肾组织Ⅳ型胶原亚链免疫组化染色未见异常的Alport综合征(AS)患者进行Ⅳ型胶原亚链构成比的定量分析,探讨不典型AS的发病机制,提高AS的诊断水平.方法:选取临床、病理及电镜符合AS、但肾组织Ⅳ型胶原亚链染色未见异常的患者14例,运用免疫荧光双套色法,通过激光共聚焦荧光显微镜定量分析肾小球基膜(GBM)Ⅳ型胶原中α3链、α5链的含量.并选取4例薄基膜肾病及10例肾活检病理诊断为轻度系膜增生性病变(MsPGN)患者的组织切片作为对照.结果:入选的14例患者在电镜下皆以GBM病变为主.通过定量分析GBMⅣ型胶原亚链构成比,我们发现,AS患者GBM α3链和α5链在Ⅳ型胶原总体分布中所占的比例明显减少(P＜0.05,P＜0.01 vsMsPGN).根据肾组织Ⅳ型胶原亚链构成比的不同,可以将这14例患者分为三组:①2例患者α5链/Ⅳ型胶原比值降低,α3链/Ⅳ型胶原比值正常.这组患者男女各1例,无明确家族史;②9例患者α3/Ⅳ及α5/Ⅳ比值同时降低.这组患者女性发病明显多于男性,家系分析显示遗传方式为X性连锁显性遗传.③3例患者α3/Ⅳ及α5/Ⅳ比值皆正常.这组患者男性2例,女性1例.家系分析显示遗传方式亦为X性连锁显性遗传.我们还发现,蛋白尿的发生与α5链/Ⅳ型胶原比值的降低程度密切相关,存在蛋白尿的患者其α5链/Ⅳ型胶原比值(0.72±0.11)明显低于无蛋白尿的患者(0.96±0.094)(P＜0.01).与AS患者不同的是,4例薄基膜肾病患者无一例出现α3链/Ⅳ型胶原和α5链/Ⅳ型胶原比值的降低.结论:对于部分AS患者,虽然肾组织Ⅳ型胶原亚链染色未见异常,但Ⅳ型胶原各亚链的构成比已发生变化,表现为Ⅳ型胶原α3链和(或)α5链在Ⅳ型胶原总体分布中的比例降低.该发现不仅加深了我们对AS患者发病机制的认识,同时也表明对肾小球基膜Ⅳ型胶原亚链构成比进行定量分析是诊断不典型AS的一个重要手段.
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Alport综合征Ⅳ型胶原分布特点及其与临床表型的联系
目的:分析总结我国Alport综合征(AS)患者的临床表现特点,探讨Ⅳ型胶原α链分布特点与遗传方式及临床表型之间的联系.方法:收集87例临床病理诊断为AS患者的临床资料.采用特异性Ⅳ型胶原α3和α5链NC1区域的单克隆抗体,对这些患者肾组织及皮肤进行Ⅳ型胶原α链间接免疫荧光染色.结果:①该组患者以镜下血尿合并蛋白尿为常见首发症状.57.7%的患者存在听力异常,24.3%的患者存在眼部异常.②根据Ⅳ型胶原α链免疫荧光结果进行分析,有55例遗传方式为X-性连锁显性遗传(XLAS),发生率63.2%;8例为常染色体隐性遗传(ARAS),发生率9.2%.其余24例患者(27.6%)尚不能根据Ⅳ型胶原α3、α5链的缺失来判断其遗传方式.③XLAS组患者临床表型较ARAS组患者为重,且XLAS组患者男性病情重于女性.④典型XLAS组患者其疾病严重程度及临床预后均重于非典型XLAS组患者.结论:①我国AS遗传方式表现为XLAS者为63.2%,ARAS者为9.2%.有27.6%临床病理诊断为AS患者其Ⅳ型胶原α链分布正常.XLAS不同性别患者以及XLAS和ARAS患者间在临床表现和预后上存在明显差异.②AS肾组织Ⅳ型胶原α链的分布方式及表达程度不仅能帮助确定遗传方式,而且能为临床判断患者病情程度、预后和进一步研究其基因突变位点,进行基因诊断和治疗提供线索.③Ⅳ型胶原α链免疫荧光染色是确诊AS的重要指标.
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伴食管平滑肌瘤的Alport综合征基因突变特征
目的:认识我国伴食管平滑肌瘤的Alport综合征患者的基因型特点.方法:对1例中国汉族伴食管平滑肌瘤的Alport综合征男性患者应用PCR方法扩增COL4A5基因的外显子1、2和COL4A6基因的外显子1(部分序列)、2及3,同时应用Southern杂交的方法进行DNA重组分析.结果:经PCR扩增和Southern杂交的方法揭示患者具有累及COL4A5和COL4A6两个基因5'端的大片段缺失,缺失范围可能至少包括COL4A5基因的外显子1、COL4A6基因的外显子1～2以及两基因间的启动子,估计此大片段缺失的断点在COL4A5基因的内含子1至COL4A6基因的内含子2中.结论:首次发现中国汉族中伴食管平滑肌瘤的Alport综合征患者具有COL4A5和COL4A6两个基因的缺失突变,该突变有可能累及COL4A6基因的内含子2.同时亦提示具有COL4A5和COL4A6两个基因突变伴弥漫性平滑肌瘤表型的Alport综合征患者与COL4A6基因突变位置有关.
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中国Alport综合征表型和基因型特征
目的:分析并探讨我国Alport综合征(AS)患者临床表型和基因型特征.方法:以50例确诊为AS的患者(男32例,女18例;年龄1～30岁,平均10岁)及部分家系成员的主要临床表现、肾功能检查结果、家系调查情况、肾活检、以及肾和皮肤活检组织的基膜α(Ⅳ)链的表达作为临床表型分析素材.应用PCR-SSCP和PCR、直接DNA测序的方法筛查、分析基因突变.结果:本组病例显示AS患者几乎均表现有血尿(96%),多数(84%)血尿为肾小球性;伴有蛋白尿或肾病水平蛋白尿的患者分别为82%和22%.检测到感音神经性耳聋和眼部病变的患者较国外报道相对低(31%和16%vs50%和15%～30%).多数AS(82%)属于青少年型.94%的皮肤活检α5(Ⅳ)链染色支持X连锁型AS诊断.COL4A5基因分析显示以基因小突变为主;1例AS患儿基因为大缺失,而且缺失涉及COI4A5和COL4A6两个基因,但不伴弥漫性平滑肌瘤.结论:认识我国AS临床表型和基因型特征有助于今后提高并纠正我们对AS认识、诊断乃至治疗水平.
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Alport综合征基膜Ⅳ型胶原α链表达异常的临床意义
目的:了解基膜Ⅳ型胶原α链在不同遗传类型Alport综合征(AS)、薄基膜肾病、家族性IgA肾病中分布特点,探讨其与上述疾病的关联和临床意义. 方法:运用针对Ⅳ型胶原不同α链单抗,采用间接免疫荧光法(iIF)检测皮肤和肾组织基膜Ⅳ型胶原α1、3、5链分布. 结果:8例男性X伴性显性AS(XD-AS)患者α5(Ⅳ)链在皮肤和(或)肾组织基膜上IF为阴性,肾组织α3(Ⅳ)链IF亦呈阴性.4例女性XD-AS患者表皮基膜上α5(Ⅳ)链IF呈不连续沉积.4例XD-AS女性、1例常染色体隐性遗传AS和所有常染色体显性遗传AS、薄基膜病、IgA肾病患者肾组织和皮肤IF均为阳性,与正常对照相同.XD-AS患者中,皮肤α5(Ⅳ)链表达程度越低,发病年龄和出现肾衰的时间越早,听力累及频率范围越广,表现前锥形晶体越多. 结论:不同遗传方式的AS Ⅳ型胶原α链表达异常存在显著差异,不同组织Ⅳ型胶原α链检测对AS诊断、鉴别诊断和遗传方式判断具有重要意义,α5(Ⅳ)链表达缺失的程度与疾病严重程度相关.
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薄基底膜肾病患者基底膜Ⅳ型胶原α链的表达
目的:检测薄基底膜肾病(TBMN)患者基底膜中Ⅳ型胶原α链的表达,探讨其发病机制;并与Alport综合征(AS)比较,为鉴别TBMN和AS提供帮助. 方法:用抗Ⅳ型胶原不同α链的单克隆抗体,采用链菌素亲生物素-过氧化酶连接法检测了6例TBMN、3例X连锁型AS男性患儿及2例正常对照肾脏组织基底膜中Ⅳ型胶原α1、α3、α4和α5链的表达;采用间接免疫荧光法检测了3例TBMN、4例X链锁型AS男性患儿及4例正常对照皮肤基底膜中α1(Ⅳ)和α5(Ⅳ)链的表达. 结果:TBMN患儿肾小球基底膜中Ⅳ型胶原α1、α3～5链表达同正常,均为沿基底膜连续线状沉积.X连锁型AS男性患儿肾小球基底膜显示Ⅳ型胶原α1链染色阳性,而α3～5链染色均为阴性.TBMN、AS患儿及正常对照皮肤基底膜中α1(Ⅳ)链染色均为沿基底膜连续线状沉积;而α5(Ⅳ)链染色仅在AS为阴性,在TBMN和正常对照均为连续线状沉积. 结论:TBMN患儿基底膜中α(Ⅳ)链表达不同于AS.
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Ⅳ型胶原α3、α5链免疫组化检测在遗传性肾炎诊断中的意义
目的:分析肾组织Ⅳ型胶原α3、α5链的免疫荧光染色在Alport综合征(AS)诊断中的意义. 方法:采用特异性抗Ⅳ型胶原α3和α5链NC1区域的单克隆抗体,对4例正常人及43例临床疑诊为遗传性肾炎患者的肾脏组织进行了间接免疫荧光染色.结果:抗α3和α5链的抗体荧光染色在10例患者的肾组织中分布异常,并呈现三种类型.在这10例患者中,根据α3和α5链在肾组织中异常分布的特点,对其遗传方式进行分析发现其中7例为X连锁显性遗传,3例为常染色体隐性遗传. 结论:肾活检组织Ⅳ型胶原α3和α5链的免疫荧光染色,在遗传性肾炎,特别AS诊断及其遗传方式分析上具有重要意义.
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女性Alport综合征
过去数十年中女性Alport综合征(Alport syndrome,AS)患者的诊断与评估未被重视.X染色体连锁AS(XLAS)占AS的绝大多数,其中XLAS女性发病率高于男性,其临床表型多样性、肾外特征性改变少且轻、肾脏病理改变不典型,成年女性并发症多,所以漏诊与误诊的机会多于男性患者.本文重点阐述女性XLAS患者临床表型多样性的机制、肾脏损害的临床与病理特征及诊断依据,同时讨论了女性XLAS基因携带者作为肾移植供者是否合适等问题,旨在促使临床医生重视女性AS,减少临床漏诊与误诊,为XLAS家族亲属间肾移植提供参考.
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遗传性肾小球疾病
遗传性肾小球疾病是一组具有基因突变背景,主要累及肾小球的疾病.除累及肾脏外,常伴身体其他器官受累.狭义的遗传性肾炎指Alport综合征(AS),广义的还包括Fabry病、先天性肾病综合征、薄基膜肾病,指甲-髌骨综合征,部分或全身脂肪发育不良等遗传性肾小球疾病.
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Ⅳ型胶原α链异常与Alport综合征及薄基膜肾病
Alport综合征(Alport Syndrome,AS)和薄基膜肾病(Thin Basement Membrane Nephropathy,TBMN)系两种遗传性疾病,且都与基膜(Basement Membrane,BM)病变有关,临床并非少见.AS主要表现为持续性镜下血尿或肉眼血尿或进行性肾功能恶化;可伴有肾外病变如神经性耳聋、前房晶体病变等.典型电镜改变为肾小球基膜(GBM)弥漫性厚薄不均,局部有分层、断裂现象.TBMN以往又称为良性家族性血尿(Benign Familiar Hematuria,BFH).临床主要表现为镜下血尿,高血压、蛋白尿少见,一般肾功能正常,预后好,但个别患者在长期随访中出现了轻中度肾功能不全[1];患者无肾外表现,电镜下GBM弥漫性变薄是TBMN的特征性改变.
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Ⅳ型胶原相关肾病:从薄基膜肾病、Alport综合征到局灶节段性肾小球硬化
新一代测序技术(NGS)的不断发展,推动了遗传性肾脏病致病基因定位及疾病谱的重新定义,其中Ⅳ型胶原(α3/α4/α5链)相关肾病的临床表型谱取得新的进展.新多项研究发现COL4A3/COL4A4是家族性局灶节段性肾小球硬化新的致病基因,本文将综述及讨论Ⅳ型胶原α3/α4/α5链(COL4A3/COL4A4/COL4A5,COL4A3-5)相关肾病的临床疾病谱.
关键词： Ⅳ型胶原 局灶节段性肾小球硬化 Alport综合征 薄基膜肾病 -
从相关基因突变再看Alport综合征和薄基膜肾病
Alport综合征(Alport syndrome,AS)和薄基膜肾病(thin basement membrane nephropathy,TBMN)是两种均表现为慢性血尿的遗传性肾小球基膜(glomeru-lar basement membrane,GBM)疾病,人们对前者的认识较后者早约40年[1～3].
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Alport综合征基因治疗研究现状
基因治疗是指在分子水平纠正疾病的基因缺陷,恢复或重建细胞和组织的功能,达到治疗疾病的目的.理论上可行的方法主要有基因转移和基因修复(通过同源重组或错配修复).现阶段有关基因修复的研究仅限于体外细胞实验,用于基因治疗实验的方法仍然集中在基因转移.
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Goodpasture综合征和Alport综合征的分子基础--Ⅳ型胶原家族
肾小球基膜(GBM)是肾脏滤过屏障的重要组成成分,既往研究发现,Alport综合征(AS)、Goodpasture(GP)综合征和糖尿病肾病等肾脏疾病存在GBM异常.
关键词： Goodpasture综合征 Alport综合征 分子基础 -
皮肤紫癜伴蛋白尿和镜下血尿
病历摘要病史患者男性,20岁,因四肢皮疹发作1次伴尿检异常2月,于2008-07-14入院.今年5月中旬患者出现双侧咽痛伴发热,体温高达39℃,接受抗生素(青霉素800万u/d×7天等)治疗,患者咽痛消失、体温正常.5月5日进食"海鲜味薯片"后出现四肢对称性针尖大小皮疹,压之不褪色,服用抗过敏药(具体不详)后三天消退.在兰州市第二医院查尿蛋白1.96 g/d、红细胞2～5/HP,Alb 35.5 g/L,Glo 25.8 g/L,BUN 8.73mmol/L,SCr 99.9μmol/L,UA 462 μmol/L,抗"O"正常,血沉正常,续以泼尼松60 mg/d×17天、厄贝沙坦、潘生丁及中药治疗,至6月底复查尿蛋白2+,于7月初至我院就诊,查尿蛋白4.19 g/24h,尿沉渣RBC 81万/ml,多形,.Alb 40.1 g/L,Glo 19.5 g/L,BUN 5.85 mmol/L,SCr 80.4 μmol/L,UA 442μmol/L,为进一步诊治入院.病程中无水肿、肉眼血尿、夜尿增多、高血压及肾功能损害,无关节疼痛、腹痛、腹泻、黑便、口腔溃疡,食欲、睡眠正常,尿量正常,大便通畅.
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Ⅳ型胶原分子结构的研究与A1port综合征
Alport综合征(Alport syndrome,AS)为Ⅳ型胶原α链的基因突变导致的基膜损伤,临床表现为血尿、肾功能进行性减退的遗传性肾炎,常伴有感音神经性耳聋和眼部异常t [1,2].Ⅳ型胶原是哺乳动物基膜的主要成分,在肾小球基膜(glomerular basementmembrane,GBM)中含量丰富.Ⅳ型胶原分子由内皮细胞和上皮细胞分泌至细胞外后,自我结合形成多边形Ⅳ型胶原网,再与层粘连蛋白网、巢蛋白、蛋白聚糖及其他糖蛋白分子一起构成基膜.
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膜性肾病合并Alport综合征
报道1例中年男性患者临床为肾病综合征伴血压升高,无听力及视力的下降,无肾脏病家族史;肾活检光镜及常规免疫荧光符合肾小球膜性病变,但肾间质见簇状分布的泡沫细胞,进一步行肾组织Ⅳ型胶原染色及电镜检查,终明确合并Alport综合征.
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Alport综合征合并过敏性紫癜性肾炎
病史摘要病史男性,20岁,因"四肢皮疹发作,尿检异常2月"于2008-07-14入院.2008年5月中旬患者自觉咽痛,继之高热(39℃),自服抗生素(具体不详)并静脉滴注青霉素800万U/d,治疗一周,咽痛消失、体温正常.然而患者自觉双侧腰痛,左侧为著,查尿蛋白1.96g/d、隐血3+,红细胞2～5/HP,而抗"O"及血沉均正常,未发现肾功能改变(BUN 8.73 mmol/L,SCr99.9μmol/L.,uA 462 μmol/L),血清白蛋白降低35.5 g/L,球蛋白25.8 g/L,疑"慢性肾炎",再次予青霉素(800万U/d,连续一周),同时口服泼尼松(60 mg/a×17天)、厄贝沙坦(150mg/d)、潘生丁(150 mg/d)、中药煎剂(主要成份为小蓟、藕节、黄芪、山药、防风、桑寄生)及火把花根片治疗.6月底复查尿蛋白不减,镜下血尿持续.
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Alport综合征的眼部临床表现及iTrace分析
目的 分析Alport综合征患者的眼部病变特征及评估Tracey波前相差分析(iTrace)对发现前锥晶体的有效性.方法 回顾性分析Alport综合征35例患者的临床资料,并进行iTrace分析.结果 35例患者中,眼部异常者14例(40％),同时具有典型Alport综合征眼部表现,包括前锥晶体和黄斑斑点状改变者5例(14.29％).iTrace分析提示,前锥晶体主要表现为晶体的不规则散光.结论 眼科检查对诊断Alport综合征提供帮助,iTrace分析是评估前锥晶体的一种有效检查方法.
关键词： Alport综合征 Tracey波前相差分析
