首页 > 文献资料
-
不同遗传型Alport综合征的产前基因诊断
Alport综合征(Alport syndrome,AS)是常见的遗传性肾脏疾病之一,临床主要表现为血尿和进行性肾功能减退,伴随感音神经性耳聋和眼部异常等.AS是一种遗传异质性疾病,目前已证实存在3种遗传方式:X连锁显性遗传(Xlinked dominant Alport syndrome,XLAS)为常见,约占80%～85%,因COL4A5基因突变或COL4A5和COL4A6两个基因突变所致;常染色体隐性遗传(Autosome recessive Alport syndrome,ARAS)约占15%,常染色体显性遗传(Autosome dominant Alport syndrome,ADAS)非常少见,二者均因COL4A3或COL4A4基因突变所致[1-2].我们继往研究中对不少AS家系进行了基因诊断[3],并在国内开展了AS的产前基因诊断[4].在此,我们结合临床实施的几例不同遗传型AS的产前基因诊断家系,探讨此类疾病的产前基因诊断方法以及需要注意的问题.
-
多重竞争性荧光PCR检测X连锁Alport综合征大片段缺失突变
目的:探讨多重竞争性荧光PCR在X连锁Alport综合征分子诊断中的应用.方法:选择20例在北京大学第一医院确诊且未进行基因诊断的X连锁Alport综合征患者为研究对象,同时选择2例经多重连接依赖性探针扩增技术检测到COL4A5基因大片段缺失突变的患者作为阳性对照和1例经肾活检组织电子显微镜检查证实非Alport综合征的男性作为正常对照.首先应用多重竞争性荧光PCR技术扩增COL4A5基因53个外显子和4个参照基因,对于检测到COL4A5基因缺失第1外显子者,进而应用相同技术扩增COL4A5基因外显子1～4、COL4A6基因外显子1～4、两基因共用启动子以及3个参照基因;对于检测到拷贝数缺失者,应用琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增后的PCR产物或直接测序.结果:两例阳性对照应用多重竞争性荧光PCR技术检测到的COL4A5基因缺失突变与应用多重连接依赖性探针扩增技术检测到的COL4A5基因缺失突变一致.20例患者中6例(30％)明确了基因型,其中2例患者具有累及COL4A5和COL4A6两个基因5'端的大片段缺失,2例患者具有累及COL4A5基因30个外显子以上的大片段缺失,1例患者具有累及COL4A5基因至少1个外显子的大片段缺失,1例患者具有COL4A5基因缺失13个碱基的小的缺失突变,未检测到重复突变.结论:多重竞争性荧光PCR技术可用于检测X连锁Alport综合征大片段缺失突变,是对该病分子诊断检测方法的重要补充.
-
多重连接依赖性探针扩增技术在X连锁Alport综合征基因诊断中的应用
目的 应用多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术检测COL4A5基因,为X连锁Alport综合征基因诊断探索新的方法.方法 对在北京大学第一医院临床诊断的,并且行COL4A5基因检测存在大片段缺失突变的3例X连锁Alport综合征患者,采用反转录(RT)-PCR、PCR和MLPA三种方法检测分析COL4A5基因突变.结果 患儿1发现COL4A5基因连续缺失第22、23、24外显子；患儿2发现COL4A5基因缺失第30外显子；患儿3发现缺失COL4A5基因第1、2外显子和COL4A6基因第1、2外显子.这3个大片段缺失突变均为国内外首次报道新的突变.RT-PCR、PCR和MLPA方法结果一致,相互验证补充.结论 MLPA可以用于检测COL4A5基因大片段缺失突变,为X连锁Alport综合征基因诊断提供了一种新的方法.
关键词： 肾炎 遗传性 突变 COL4A5基因 多重连接依赖性探针扩增 -
Alport综合征一个家系基因分析研究
目的 研究Alport综合征(AS)致病基因COL4A5突变情况.方法 收集并抽提2005年上海地区AS患者及其所有家庭成员29例的基因组DNA,并根据致病基因设计相关引物,分别检测患者和100个正常人血液DNA以及患者皮肤的cDNA碱基序列.结果 发现AS基因组DNA的COL4A5基因c.609 +5G＞A高度保守区存在5G＞A突变,而100个正常人均无该突变,该位点尚未见文献报道；同时发现患者COL4A5基因mRNA不能正常翻译.而COL4A5基因已报道的位点,并未在本家系中发现.结论 AS患者c.609 +5G高度保守存在5G＞A突变,证实该变异可能使COL4A5基因剪接发生错误而导致基因mRNA不能正常翻译.
-
毛囊COL4A5基因扩增的方法学研究
目的 探讨毛囊基因组在COL4A5基因扩增中的应用.方法 对32例慢性肾病患者和12例健康体检者进行毛囊和全血COL4A5基因扩增,产物测序,比较两者扩增产物,并将测序结果与NCBI公布的标准序列进行比对.结果 毛囊与全血COL4A5基因扩增产物长短一致,测序结果与NCBI公布的COL4A5基因标准序列完全相符,且扩增效率无显著性差异(P＞0.05).结论 毛囊COL4A5基因扩增效果与全血等同.
-
发根DNA检测Alport综合征COL4A5基因突变
目的:通过发根DNA提取分析Alport综合征(Alport syndrome,AS)一家系中COL4A5基因突变,试图通过该方法简化AS家系的收集工作和推广COL4A5基因检测. 方法:通过PCR和直接测序的方法,对先证者外周血DNA COL4A5基因所有51个外显子及其相邻内含子的DNA序列进行检测.发现突变位点后,提取6份该家系成员发根部DNA进行该突变位点检测. 结果:①成功地从发根部提取DNA,进行了PCR和直接测序.②在COL4A5基因第50号外显子4 944位点发现一错义突变,碱基G被T取代,导致其编码1648位氨基酸由色氨酸变为半胱氨酸(4 944G>T W1648C),男性患者为纯合突变,女性患者为杂合突变,正常家系成员和92例对照中均未发现此位点异常,说明W1648C为引起该家系临床病变的突变位点,并非多态性位点.在性连锁Alport综合征中, COL4A5基因此突变位点为首次报道. 结论:通过毛发收集、DNA提取,可使家系收集工作更为简便易行,可帮助未开展基因检测的地区进行基因诊断.本研究通过发根DNA提取检测Alport综合征一家系中新的COL4A5基因突变,遗传方式符合性连锁显性遗传.
-
肾病综合征、低钾、代谢性碱中毒
64岁女性,四肢乏力4年,水肿1周入院.临床表现大量蛋白尿,低白蛋白血症,伴低钾、低镁血症,代谢性碱中毒,低尿钙;血浆肾素活性增高,高醛固酮血症;肾活检病理提示肾小球足细胞病变,一处可疑肾小球旁器肥大.基因筛查显示COLAA5基因突变(823C＞G)伴UMOD基因突变(1653G＞C),而SLC12A1、KCNJ1、CLCNKB和BSND及SLC 12A3基因均未见异常.综合患者临床表现与实验室检查后诊断为肾小球足细胞病伴失盐性肾小管疾病.
-
新 X 连锁缺失突变致 Alport 综合征的研究
目的：儿童Alport综合征是导致儿童终末期肾病的主要疾病之一，其诊断及治疗均有局限性。文中旨在对表现为家族性血尿并伴性遗传的肾炎的家系进行临床及基因研究，以发现其可能的致病基因及致病位点。方法对家系中7位患者进行肾穿刺明确病理类型，肾组织及皮肤Ⅳ型胶原染色，外显子测序方法进行基因测序及验证，同时对血及尿液进行分析。结果先证者肾脏病理表现为系膜增生性病变，光镜结果IgM＋，电镜下基膜无增厚或变薄，免疫荧光Ⅳ型胶原免疫荧光无缺失。先证者COL4A521号外显子发生缺失突变（c．1365＿1373del TCCAGGCCC），较之野生型蛋白的1685个氨基酸，突变型蛋白仅有1682个氨基酸。此突变为已知基因新突变。结论首次报道了一个致Alport 综合征新的缺失突变，对指导家族中女性患者再生育时，通过产前基因诊断或胚胎植入前遗传学诊断技术阻断该疾病有重要意义。
-
二代测序诊断散发性Alport综合征1例及文献复习
目的 探讨应用靶序列捕获和二代测序检测COL4A3、COL4A4和COL4A5基因诊断散发性Alport综合征的可行性.方法 收集1例无家族性血尿和慢性肾衰竭家族史、拟诊Alport综合征的9岁男童的临床资料,采集患儿及其父母外周静脉血3 mL,提取基因组DNA,应用靶序列捕获和二代测序检测COL4A3、COL4A4和COL4A5基因及Sanger测序验证,并进行基因突变分析和文献复习.结果 患儿1岁起病,表现为血尿、蛋白尿,间歇性肉眼血尿,逐渐进展至肾病水平蛋白尿;8岁7个月发现双耳感音神经性聋,临床拟诊为Alpoa综合征.在患儿COL4A4基因上发现3578-1G＞A及3967 C ＞T(Q1323X)复合杂合致病突变,3578-1G＞A突变来自父亲,3967 C＞T突变来自母亲.该患儿确诊为常染色体隐性遗传型Alport综合征.结论 对于临床拟诊的散发性Alport综合征,可应用靶序列捕获和二代测序检测COL4A3、COL4A4和COL4A5基因进行明确诊断.
-
X连锁显性遗传性肾炎一家系相关基因排除定位分析
目的研究我国X连锁显性遗传性肾炎一家系(又名Alport综合征,Alport's syndrome,AS)编码Ⅳ型胶原α5链的COL4A5基因突变特点.方法提取35例现存家系成员基因组DNA,根据COL4A5基因中与外显子相邻的内含子序列设计引物,分别作DNA聚合酶链式反应(PCR),将该基因所有51个外显子扩增.以琼脂糖凝胶电泳鉴定产物,作单链构象多态性(SSCP)分析检测PCR产物,对迁移率异常者进行DNA直接测序.结果PCR-SSCP分析发现17个外显子PCR产物单链DNA迁移率异常,通过DNA直接测序发现9个外显子可疑突变,但反向测序均未能证实.结论该家系COL4A5基因外显子未发生突变,其突变可能发生在该基因内含子或其它致病基因.
-
性连锁Alport综合征COL4A5基因突变检测
目的检测16个家系20例性连锁Alport综合征患者COL4A5基因突变.方法采用PCR-变性凝胶梯度电泳(DGGE)-直接测序法检测患者COL4A5基因中30个外显子及其相邻内含子区域(外显子1～25、31、32、41、50、51),另选取100例正常人外周血DNA作为对照.结果共发现4种突变,包括1种位于1号外显子上的无义突变(266C→T谷氨酰胺22终止密码),1种位于31号外显子上的错义突变(2757G→T甘氨酸852缬氨酸),以及2种分别位于1、25号内含子区域的剪接突变(283+1G→T、2150+1G→T).结论COL4A5基因为性连锁Alport综合征的致病基因,突变类型多样,尚未发现热点突变.类似于外显子突变,内含子突变同样具有致病意义,患者临床症状典型.查阅基因库,此4种突变均为首次报道.
关键词： 性连锁Alport综合征 COL4A5基因 Ⅳ型胶原 肾小球基底膜 -
Alport综合征一家系中新的COL4A5基因突变
目的了解我国X伴性显性(XD)遗传Alport综合征(AS)中COL4A5基因突变特点.方法应用聚合酶链反应(PCR)-变性梯度凝胶电泳(DGGE)和直接测序的方法,对来自7个XD-AS家系10个成员和100个正常人外周血DNA标本进行了COL4A5基因43号外显子的检测.结果在一个家系中发现4142C→T(Pro1314Ser)的转换突变,先证者与其弟、其母均发现有此异常.结论表明该突变为一遗传性突变.查阅基因库,未发现相同突变报道.
-
局灶节段性肾小球硬化一家系COL4A5基因突变研究
目的 分析1个局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)家系的遗传学特征,探讨Ⅳ型胶原基因突变与FSGS表型的相关性.方法 应用高通量测序方法对1例经临床与肾脏病理诊断为FSGS先证者的相关致病基因进行高通量测序,对发现的疑似致病性突变在先证者及其家系进行Sanger测序验证,并按ACMG指南分析突变的致病性.结果 家系先证者的COL4A5基因第28外显子存在1个c.2215C＞G(p.Pro739Ala)半合子错义突变,先证者母亲为c.2215C＞G杂合突变携带者.c.2215C＞G突变为FSGS的可能致病突变.结论 COL4A5基因c.2215C＞G(p.Pro739Ala)错义突变可导致Alport综合征,也可能导致FSGS,提示Ⅳ型胶原基因突变存在肾脏疾病表型异质性.
关键词： 局灶节段性肾小球硬化 COL4A5基因 基因突变 表型异质性 -
X连锁的缺失突变致Alport综合征的家系研究
目的对表现为家族性血尿并伴性遗传的Alport综合征家系进行临床及基因研究，以发现其可能的致病基因及致病位点。方法肾穿刺明确病理类型，肾组织及皮肤Ⅳ型胶原染色，外显子测序方法进行基因测序及验证，同时对患者的血及尿液进行分析。结果对该家系中7个患病者进行研究，血尿表现为肉眼血尿，无眼及耳损害，已有两人肾功能衰竭，其中一人肾移植，先证者男性肾脏病理表现为系膜增生性病变，电镜下基底膜无增厚或变薄，免疫荧光IgM+，但Ⅳ型胶原免疫荧光无缺失。通过二代测序技术，发现先证者COL4A5(NM_000495)21号外显子发生缺失突变， c.1365_1373del TCCAGGCCC (p.Pro456_Pro458del3)，较之野生型蛋白的1685个氨基酸，突变型蛋白仅有1682个氨基酸。先证者双胞胎兄及表兄患者存在相同突变。其母及姨母为杂合缺失。先证者之父及外祖父为正常，表明该家系存在基因型表型共分离。对正常对照100例及散发病例未发现该突变，说明突变频率较低。结论本研究利用基因测序法对一Alport综合征家系进行研究，发现了新的COL4A5基因1365_1373delTCCAGGCCC (p.Pro456_Pro458del3)胶原区缺失突变。家族中有多例女性患者，再生育风险较大。
