首页 > 文献资料
-
多重竞争性荧光PCR检测X连锁Alport综合征大片段缺失突变
目的:探讨多重竞争性荧光PCR在X连锁Alport综合征分子诊断中的应用.方法:选择20例在北京大学第一医院确诊且未进行基因诊断的X连锁Alport综合征患者为研究对象,同时选择2例经多重连接依赖性探针扩增技术检测到COL4A5基因大片段缺失突变的患者作为阳性对照和1例经肾活检组织电子显微镜检查证实非Alport综合征的男性作为正常对照.首先应用多重竞争性荧光PCR技术扩增COL4A5基因53个外显子和4个参照基因,对于检测到COL4A5基因缺失第1外显子者,进而应用相同技术扩增COL4A5基因外显子1～4、COL4A6基因外显子1～4、两基因共用启动子以及3个参照基因;对于检测到拷贝数缺失者,应用琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增后的PCR产物或直接测序.结果:两例阳性对照应用多重竞争性荧光PCR技术检测到的COL4A5基因缺失突变与应用多重连接依赖性探针扩增技术检测到的COL4A5基因缺失突变一致.20例患者中6例(30％)明确了基因型,其中2例患者具有累及COL4A5和COL4A6两个基因5'端的大片段缺失,2例患者具有累及COL4A5基因30个外显子以上的大片段缺失,1例患者具有累及COL4A5基因至少1个外显子的大片段缺失,1例患者具有COL4A5基因缺失13个碱基的小的缺失突变,未检测到重复突变.结论:多重竞争性荧光PCR技术可用于检测X连锁Alport综合征大片段缺失突变,是对该病分子诊断检测方法的重要补充.
-
中国人群中苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因大片段缺失突变分析
目的 分析苯丙酮尿症(PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因大片段缺失突变的类型及分布情况.方法 2006至2014年北京协和医院产前诊断中心和甘肃省医学遗传学中心共对953例PKU患者进行了PAH基因诊断,对其中43例经Sanger测序仍存在未知突变的PKU患者采用多重连接依赖式探针扩增技术(MLPA),进行PAH基因的外显子缺失或重复分析,并采用间隙PCR(Gap-PCR)及测序技术确定缺失突变的断点位置.结果 43例PKU患者的47个未知突变等位基因中,22例患者检测到24个大片段缺失/重复突变等位基因,占突变性质不明等位基因的51.1％(24/47).其中缺失突变6种,分别是Ex1 del3758突变(10个)、Ex4_5del突变(4个)、Ex4_7del突变(3个)、Ex1 del5329ins56突变(3个)、Ex3del6599ins8突变(2个)、Ex4del突变(1个);重复突变1种,为Ex12dup(1个).在这些缺失/重复突变中出现频率较高的为:Ex1del3758 (21.3％)、Ex4_5del(8.5％)、Ex4_7del(6.4％).结论 中国人群中存在PAH基因大片段缺失突变,具有明显的热点突变种类.
关键词： 苯丙酮尿症 苯丙氨酸羟化酶 大片段缺失突变 多重连接依赖式探针扩增
