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儿科细菌感染性疾病检测血清前白蛋白水平分析
目的：分析前白蛋白（PA）在儿科细菌感染性疾病诊断中的临床意义。方法采用胶乳增强免疫比浊法检测90例细菌感染性疾病患儿和86例健康体检儿童的血清标本中 PA 含量，同时对全血样本中的白细胞（WBC）进行计数，并对检测结果进行比较分析。结果实验组 WBC 结果高于正常组，两组比较差异有统计学意义或高度统计学意义（P ＜0．05或 P ＜0．01）；血清 PA 水平低于正常组，两组比较差异有统计学意义（P ＜0．01）；实验组经1个疗程治疗后 PA 明显升高，WBC 降低明显。与治疗前比较，差异有统计学意义或高度统计学意义（P ＜0．05或 P ＜0．01）。结论血清 PA 检测有助于儿科细菌感染性疾病的诊断和疗效观察，对炎症和组织损伤的鉴别诊断、疗效观察、病情监测和预后判断等方面均有重要临床价值，值得临床推广应用。
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胶乳增强免疫比浊法测定心型脂肪酸结合蛋白的方法学评价
目的：对胶乳增强免疫比浊法定量测定血清心型脂肪酸结合蛋白（ H－FABP）的方法进行临床实验评价。方法分析胶乳增强免疫比浊法测定H－FABP的精密度、线性范围、前带反应、回收率和干扰因素，并考察其与酶联免疫吸附法的相关性。结果胶乳增强免疫比浊法测定血清H－FABP批内精密度的高值与低值变异系数分别为0．54％、1．56％；批间精密度的高值与低值变异系数分别为0．58％、1．8％，回收率为96．2％～99．3％。线性测定良好，可检测范围为2．5 ng／mL～160 ng／mL，标准品曲线回归方程为Y＝1．02X＋0．31，标准品检测相关性R2≥0．995。跟国外同类试剂相比较，曲线回归方程为Y＝0．97X＋0．13，检测相关性R2＝0．998。实验组血清H－FABP检测结果为（78．3±10．4）ng／mL，与对照组相比差异有统计学意义。结论胶乳增强免疫比浊法测定血清H－FABP快速、准确、可靠，适用于临床急性心肌梗死的早期诊断。
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佳木斯地区健康成人血清胱抑素c参考值范围调查
目的:测定佳木斯地区健康成人血清胱抑素C(Cys-C)值,建立本地区血清胱抑素C正常参考值范围.方法:采用胶乳增强免疫比浊法测定在本院体检科体检的单位职工526例健康成人血清胱抑素C值.结果:健康人群血清胱抑素C值参考范围(95％双侧可信区间)为0.62～1.12mg/L,平均为0.85±0.08mg/L.表明526例健康人群血清胱抑素C浓度呈正态分布,但随着年龄增高呈上升趋势.男女性别之间血清胱抑素C值浓度差异无统计学意义(P＜0.05).结论:建立本地区健康人群血清胱抑素C值参考范围,为临床对相关疾病的诊疗提供参考数据.
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视黄醇结合蛋白两种测定方法的可比性与不同真空采血管间干扰性评价
目的 观察视黄醇结合蛋白(RBP)免疫比浊法(340nm波长)和胶乳增强免疫比浊法(600nm波长)两种检测方法的可比性,以及不同采血管的影响差异.方法 用三种采血管,随机抽取40例样本,由同一操作者在同一生化仪上,用两种不同方法学的RBP试剂进行检测.并用SPSS17.0统计软件进行处理,以P＜0.05为有统计学意义.结果 普通无抗凝剂采血管用两种方法测定比较,P ＞0.05无显著性差异；免疫比浊法用肝素抗凝采血管与普通无抗凝剂管相比,有显著性差异(P＜0.05)；胶乳增强免疫比浊法用分离胶采血管与普通无抗凝剂管相比,有显著性差异(P＜0.05).结论 视黄醇结合蛋白(RBP)两种检测方法的检测结果具有可比性,可应用于临床；免疫比浊法(340nm波长)受肝素抗凝管干扰影响结果；胶乳增强免疫比浊法(600nm波长)受分离胶采血管干扰影响结果.
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胶乳增强免疫比浊法测定胃蛋白酶原Ⅱ的不精密度和线性观察
目的 对胶乳增强免疫比浊法测定胃蛋白酶原Ⅱ( PGⅡ)进行初步方法学评价,为临床应用提供依据.方法 依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS) EP5-A及EP10-A2文件提供的方法,对胶乳增强免疫比浊法测定PGⅡ进行初步的评价.结果 PGⅡ的低值样本批内变异系数(CV)为2.05％、批间CV为1.60％、日间CV为3.92％、总CV为4.70％；高值样本批内CV为1.70％、批间CV为1.21％、日间CV为3.79％、总CV为4.32％.当PGⅡ浓度分别为9.6、24.7、39.8 μg/L时,相对偏倚分别为-0.18、-0.47、- 0.39μg/L,总不精密度分别为4.98％、2.39％、2.71％.测试间的携带污染差异无统计学意义(P＞0.05).线性回归方程为y=0.9757X -0.0168,决定系数(R2) =0.9987.结论 胶乳增强免疫比浊法测定PGⅡ的精密度符合EP5-A文件标准,具有良好的重复性.线性、偏倚、总不精密度及抗交叉污染能力均达到EP10-A2文件标准,符合临床应用要求,适用于实验室常规测定.
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免疫比浊法D二聚体测定在全自动生化分析仪上的使用
目的 对胶乳增强免疫比浊法D二聚体试剂定量测定血浆D二聚体的方法进行临床实验评价.方法实验评价包括精密度、线性测定、前带试验、相关性、回收实验以及干扰实验.结果胶乳增强免疫比浊法测定血清D二聚体批内精密度测定变异系数(CV)为1.8%～3.9%,批间精密度测定CV为3.6%～4.5%,回收率在95.2%～99.3%.线性测定良好,可达60μg/mL,回归方程为Y=1.007X-0.253 6,不同浓度的标准品检测相关性r2=0.999 7,Y=1.004 8X-0.045 4.对胆红素、血红蛋白、三酰甘油、纤维蛋白原及相关联物质可溶性纤维蛋白、D单体均具有很好的抗干扰能力.结论利用胶乳增强免疫比浊法在全自动生化仪上测定D二聚体的结果符合临床使用的要求.
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均相酶免疫法与胶乳增强免疫比浊法检测甘胆酸的方法学比较
目的 对均相酶免疫法和胶乳增强免疫比浊法检测甘胆酸(CG)进行方法学比对,为临床实验室选择合适的检测方法提供参考.方法 对2种方法的阳性率、试剂盒批内精密度、线性范围分别进行比较,再分别用2种方法检测248例临床标本,对结果进行统计分析.结果 均相酶免疫法和胶乳增强免疫比浊法检测CG的阳性率分别为53.23％和51.21％,阳性符合率为97.58％;批内精密度实验中高值血清变异系数(CV)分别为1.13％和2.65％,低值血清CV分别为3.52％和7.51％;线性评价试验中,均相酶免疫法线性回归方程为Y=1.068 2X+0.421 6,相关系数(r) =0.995 7;胶乳增强免疫比浊法线性回归方程为Y=1.016 1X+0.875 2,r=0.997 7.2种方法临床标本检测结果回归方程Y=1.156X+0.543,决定系数(R2)=0.98.结论 2种检测方法具有良好的一致性,其测定结果准确、稳定、可靠,能满足临床检测需求;但均相酶免疫法检测稳定性显著优于胶乳增强免疫比浊法.
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胶乳增强免疫比浊法定量测定血浆中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的方法学评价及临床应用
目的：对胶乳增强免疫比浊法（LEIA）定量测定血浆中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）进行方法学评价并探讨其初步的临床应用。方法应用美国临床实验室标准化协会（ CLSI）的标准化评价方案评价LEIA测定血浆NGAL的不精密度、回收率、线性范围、抗干扰性、稳定性等指标。同时测定86例2型糖尿病（T2DM）患者（其中包括41例糖尿病肾病（DN）患者）、40名体检健康者（正常对照组）的血浆NGAL水平。结果LEIA测定血浆NGAL 低、高水平的批内变异系数（ CV）分别为3．76％、1．79％；日间 CV 分别为6．62％、3．45％。平均回收率为97．3％～104．6％；在0～5000μg／L内线性良好，线性范围内偏差＜8％。与进口同类试剂盒（粒子增强免疫比浊法）具有高度相关性（R2＝0．9966），两种检测方法在200和700μg／L处的偏倚分别为3．66和11．79μg／L，均满足厂家规定的要求。总胆红素≤600μg／L、血红蛋白≤10 g／L、维生素C≤0．6 g／L、甘油三酯≤15 mmol／L时对LEIA测定血浆NGAL均无明显干扰；试剂在仪器2～8℃的条件下放置，至少可保存稳定35 d；20名健康体检者血浆NGAL水平均处于厂家声明的参考区间内。正常对照组、T2DM组和DN组血浆NGAL水平呈逐步增高趋势，各组间差异均有统计学意义（P均＜0．01）。血浆NGAL与血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cys C）、肌酐（Cr）呈正相关（相关系数分别为0．58、0．43，P均＜0．01）。结论 LEIA测定血浆NGAL具有较高的灵敏度和精密度，所测结果准确可靠，能直接在自动生化分析仪上使用，操作简便、快速，适用于大批量测定。
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自制胱抑素C免疫诊断试剂的性能评价
目的：评价自主研发的胱抑素（Cyc）C免疫诊断试剂（终点法）在自动化检测血清中Cyc C浓度的性能。方法：采用奥林巴斯AU680全自动生化分析仪，经重复性、线性试验后，测定血清中Cyc C浓度，进行方法学评价及与美国Diazyme Cyc C试剂（终点法）比较。结果：试剂在两个水平质控下测定的变异系数（CV）分别为2.62%和1.79%，在0~8 mg/L浓度范围内，线性良好。两种试剂测定血清Cyc C浓度的相关系数较好，相关系数r=0.995。结论：自主研发的Cyc C试剂盒操作简便、快速、准确、稳定，安全性及有效性符合临床应用要求，可以满足大批量临床样本的常规和自动化分析，是一种值得推广的诊断试剂。
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两种方法检测糖化血红蛋白结果的对比分析
目的 比较2种方法测定糖化血红蛋白(HbAlc)的结果之间的差异.方法 采集糖尿病患者静脉全血标本,使用两种方法,即胶乳增强免疫比浊法在日立7170A全自动生化分析仪上,与高效液相色谱法(HPLC)在全自动糖化血红蛋白仪BIO-RAD D10上,同时测定其HbAlc,对结果进行比较分析.结果 HPLC(X)与胶乳增强免疫比浊法(Y)测定结果呈明显正相关(r=0.9682)；回归方程:y=1.127x-0.004.但胶乳增强免疫比浊法测定HbAlc的结果值较HPLC法明显偏高(P＜0.01),以HPLC法为参照,胶乳增强免疫比浊法结果的相对偏倚为12.65％.结论 实验室应尽量采用HPLC法为检测方法,或以其为参考方法对胶乳增强免疫比浊法进行校准或设置相应的参考区间,以提高结果的准确性与可靠性.
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重组人胱抑素C重链单域抗体的制备
研究在大肠杆菌中表达重组人胱抑素C(Cystatin C,Cys C)重链单域抗体(Variable domain of the heavy chain of heavy-chain antibody,VHH),经纯化和复性后,建立测定人血清Cys C的胶乳增强免疫比浊法(Particle enhanced turbidimetric immunoassay,PETIA).根据大肠杆菌编码蛋白的特性设计Cys C重链单域抗体编码基因序列,人工合成目的基因克隆至PET32a(+)载体中,构建重组人Cys C重链单域抗体原核表达质粒PET32a(+)-Cys C重链单域抗体,测序鉴定正确后转入大肠杆菌BL21中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,所获得的目的抗体经Ni-NTA亲和层析法进行纯化,通过稀释复性,SDS-PAGE鉴定其纯度.Cys C重链单域抗体化学偶联胶乳颗粒,建立PETIA法测定人血清Cys C.SDS-PAGE电泳分析显示,表达的Cys C重链单域抗体相对分子质量约为53 k,经Ni-NTA亲和层析法纯化后抗体纯度达90％以上,复性回收率为60％左右.用Cys C重链单域抗体建立的测定人血清Cys C的PETIA,能检测到血清中的Cys C含量.成功构建Cys C重链单域抗体原核表达系统并获得了有活性的Cys C重链单域抗体,该抗体可用于建立测定Cys C的PETIA法,为下一步开发Cys C的免疫检测试剂盒奠定了基础.
关键词： Cys C重链单域抗体 大肠杆菌 包涵体 Ni-NTA亲和层析 复性 血清 胶乳增强免疫比浊法 -
血清胱抑素C测定在Ⅱ型糖尿病肾病早期诊断中的临床应用
目的:探讨血清胱抑素C(Cys C)检测在糖尿病肾病早期临床诊断中的价值.方法:采用胶乳增强免疫比浊法测定糖尿病150例患者与健康对照组100例血清Cys C浓度比较,同时测定血尿素、肌酐.结果:(1)Cys C浓度:无DN组1.221±0.42 mg/L,对照组1.09±0.37 mg,L,两组比较差异无统计学意义(P<0.05);在糖尿病肾病组(DN)3组中,血清Cys-C浓度升高,Ⅲ期DN组2.00±0.32 mg-L,与无DN组比较(P<0.05).Ⅳ期DN组>Ⅲ期DN组(P<0.01),Ⅴ期DN组>Ⅳ期DN组(P<0.01).(2)血清尿素和血清肌酐浓度,无DN组、Ⅲ期DN组分别与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),Ⅳ、Ⅴ期DN组血清尿素、血清肌酐浓度水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.01).结论:血Cys C检测对糖尿病肾病早期的临床诊断具有较大的实用价值.
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血清胃蛋白酶原在胃腺癌诊断中的临床价值
目的：探讨血清胃蛋白酶原（PG）在胃腺癌诊断中的应用价值。方法使用胶乳增强免疫透射比浊法分别检测20例浅表性胃炎、20例萎缩性胃炎、20例胃溃疡及68例胃腺癌患者的血清PGⅠ和PGⅡ含量，计算胃蛋白酶原比值（PGR），并结合病理和病情分期进行比较和ROC曲线分析。结果胃腺癌组患者血清PG I含量和PGR显著低于浅表性胃炎组、萎缩性胃炎组和胃溃疡组，差异有统计学意义（P均＜0.05）；胃溃疡组患者PG Ⅰ含量明显高于浅表性胃炎组、萎缩性胃炎组和胃腺癌组，差异有统计学意义（P均＜0.05）。萎缩性胃炎组患者血清PGⅠ含量和PGR也较浅表性胃炎组和胃溃疡组明显降低，差异具有统计学意义（P均＜0.05）；而浅表性胃炎组、萎缩性胃炎组、胃溃疡组和胃腺癌组患者的血清PGⅡ含量基本保持一致，差异无统计学意义（P均＞0.05）。此外，血清PGⅠ含量和PGR的ROC曲线下的面积（AUC）为0.961和0.963（P均＜0.05）；胃腺癌患者PGR水平与胃腺癌分化程度具有一定的相关性。结论血清PGⅠ含量和PGR对胃腺癌的诊断价值较高。
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羧基化聚乙烯基萘纳米微球的制备和应用
以乙烯基萘(VN)为聚合单体，采用乳液聚合法制备聚乙烯基萘(PVN)纳米微球。通过对其羧基化与β2微球蛋白(β2-M)抗体偶联，制成免疫检测试剂。分别用聚苯乙烯(PS)和 PVN 检测试剂测定β2-M 含量，数据经统计学处理和分析，对自制的 PVN 纳米微球胶乳增强免疫比浊( LE-TIA)检测试剂的性能进行评价。自制的羧基化 PVN 纳米微球免疫试剂成功对标准样本进行了检测并在一定范围内有较好的线性，比 PS 检测试剂更加灵敏。利用该研究采用的方法和条件可以成功制备粒径大小可控、单分散的羧基化PVN 纳米微球，是比 PS 更优的 LETIA 新载体，具有很好的临床应用前景。
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胶乳增强免疫比浊法测定KL-6的方法学评价
目的 对胶乳增强免疫比浊法(LEIA)检测唾液酸化糖链抗原(KL-6)进行方法学评价,判断其能否满足临床要求.方法 在贝克曼库尔特AU5421全自动生化分析仪上利用LEIA法检测血清KL-6,参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)的标准化评价方案评价LEIA法检测血清KL-6的精密度、回收率、线性范围、抗干扰性、稳定性等指标.结果 LEIA法检测血清KL-6在(50~5000)U/ml范围内线性良好(y=0.9923 x-0.0776,r2=0.9981),线性范围内偏差<10%;高、低浓度样本批内不精密度评价变异系数CV分别为2.60%、2.63%,日间不精密度评价变异系数CV分别为3.13%、4.07%;平均回收率为100.4%;总胆红素≤200mg/l、血红蛋白≤6g/L、脂肪乳≤5%,对该法无明显干扰;试剂在仪器内(2~8)℃的条件下放置,至少可保存稳定29d;与化学发光法比较,回归方程为y=0.9581 x+14.3206,r2=0.9989,两法高度相关(P<0.01).结论 在全自动生化分析仪上利用LEIA法测定KL-6操作简便、快速,检测结果准确可靠、重复好、线形范围较宽,与化学发光法比较有良好的相关性,符合临床实验室要求.
关键词： 唾液酸化糖链抗原KL-6 胶乳增强免疫比浊法 方法学评价 -
免疫比浊法测定心型脂肪酸结合蛋白及其对急性心肌梗死早期的诊断价值
目的 用胶乳增强免疫比浊法测定心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP),评价其作为心肌标志物在急性心肌梗死(AMI)早期的诊断价值.方法 根据临床特点、心电图表现及冠脉造影结果,将高度疑诊为AMI的患者79例分为AMI组48例和非AMI组31例,动态测定各患者H-FABP、肌钙蛋白Ⅰ(CTn-Ⅰ)、肌红蛋白(Mb)血清水平;同时选择健康者103例,作为正常组.建立胶乳增强免疫比浊法正常人H-FABP基线分泌及比较不同年龄、性别分布,比较3种标志物在各时间点预测AMI的敏感度、特异度、阳性预告值、阴性预告值等.结果 正常人参考范围为2.21 μg/L～8.47 μg/L,不同年龄、性别比较,除9岁～28岁组与29岁～51岁组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)外,其他各组间比较,差异均具有统计学意义(P ＜0.05);H-FABP释放动力学与Mb相似,与CTn-Ⅰ比较,H-FABP早期预测AMI的灵敏度高,特异度差,阳性预告值及阴性预告值相比在多个时间点差异有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).结论 H-FABP虽然特异度较差,但早期预测AMI的敏感度高,AMI患者早期进行H-FABP的测定有重要的临床价值.
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降钙素原胶乳增强免疫比浊检测方法的评估
目的 对降钙素原(PCT)检测的胶乳增强免疫比浊法进行性能评估,并与化学发光法进行比较分析,判断其临床可接受性.方法 按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)的标准,对降钙素原(PCT)检测的胶乳增强免疫比浊法进行精密度、线性、抗干扰及方法学评价,并与化学发光法进行比较.结果 在0.5 μg/L和2.0 μg/L医学诊断水平,胶乳增强免疫比浊法的批内和日间CV值分别＜5.0％和2.0％.检测线性范围为0.05 μg/L ～ 60 μg/L,线性范围内偏差＜5.0％.胶乳增强免疫比浊法与化学发光法具有良好的相关性,平均偏倚分别为0.4 μg/L和0.6μg/L,其差异无统计学意义.胶乳增强免疫比浊法抗干扰性强,标本总胆红素(≤600μmoL/L)、血红蛋白(≤400 mg/dl)、三酰甘油(≤1 000 mg/dl)、类风湿因子(≤200 IU/ml)对PCT的测定均无影响.结论 PCT胶乳增强免疫比浊法与化学发光法具有良好的相关性,因其检测时间短,费用相对较低,因此具有良好的市场前景.
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新诊断的成人非症状性癫痫体液免疫变化及意义
目的：探讨体液免疫在新诊断的成人非症状性癫痫发病机制中的作用。方法采用胶乳增强免疫比浊法测定56例新诊断的成人非症状性癫痫（实验组）和141例正常成人（对照组）血清Ig A、Ig G、Ig M、C3、C4的水平。结果癫痫实验组血清IgA水平[（2.21±1.14）g/L]显著低于正常组[（2.32±0.75）g/L ，F＝9.76，P＜0.01]，而血清IgG、IgM、C3、C4水平在癫痫组及对照组间无显著差异（P＞0.05）。实验组内血清IgA水平按性别、发作类型及病因分类比较亦无显著差异（P＞0.05）。结论低水平血清Ig A可能为成人非症状性癫痫的血生化标志之一，对研究成人非症状性癫痫的发病机制，探索成人非症状性癫痫的免疫治疗途径、研发新药提供了理论基础。
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癫(癎)患者血清胱抑素C水平的测定
目的 探讨胱抑素C (cystatin C,Cys C)在不同类型及不同病因癫(癎)发病机制中的作用.方法 采用胶乳增强免疫比浊法测定95例癫(癎)(实验组)和95例正常人(对照组)血清Cys C的水平.结果 实验组Cys C血清水平(1.26±0.68)mg/L明显高于对照组(0.84±0.13) mg/L,差异具有统计学意义(F=28.84,P＜0.01),各组Cys C血清水平性别差异无统计学意义(P＞0.05).在实验组中,按病因分类及按发作类型分类后,两两比较Cys C值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 高水平血清Cys C可能为癫(癎)的血生化标志之一,对研究癫(癎)新药提供了理论基础.
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胶乳增强免疫比浊法测定HbAlc
目的对胶乳增强免疫比浊法测定糖化血红蛋白(HbAlc)进行方法学评价.方法按照要求,进行精密度、准确度和可报告范围的评估实验.结果该方法的线性范围为2%～16%,批内CV为1.02%～2.50%,批间CV为1.47%.结论胶乳增强免疫比浊法测定HbAlc的结果符合临床对糖尿病病人的治疗监测要求.
